鸡白血病病毒群特异性抗原的抗体固相放射免疫分析及应用

固相放射免疫分析(SPRIA)试验的各成分的适宜条件是:固相载体抗体浓度为40μg/ml;~(125)Ⅰ-兔抗 AMVgs 的 IgG 为200万 cpm/ml;被检样品1:5稀释;对照 gs抗原为0.2μg/ml。可检出的最小抗原量为0.05μg/ml.检查了 SPF 雏鸡、NDV 等抗原以及 gs 抗原和 AMV 血浆毒等样品,证明 SPRIA 是特异的.SPRIA 与琼扩方法检查现地雏鸡的符合率为84.6%.     

马冠状病毒抗体的间接ELISA检测方法的建立

将含有马冠状病毒N蛋白(ECV-N)的重组杆状病毒rBac-ECV-N感染Sf9昆虫细胞,以表达的ECV-N蛋白作为抗原,以酶标记的鼠抗马IgC特异性单抗为二抗,建立了检测马冠状病毒抗体的ELISA方法.研究结果表明,ECV-N蛋白最佳包被浓度为10μg/mL初提重组蛋白,马血清以1:100稀释,酶标记的抗马IgG单克隆抗体工作浓度1:5 000.可以检出抗马冠状病毒血清抗体.利用该方法对来自3个国家的1064份马血清进行了检测,检测结果表明:国内711份马血清中检测出13份阳性;澳大利亚335份马血清中检测出31份阳性;瑞典18份马血清均为阴性.该间接ELISA方法的建立,为马冠状病毒感染的预防和控制,出入境检验检疫提供了一种新的检测方法.     

ELISA 检测新城疫病毒抗体

用鸡红细胞凝集解脱法提纯的新城疫病毒(NDV)抗原包被酶标板,最适抗原浓度为0.1μg～8μg/孔;鸡血清的最适稀释倍数为1:400.该抗原与马立克氏病等七种禽病抗血清不发生交叉反应.与血凝抑制试验(HI)比较.在检测的233份血清样本中,ELISA 阳性124份(占53%);HI 效价1:8以上者为84份(占36%);84份 HI 阳性样品,ELISA 亦为阳性;40份 HI 阴性样品,ELISA却为阳性;没有 ELISA 阴性而 HI 阳性的样本.两法可追求检测结果一致的为193/233(占83%).     

鼻疽固相溶血试验的研究

研究确定用1:2.5～1:3补体与1:2鼻疽血清等量混合后,滴加于含1:5鼻疽抗原致敏红细胞的琼脂糖凝胶反应盘的相应孔中,置于4℃或15～29℃下感4～12h,可以产生直径在8.1mm以上的溶血环。对健马及马传贫等6种传染病马血清做检测,则不引起溶血反应。以31匹M~+马血清的CFT结果和扑杀10匹鼻疽马血清的CFT及病理组织学变化做依据,确定了固相溶血试验(S_p—HLT)的判定标准,即溶血环直径在6.0～7.0mm的为阴性,7.1～3.0mm的为疑似,8.1mm以上的为阳性。以此标准检测了411匹马(来自鼻疽疫区的368匹.鼻疽清净区健马43匹)。结果,疫区马血清CFT阳性率为5.2％,Sp—HLT阳性率为7.6％;43匹健马血清的CFT和Sp—HLT均为阴性。Sp—HLT检测方法简便,快速,检出率较CFT略高,从病理组织学角度考虑并非假阳性。由此认为,用Sp—HLT代替CFT进行鼻疽检疫是可行的。     

马循环免疫复合物检测法的建立及其应用

确定了检测马循环免疫复合物(CIC)的聚乙二醇(PEG)沉淀试验及固相C_(1q)-ELISA的最适条件.PEG沉淀试验/C_(1q)-ELISA对健康马(n=60)、传贫马(n=83)和注射传贫疫苗马(n=79)的检测结果(OD值,x±2S)分别为:O.066±0.042/0.288±0.206,0.124±0.067/0.712±0.344和0.081±0.053/0.425±0.217).经统计检验,这两种方法相关性显著,3类马血清的OD值相互差异非常显著.本实验结果提示,马传染性贫血的发病与循环免疫复合物有关.     

应用斑点-ELISA 检测猪瘟血清抗体的研究

应用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)orngonC_(24)株作抗原,混合纤维素微孔滤膜作固相载体,制备检测猪瘟(HC)抗体的快速诊断膜,进行斑点-ELISA(Dot-ELISA)试验.结果,以 HC 高免血清和自然感染 HC 猪阳性血清作阻断试验,证明了本方法的特异性:猪轮状病毒阳性血清、猪流行性腹泻阳性血清、猪细小病毒阳性血清及断奶后未注射任何疫苗的健康猪血清均为阴性;断奶前后和未注苗仔猪血清几何平均效价低于1:40;注苗猪效价为1:70～1:160;注苗后又爆发,流行 HC 场的猪血清效价为16:10～1:320;未注苗爆发 HC 场的猪血清抗体效价与未注苗猪相似。本法特异性强、敏感性高、操作简便快速,适于现地 HC 免疫监测及流行病学调查.     

新疆哈密地区畜禽弓形体病的调查

1988年,对哈密地区二县一市的37个乡部分畜禽,以间接血凝(IHA)试验进行了血清学调查。弓形体 IHA 抗原、阴、阳性血清:为中国农科院兰州兽医研究所诊断制剂组生产,抗原与阳性血清效价不低于1:1024。人血清1029份.检测方法:按中国农科院兰州兽医研究所弓形体制剂组的《弓形体病间接凝集试验操作细则》进行,被检血清抗体滴度达到1:64判为阳性.结果:受检血清的阳性数,羊为22/1505,猪为19/326,鸡为32/187,牛、马、骆驼血清均为阴性。应当指出,哈密市的受检羊、猪、鸡血清的阳性数多于巴里坤县和伊吾县。哈密地区流防所对当地人血清弓形体病的检出阳性数为:哈族16/305,维族9/365,汉族9/359.在以上抽检人中有牧民256人,阳性率为4.21%;学生(14～16岁)208人,阳性率为4.28%;职工324人,阳性率2.16%;农民226人,阳性率2.6%。     

大通县役用马骨营养状况的检测

对大通县32匹役用马的骨营养状况指标进行检测.结果表明,大通县役用马的血清钙浓度为3.06mmol/L±0.31 mmol/L;血清无机磷浓度为1.53mmol/L±0.30mmol/L;血清碱性磷酸酶活性为68.13IU/L±17.73 IU/L;血清羟脯氨酸含量为16.27μmol/L±3.μmol/L.均处于正常值范围内,公(骟)、母马组之间无显著的差异(P＞0.05).     

地方株马驽巴贝斯虫Bc48截短体单克隆抗体的制备及应用

本研究旨在建立马驽巴贝斯虫抗体的快速、准确检测方法。以纯化的马驽巴贝斯虫Bc48基因片段的原核表达产物免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备单克隆抗体,并利用重组抗原与单克隆抗体建立间接竞争ELISA(CI-ELISA)方法检测马驽巴贝斯虫抗体。结果显示:制备出3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1H2、7F4、11F4,通过对CI-ELISA条件筛选得出,抗原最佳包被浓度为0.19μg·mL~(-1),单克隆抗体11F4的最佳工作浓度为1∶3.2×10~5,通过检测30份马驽巴贝斯虫阴性血清及20份阳性血清,确定该检测方法临界值为45%;特异性试验发现,该CI-ELISA方法不与感染马泰勒虫病的阳性血清发生反应,具有特异性;用所建立的CI-ELISA检测临床血清90份,与标准c-ELISA试剂盒总符合率为92.2%、阳性符合率92.1%、阴性符合率94.1%。试验结果表明,该CI-ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便。基于单克隆抗体(11F4)与重组蛋白(HIS-Bc48)所建立的CI-ELISA特异性、重复性好,可为新疆马驽巴贝斯虫的检测、监控提供有效手段。     

伊犁部分地区马泰勒虫抗体的检测

为了解伊犁部分地区马场感染马泰勒虫(Theileria equi)的情况,试验将重组原核表达质粒pGEX4T-1/EMA1转化至大肠杆菌菌株BL21表达系统中,诱导表达56 ku的重组蛋白(EMA1);经KCl方法切胶纯化后作为间接ELISA包被抗原,对伊犁州六个不同地区随机采集的样品(n=352)进行马泰勒虫抗体的检测。结果表明:以GST-EMA1蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA法可明显区分马泰勒虫阳性血清和健康马血清。在所检测的血清样品中,马泰勒虫血清抗体阳性率为7.4%(26/352),其中乌尊布拉克乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为7.3%(4/55)、昭苏镇的马泰勒虫血清抗体阳性率为13.2%(10/76)、萨尔阔布乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为8.2%(6/73)、察汗乌苏乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为6.5%(4/62)、喀拉苏乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为2.0%(1/49)、喀夏加尔乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为2.7%(1/37);伊犁州等六个地区马场马泰勒虫血清抗体阳性率随年龄而改变,其中7岁马匹的马泰勒虫的血清抗体阳性率最高。说明马泰勒虫在伊犁地区马匹中普遍存在,应该加强对该病的检测、监控。     

水貂循环免疫复合物检测方法的建立及应用

本试验建立了检测水貂循环免疫复合物(CIC)的微量PEG沉淀比浊法和固相C_(1q)—SPA—ELISA.用这两种方法检测了38例健康水貂血清、126例阿留申病(AD)病貂血清.微量PEG沉淀比浊法的结果(OD值,(?)±S)为:健康水貂0.081±0.042,AD病貂0.198±0.066;固相C_(1q)—SPA—ELISA的结果(OD值,(?)±S)为:健康水貂0.245±0.057,AD病貂0.503±0.167,敏感性为0.25μg/mL.经统计学处理,健康水貂与AD病貂血清OD值之间呈极显著差异(P<0.01),表明水貂阿留申病的病理过程与CTC有关.建立的两种方法均具有快速、简便、重复性好和敏感性高等特点,两种方法的相关性显著.     

O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准：抗体效价大于或等于1：32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1：16～1：32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95．5％,84．7％。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100％,免疫猪检出率为86．7％。     

抗伊氏锥虫表膜单克隆抗体的研究 Ⅱ.用抗伊氏锥虫表膜抗原McAb检测循环抗原

利用抗伊氏锥虫表膜抗原的McAb双抗体夹心法,检测了48匹健康马(骡)、5匹人工接种伊氏锥虫马(骡),9匹先用锥虫弱毒株免疫后用强毒株攻毒马(骡)共278份血清的循环抗原(CA),同时用常规间接ELISA检测了相应的循环抗体(CAb)。结果: 278份血清的CA、CAb阳性率无显著差异,但其阳性检出时机不完全吻合;人工接种马(骡)的CA阳性检出率高于CAb,于接虫后经1-2个CA高峰而死,濒死前4/5动物的CA呈现阳性,免疫马(骡)在攻虫前CA即可呈现阳性,多经1-3个CA高峰后逐渐转阴;人工接种马(骡)的CA水玉高于免疫马(骡),二次攻虫后的CA水平高于首次。     

马血清抗原固相放射免疫分析适宜条件的探讨

应用氯胺T法标记~(125)I-兔抗马血清IgG的血清IgG(兔抗马IgG).其活度为7万cpm/μl,比放射性约2μci/μg,纯度97%。马血清包被的最适浓度为1000陪,0.2ml(以pH 96 0.05M碳酸盐缓冲液作稀释液),在37℃作用2小时、再置4℃过液。标记~(125)I-兔抗马IgG最适条件是:400万cpm/ml(含800ng兔抗马IgG);与包被抗原结合是37℃作用2小时.检测抗原的灵敏度可达8ng.     

马立克氏病病毒单克隆抗体研究 Ⅰ.马立克氏病病毒和火鸡疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

采用马立克氏病病毒(MDV)和火鸡疱疹病毒(HVT)感染细胞匀浆抗原免疫 BALB/C 小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术获得了13件分泌 MDV 特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中9株 McAb 对三个血清型毒株均呈阳性反应;BC_3对血清Ⅰ、Ⅲ型毒株反应阳性:CE_(11)和 CB_3对血清Ⅰ型毒株呈阳性反应;EE_(12)对血清Ⅲ型发生反应.13株 McAb 既具有 ELISA 特性(最高效价1:100000),     

检测多种动物弓形虫抗体的SPA-ELISA方法的建立及初步应用

利用重组弓形虫MIC3作为包被抗原,SPA作为偶联物建立了可检测多种动物弓形虫抗体的SPA-ELISA方法.确定了抗原最适包被质量浓度为2.6 mg/L;血清最适稀释度为1:160,作用时间为45 min;优化了酶标SPA工作浓度,作用时间及底物显色时间.对已知阳性血清的检测下限可达1:6 400,其敏感性是IHAT方法的50～100倍.对临床4种动物共332份血清进行检测,阳性率由高到低依次为:SPA-ELISA(39.4%)>MAT(39.1%)>IHAT(13.1%).以上结果表明,SPA-ELISA不失为一种适用于多种动物弓形虫抗体检测的理想方法.     

马传贫酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法的应用及评价

通过对补反、琼扩双阳性及补反或琼扩单阳性的79份免疫马血清和52份自然感染马血清的ELISA终点滴度测定,确定了被检血清适宜稀释倍数。还证明采用多头份健康马混合血清作为不同地区被检血清的阴性对照是适宜的. 对1.625份不同地区的马血清的检测,进一步证明本法是特异性的,具有可重复性。用ELISA检测30份国际参照血清,所获结果与琼扩试验完全一致。     

岔口驿马产区马腺疫和马鼻肺炎血清学调查

为明确岔口驿马产区内马腺疫(equine strangles)和马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis, ER)流行情况，保障岔口驿马产业健康稳定发展，特进行血清学调查。按随机采样方式，采集甘肃省天祝县16个乡镇的岔口驿马血清510份，用ELISA方法进行马链球菌(Streptococcus equi,S.equi)和马疱疹病毒(Equine herpesviruse, EHV)抗体检测。结果显示，510份马血清中检测出S.equi抗体阳性血清73份，总阳性率为14.31%;检测出EHV抗体阳性血清66份，总阳性率为12.94%。其中，1岁龄以内马匹S.equi和EHV抗体阳性率分别为1.04%、8.33%,1岁至3岁龄马匹抗体阳性率分别为27.19%、14.04%,3岁至5岁马匹抗体阳性率分别为17.33%、14.67%,5岁以上马匹抗体阳性率分别为10.00%、13.33%,且存在同时检测出S.equi和EHV抗体阳性的情况，混合抗体阳性率为6.27%。岔口驿马产区应针对马腺疫和马鼻肺炎，因地制宜，科学制定防控措施。     

应用间接血凝(IHA)检测绵羊棘球蚴病的感染率

采用新鲜的绵羊棘球蚴囊液,经过处理,用最适浓度(380μg/ml)致敏绵羊红细胞,制成IHA诊断液,用IHA法对321只(份)成幼年改良羊、藏羊进行棘球蚴病感染率的检测,结果表明:成年改良羊棘球蚴感染率为86.05％,幼年改良羊感染率为85％,血清滴度达1:64—1:4096;成年藏羊感染率为74％,幼年藏羊感染率为51.06％,血清滴度1:64—1:256。15只(份)标准阴性羊血清全部为阴性,血清滴度0—1:4。30只(份)标准阳性羊血清,28只(份)为阳性,血清滴度为1:64—1:4096,阳性符合率达93.33％。此方法敏感性高,可用于棘球蚴病的流行病学调查及防治效果考核。     

间接荧光抗体试验诊断马骡伊氏锥虫病的研究

以人工感染伊氏锥虫的小鼠血液涂片为抗原,建立了IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体的方法,并对伊氏锥虫病马、同群马、健康马、非伊氏锥虫病马血清作了检测。伊氏锥虫病马和无症状同群马的抗体阳性率分别为97％(33/34)和12％(18/150);25匹健康马血清伊氏锥虫抗体均为阴性;84份非伊氏锥虫病马血清的IFA试验均为阴性,未出现交叉反应。多数病马发病一周内的血清IFA试验即为阳性。3匹病马血清抗体消长动态观察结果表明,病马于治疗后110天,血清IFA试验仍为阳性。本试验表明,IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体,敏感性高、特异性强,对无症状的感染马也能检出,可用于本病的早期诊断和血清流行病学调查。