荷斯坦奶牛乳中上皮粘蛋白MUC1的多态性研究

本实验采用十二烷基硫酸钠--聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)研究了50头荷斯坦牛乳的MUC1的生化遗传特性.实验结果表明荷斯坦牛乳MUC1呈现多态性,呈现出一条或两条迁移率不同的区带,从中共发现5种分子量分别为196kd、190kd、183kd、176kd、156kd的复等位基因的MUC1区带.由此可知,荷斯坦牛乳MUC1基因座受A、B、C、D、E5个复等位基因支配,表现出6种基因型.     

牦牛乳中上皮粘蛋白MUC1的遗传多态性研究

采用SDS－PAGE研究了108头麦洼牦牛和98头九龙牦牛乳MUC1的生化遗传特性，结果表明；牦牛乳MUC1呈现出多态性，表现为一条或两条迁移率不同的区带。SAS－PAGE分析发现4种分子量的MUC1区带，依次为A：208kd,B;200kd,C:196kd,D185kd，分子量大于荷斯坦牛。麦洼牦牛MUC1基因座受A、B、C、D4个复等位基因支配，有9种基因型；九龙牦牛乳MUC1基因座受A、C、D3个复等位基因支配，显示5种基因型，两品种牦牛乳MUC1基因型分布差异极显著（P＜0.01），并且均偏离哈代－温伯格定律（P＜0.01），麦洼牦牛乳MUC1基因座遗传变异程序大于九龙牦牛。     

中国荷斯坦牛牛乳生化组成及乳蛋白遗传多态性

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了中国荷斯坦牛脱脂乳，乳清及酪蛋白组分，并对乳中酪蛋白，乳清蛋白和上皮黏蛋白MUC1的遗传多态性进行了研究。结果显示，脱脂乳和乳清中，分别以CN和β-Lg含量占优势；在CN中以α－CN和β－CN含量为主，而κ－CN含量相对较低，中国荷斯坦牛乳中β－Lg,κ-CN和MUC1均表现出遗传多态性，α－La,αs1-CN,β-CN呈单态，中国荷斯坦牛平均基因一致度（J），基因多样度（H）和有效等位基因数（Ne)分别为0＝6305，0．3695和1．5860。     

中国荷斯坦牛乳铁蛋白基因5′侧翼区的遗传多态性与体细胞评分的关联分析

利用PCR-R FLP技术检测了来自30个公牛家系的610头中国荷斯坦牛乳铁蛋白(LF)基因5′侧翼区的基因多态性,并用最小二乘法分析了不同基因型与乳中体细胞评分的关系。结果表明:扩增片段在LF基因启动子区的-3727(C/G)、-3717(A/G)存在连锁碱基突变,在所检测的样本中发现3种基因型CCAA、CGAG和GGGG,频率分别为0.674、0.300和0.026,等位基因G和A频率分别为0.824和0.176。该位点突变对体细胞评分达到极显著水平(P<0.01),GGGG基因型的体细胞评分数极显著小于CGAG和CCAA基因型(P<0.01),CGAG基因型的体细胞评分数显著小于CCAA基因型(P<0.05)。本研究结果表明,乳铁蛋白基因该突变位点对中国荷斯坦牛乳房炎抗性有很大的遗传效应,可用于中国荷斯坦牛分子标记辅助选择。     

山羊乳中上皮黏蛋白MUC1遗传多态性与产羔数的相关性研究

采用SDS-PAGE法分析9个山羊群体乳中上皮黏蛋白MUC1遗传多态性,并通过构建的线性模型,采用最小二乘法分析乳MUC1位点遗传多态性与产羔数的相关性。结果表明:(1)9个山羊群体中,乳MUC1在SDS-PAGE上均呈现出了丰富的遗传多态性,表现为1条或2条迁移率不同的区带,317个个体共检测到7个不同分子质量的MUC1区带,分别代表A、B、C、D、E、F、G7个等位基因,共有17种基因型。(2)乳MUC1位点对山羊产羔数的影响达到显著水平(P<0.05);基因型为CC、EE和FF的个体产羔数的最小二乘均值显著大于基因型为BB、BD和CF的个体最小二乘均值(P<0.05)。因此,说明山羊乳MUC1遗传多态性有望作为产羔数的有效遗传标记。     

水牛乳和荷斯坦牛乳中五种常量元素含量的测定

对摩本杂水牛(摩拉水牛×德宏水牛)乳和荷斯坦牛乳中的5种常量元素进行测定.采用火焰光度法测定钾、钠含量,火焰原子吸收分光光度法(FAAS)测定钙、镁含量,磷钼酸比色法测定磷含量.结果表明,水牛乳中钾、钠含量极显著低于荷斯坦牛乳(P<0.01),钙、磷含量极显著高于荷斯坦牛乳(P<0.01),两种牛乳中镁含量差异不显著(...     

荷斯坦牛TLR6基因多态性分析

为研究中国荷斯坦牛TLR6基因的多态性,确定其等位基因数以及核苷酸变异位点,探讨其遗传特性,采用PCR-SSCP技术对303头荷斯坦牛的TLR6基因进行了遗传多态性检测。结果表明:TLR6基因在扩增区域的209 bp处发生G→A的错义突变,导致TLR6蛋白中第70位天冬氨酸(Asp)变为天冬酰胺(Asn),并产生AA、BB、AB三种基因型,基因型频率分别为0.214 5、0.122 1和0.663 4,经χ~2适合性检验,荷斯坦牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。说明中国荷斯坦牛TLR6基因多态性丰富,该位点可以作为荷斯坦牛抗病育种的分子标记位点。     

荷斯坦牛、西门塔尔牛和三河牛乳中常规成分的胎次变化

选自呼和浩特、通辽和呼伦贝尔地区饲养的1～5胎健康无病的荷斯坦牛、西门塔尔牛和三河牛1胎、3胎及5胎的泌乳牛各10头，一年分4次采集乳样，每个胎次的重复数为40头；探讨荷斯坦牛、西门塔尔牛和三河牛乳中氨基酸含量的胎次变化。结果显示，1胎荷斯坦牛乳中氨基酸的总量（ATT）显著高于5胎牛（P〈0．05），1胎荷斯坦牛乳中必需氨基酸的总和（EAA）明显高于3胎和5胎牛（P〈0．05）；1胎西门塔尔牛乳中TAA、EAA和NEAA的总量均显著高于3胎牛，而3胎牛的又显著高于5胎牛的（P〈0．05）；1胎三河牛乳中TAA总量显著高于3胎牛，而3胎牛的又显著高于5胎牛的（P〈0．05）。3胎和5胎三河牛乳中EAA含量显著低于1胎牛（P〈0．05），1胎和3胎三河牛乳中NEAA含量显著高于5胎牛（P〈0．05）。总之，随着胎次的增长荷斯坦牛、西门塔尔牛和三河牛乳中氨基酸的含量呈明显下降的态势（P〈0．05），其中，西门塔尔牛和三河牛更为明显。     

云南德宏水牛乳基本组分的研究

本实验采用乳品分析仪对云南德宏奶水牛与荷斯坦牛乳中乳糖、乳脂、乳蛋白、总固形物、非脂固形物等含量进行测定。同时采用SDS-PAGE对乳蛋白各组分进行分离,并利用凝胶成像系统进行扫描定量。结果表明,德宏奶水牛乳中乳脂、乳糖、乳蛋白、总固形物、非脂固形物含量都极显著高于荷斯坦牛乳(P0.01)。酪蛋白百分含量在两个品种乳蛋白中占优势。德宏奶水牛乳蛋白中α-乳白蛋白含量显著高于荷斯坦牛乳(P0.05),而β-乳球蛋白含量显著低于荷斯坦牛乳(P0.05),血清白蛋白和酪蛋白则差异不显著(P0.05)。     

成都麻羊乳上皮黏蛋白MUC1的遗传多态性研究

采用SDS-PAGE研究成都麻羊乳上皮黏蛋白MUC1的遗传多态性,并以金堂黑山羊、乐至黑山羊、自贡黑山羊、藏山羊作对照进行比较分析。结果表明:成都麻羊与对照山羊乳MUC1的多态性丰富,成都麻羊有7种基因型、5个等位基因优势基因为C、D、E,金堂黑山羊7种基因型、6个等位基因优势基因为B、C、D,乐至黑山羊6种基因型、6个等位基因优势基因为B、C、D,自贡黑山羊5种基因型、5个等位基因优势基因为A、C、D,藏山羊3种基因型、3个等位基因优势基因为C、D。乳MUC1的基因型、等位基因的分布品种间有差异;根据乳MUC1等位基因频率对供试山羊品种进行聚类分析,成都麻羊与金堂黑山羊的遗传距离最小(D=0.2507)先聚为一类,再依次与乐至黑山羊(D=0.2831)、自贡黑山羊(D=0.3721)、藏山羊(D=0.4752)聚为一大类,结果较好的反映了成都麻羊与对照山羊品种间的亲缘关系。     

Soluble scute proteins of healthy and ill desert tortoises (Gopherus agassizii)

OBJECTIVES: To characterize protein composition of shell scute of desert tortoises and to determine whether detectable differences could be used to identify healthy tortoises from tortoises with certain illnesses. ANIMALS: 20 desert tortoises. PROCEDURES: Complete postmortem examinations were performed on all tortoises. Plastron scute proteins were solubilized, scute proteins were separated by use of sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and proteins were analyzed, using densitometry. Two-dimensional immobilized pH gradient-PAGE (2D IPG-PAGE) and immunoblot analysis, using polyclonal antisera to chicken-feather beta keratin and to alligator-scale beta keratin, were conducted on representative samples. The 14-kd proteins were analyzed for amino acid composition. RESULTS: The SDS-PAGE and densitometry revealed 7 distinct bands, each with a mean relative protein concentration of > 1 %, ranging from 8 to 47 kd, and a major protein component of approximately 14 kd that constituted up to 75% of the scute protein. The 2D IPG-PAGE revealed additional distinct 62- and 68-kd protein bands. On immunoblot analysis, the 14-, 32-, and 45-kd proteins reacted with both antisera. The 14-kd proteins had an amino acid composition similar to that of chicken beta keratins. There was a substantial difference in the percentage of the major 14-kd proteins from scute of ill tortoises with normal appearing shells, compared with 14-kd proteins of healthy tortoises. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: The major protein components of shell scute of desert tortoises have amino acid composition and antigenic features of beta keratins. Scute protein composition may be altered in tortoises with certain systemic illnesses.     

中草药制剂对热应激奶牛泌乳性能、抗氧化能力及免疫功能的影响

为探讨复合中草药制剂对热应激奶牛泌乳性能、抗氧化能力及免疫功能的影响,选择产奶中后期的健康中国荷斯坦奶牛20头,按泌乳时间和产奶量相近的原则均分为A、B、C和D 4组。A组为对照组,饲喂基础日粮;B、C和D组分别在每头牛的基础日粮中添加50,100和150 g/d水平的复合中草药制剂。每天测定产奶量,在试验的第1(添加复合中草药制剂之前)、20和40天逐头采集血样,测定不同剂量复合中草药制剂对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡率、血液抗氧化酶GSH-Px、CAT基因及血淋巴细胞凋亡相关基因Bcl-2、p53表达水平的影响。结果表明,B、C和D组的日产奶量较对照组分别提高了20.26%(P<0.05),24.20%(P<0.05)和16.98%(P>0.05);乳中体细胞数较对照组分别降低了21.68%(P<0.05),29.88%(P<0.05)和24.22%(P<0.05);奶牛血液抗氧化酶GSH-Px、CAT基因的表达水平分别比对照组提高了5.00%(P>0.05),13.00%(P<0.05),6.00%(P>0.05)和5.00%(P>0.05),16.00%(P<0.05),3.00%(P>0.05);奶牛血淋巴细胞平均凋亡率分别比A组降低了18.20%(P>0.05),17.86%(P>0.05)和12.51%(P>0.05);奶牛血淋巴细胞Bcl-2在20,40 d时均极显著高于A组,全期的平均水平分别比对照组高出105.00%(P>0.05),113.00%(P>0.05)和57.00%(P>0.05);p53基因的表达水平在20,40 d时均极显著低于A组,全期的平均水平分别比对照组降低了24.00%(P>0.05),28.00%(P>0.05)和20.00%(P>0.05)。试验组中,C组奶牛的日产奶量、体细胞数、血液抗氧化酶活性、淋巴细胞凋亡相关基因表达等指标要优于B、D组;而血液淋巴细胞凋亡率指标为B组最好。说明复合中草药制剂能有效改善热应激奶牛的泌乳性能、抗氧化能力及免疫功能,且在本试验条件下,每头牛日粮中添加100 g/d水平的效果要优于50及150 g/d水平。     

金属硫蛋白对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡基因和HSP70基因表达的影响

为探讨金属硫蛋白(MT)对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡基因和HSP70基因表达的影响及其机理,选取25头中国荷斯坦奶牛经产泌乳母牛,随机均分为A、B、C、D、E 5组,分别按每头0(对照),16.0,24.0,32.0和40.0 mg颈静脉注射Zn-MT,于试验第1(注射Zn-MT之前),7和14天逐头采取血样,测定不同剂量的外源性MT对热应激奶牛血淋巴细胞HSP70、Bcl-2、Bax和p53基因表达水平的影响。结果表明,补给外源性MT后,4个试验组奶牛的产奶性能都有不同程度提高,其中B组奶牛的产奶量比A、C、D和E组分别高出20.94%(P＜0.05),15.83%(P＞0.05),10.94%(P＞0.05)和8.85%(P＞0.05);各试验组HSP70基因的表达水平都有所上升,其中D组比对照组高出130.00%,达到显著(P＜0.05)水平;各试验组Bcl-2基因的表达水平均高于对照组,其中C组达到显著(P＜0.05)水平;B、D组Bax基因的表达水平和C、E组p53基因的表达水平较对照组分别降低了22.00%,13.00%和22.00%,34.00%,但均未达到显著(P＞0.05)水平。说明外源性MT能改善热应激奶牛的产奶性能并有效调控奶牛血淋巴细胞HSP70、Bcl-2、Bax和p53基因的表达水平,且表现出较为明显的剂量效应。     

Production and characterization of monoclonal antibodies against an avian group A rotavirus.

Fifteen monoclonal antibodies (MAbs) against an avian group A rotavirus were cloned and characterized. Eight of the 15 MAbs had neutralizing activity (N-MAbs). Five of the N-MAbs (1G1, 5B8, 4E2, 3G1, 2E3) were VP4-specific by radioimmunoprecipitation assay (RIPA), and two N-MAbs (2D11, 6E8) were possibly VP7-specific (faint bands by RIPA). One N-MAb (4H12) of undefined protein specificity cross-reacted with serotype 3 simian rotaviruses. The other seven N-MAbs did not cross-react with any of the eight distinct serotypes of human and mammalian rotaviruses tested. Of the seven non-neutralizing MAbs, three were VP6-specific (3H10, 4B12, 5F6), two were VP8-specific (6C9, 1D1), one was VP4-specific (4E9), and one was of undefined protein specificity (1B11). Four non-neutralizing MAbs recognized only avian group A rotavirus in cell-culture immunofluorescence tests (6C9, 1D1, 4E9 and 5F6), whereas two MAbs (3H10 and 4B12) cross-reacted with all human and animal rotaviruses tested. The MAb 1B11 did not recognize any human rotavirus serotypes but cross-reacted with all nonhuman animal rotavirus serotypes. The MAbs produced in this study should be useful for the detection and further characterization of avian group A rotaviruses.     

外源性金属硫蛋白对中国荷斯坦奶牛产能性能和内分泌的影响

选取24头泌乳奶牛,随机分成A、B、C和D,4组,分别按剂量0.0(对照),6.0,12.0和16.0 mg/头静脉注射金属硫蛋白(MT),以探讨外源性MT对奶牛产能性能和内分泌的影响.结果表明,B组1～30 d、C组1～45 d的标准产奶量显著高于A组,C组乳脂率在31～45 d较A组有显著改善;B组INS含量30 ...     

饲粮不同氮硫比对藏羔羊空肠组织形态和空肠微生物区系的影响

肠道是动物重要的消化和吸收的器官.为探究饲粮中不同氮硫比对藏羔羊空肠组织形态和空肠微生物区系的影响,试验选择初始条件相似的60日龄藏羔羊150只,随机分为5组,分别用氮硫质量比为10.5?1(A)、9?1(B)、7.5?1(C)、6?1(D)、4.5?1(E)的饲粮饲养至180日龄,试验期结束每组随机屠宰6只,采集空肠组织和内容物分析饲粮氮硫比对空肠组织形态和空肠微生物菌群结构及功能的影响.结果显示:1)B组和E组的空肠绒毛长度和绒毛宽度显著高于其余3组(P<0.05),并且A、D组的绒毛长度显著高于C组(P<0.05);D组的隐窝深度显著高于其他4组(P<0.05);B、E组的绒毛长度/隐窝深度显著高于A、C、D组(P<0.05);B组和E组的黏膜层厚度显著高于C、D组(P<0.05);B组的肌肉层厚度均显著高于其他组(P<0.05).2)B、E两组的操作分类单元数(operational taxonomic units,OTU)、Chao1指数显著高于A、C组(P<0.05);B、E组的Shannon指数显著高于其他组(P<0.05);C、D两组的Simpson指数显著高于B、E组(P<0.05);B、D、E组的Ace指数显著高于A、C组(P<0.05).3)从门和属水平上分析空肠微生物菌群结构:在门水平下5组的优势菌门均为厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria).其中B组厚壁菌门的丰度显著高于C组(P<0.05);A、C组的放线菌门丰度显著高于B、E组(P<0.05);B组和E组拟杆菌门的丰度显著高于A、C两组(P<0.05);E组的变形菌门丰度显著高于B组和D组(P<0.05).在属水平下:5组的优势菌属均为红球菌属(Rhodococcus)、短杆菌属(Brevibacterium)、克里斯滕森氏菌R7菌群(Christensenellaceae-R-7-group)、Quinella属和理研菌科RC9肠道菌群(Rikenellaceae-RC9-gut-group).A、C、D组红球菌属的丰度显著高于B、E组(P<0.05),B组的克里斯滕森氏菌R7菌群丰度显著高于其他组(P<0.05),A、B组的Quinella丰度显著高于D、E组(P<0.05).4)16S rRNA基因组的PICRUSt功能预测结果显示,空肠微生物菌群功能主要集中在转录、碳水化合物运输与代谢、氨基酸的运输与代谢等方面,表明藏羔羊空肠细菌在提高宿主碳水化合物和蛋白质的代谢与吸收方面至关重要.综上,氮硫比在B和D水平下均有利于藏羔羊空肠组织形态的发育,并且可提高空肠微生物菌群多样性和丰富度,从经济效益上考虑,氮硫质量比为9?1时更符合藏羔羊的高效养殖.     

Comparison of surface antigens of some Campylobacter fetus subsp. fetus strains of ovine origin by polyacrylamide gel electrophoresis and immunoblotting.

Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblotting were used to identify and to compare the surface antigens of eight C. fetus subsp. fetus strains. Seven strains (one of serogroup A and six of serogroup B) were isolated from aborted ovine fetuses, while one strain (serogroup A) originated from an aborted calf fetus. Saline extracts at 56 degrees C and 100 degrees C were used as antigens. Antisera were produced in rabbits. In saline extracts (56 degrees C) of the strains at least 19 fractions were identified by SDS-PAGE, with molecular masses ranging from approx. 4,800 to 205,000. The major bands appeared at 205,000, 66,000, 31,500, 25,000, 21,000 and 17,500. Despite the fact that the strains were cultured from 4 different sheep flocks and belonged to serogroup A or B, the SDS-PAGE profiles of the strains were very similar. When boiled (100 degrees C) extracts were used, a band migrating at 32,500 in sheep strains and a band at 97,500 in the calf isolate were missing. Most of the bands obtained by SDS-PAGE could be identified also by the immunoblot procedure. A or B type specificity of the ovine isolates was due to an LPS fraction, migrating at approx. 21,000, while the other LPS fractions appearing under this region although reacted with antisera did not influence the type specificity. Using alkaline extracts (pH 12) in SDS-PAGE, LPS fractions gave more pronounced profiles. In two of our C. fetus subsp. fetus isolates, plasmids with a molecular mass of 31,500 were identified.