Bcl-2基因RNA干扰对体外培养的鹅卵泡颗粒细胞凋亡、增殖和孕激素分泌的影响

根据已发表的Bcl-2基因序列设计3对siRNA（Small interference RNA）序列，构建干扰表达载体，转染体外培养的鹅卵泡颗粒细胞，48h后利用流式细胞术（Flow cytometry，FCM）检测颗粒细胞Bcl-2蛋白表达量、凋亡和增殖情况，收集细胞培养液用放射免疫分析法检测孕激素（P）的分泌水平；此外，还检测了F1～F4卵泡、最小的排卵前卵泡（The smallest preovulatory follicle，SPF）、小黄卵泡（Small yellow follicle，SYF）和闭锁卵泡（Atresic follicle）颗粒细胞Bcl-2蛋白表达和凋亡情况。结果表明：（1）各级卵泡颗粒细胞Bcl-2蛋白的表达存在着差异，正常卵泡颗粒细胞Bcl-2蛋白表达量显著高于闭锁卵泡（P〈0．05），SPF颗粒细胞Bcl-2蛋白表达水平显著高于SYF（P〈0．05）；（2）干扰组Bcl-2蛋白表达水平显著低于所有对照组（P〈0．05），而细胞凋亡指数（Apoptosis index，AI）、增殖指数（Proliferation index，PI）和P分泌水平均高于对照组。     

中药制剂抗肉鸡热应激作用机理研究

将50只1日龄AA肉仔鸡饲养（高温条件下饲养）于MFD-233型人工气候室内,随机分成对照组和试验组,试验组肉仔鸡7日龄时在日粮中添加0．1％的中药,连用7d;然后分别于14,21日龄取法氏囊,用流式细胞仪检测应激状态下法氏囊细胞凋亡率和细胞周期时相变化,用Western—blot方法检测法氏囊中Bcl-2和caspase-3基因蛋白表达水平。试验结果表明：试验组肉仔鸡14,21日龄法氏囊细胞凋亡率明显低于对照组,差异显著（P〈0．05）;细胞周期时相发生变化,G1期细胞数量明显减少（P〈0．05）,G2期细胞数量明显增加（P〈0．05）,S期细胞数量变化不大（P〉0．05）;试验组肉仔鸡法氏囊中Bcl-2蛋白表达量高于对照组且差异显著（P〈0．05）,而caspase-3基因蛋白表达水平与Bcl-2相反,对照组表达量明显高于试验组且差异显著（P〈0．05）。这表明中药制剂对缓解热应激造成的法氏囊细胞凋亡作用可能是通过上调Bcl-2和下调caspase-3基因蛋白表达水平来完成的。     

PLGA微球包裹生长抑素融合基因表达质粒对家兔生长的影响

将HBsAg与Somatostatin（SS）融合基因克隆到真核表达载体pIRESlneo—CMV，构建了pIRESlneo—HBsAg／SSM。应用脂质体介导转染CHO细胞，96h提取细胞总RNA，RT-PCR鉴定融合基因表达；并收集细胞上清，ELISA法测定上清中HBsAg表达情况，结果为阳性。大量提取pIRESlneo—HBsAg／SSM质粒，用Poly D，L—lactide co—glycolicacid（PLGA）微球包裹，注射Vc獭兔后肢胫前肌，以注射生理盐水獭兔为对照。动物常规饲养45d，观察日增重并测定血清中IGF-Ⅰ、SS含量以及抗HBsAg抗体水平。结果显示注射后15～30d，质粒注射组日增重较对照组高106．8％（P〈0．01）；30d时，血清中IGF-Ⅰ浓度质粒组比对照组高29．2％（P〈0．05）；检测整个过程中血清中SS含量，发现注射后30d时明显低于对照组，且出现整个试验过程的最低值；质粒注射组血清中抗HBsAg抗体水平在注射后30d时出现峰值，这与SS含量出现最低值相吻合。本试验结果表明HBsAg与SS融合基因免疫獭兔，可以促进动物生长。     

添加酪蛋白酶解物对宫内生长迟缓仔猪肠道生长发育的影响

为研究酪蛋白酶解物对宫内生长迟缓（IUGR）仔猪肠道生长发育的影响，本试验选择15头IUGR新生仔猪，分为新生对照组（N组）、酪蛋白组（C组）和酪蛋白酶解物组（CH组），以牛乳为基础日粮，C和CH组分别加入10％的酪蛋白溶液和10％的酪蛋白酶解物溶液，人工饲喂3d后取样。结果显示，CH组仔猪小肠长度显著高于C组（P〈0．05），CH组空肠后段和回肠前段的绒毛高度／隐窝深度显著高于C组（P〈0．05）；CH组小肠黏膜的蛋白质含量显著高于C组（P〈0．05），同时其DNA含量显著高于C和N组（P〈0．05）；CH组的麦芽糖酶活性和相对活性均显著高于C和N组（P〈0．05或P〈0．01），CH组的碱性磷酸酶（AKP）活性显著高于C组（P〈0．05）。结果表明，酪蛋白酶解物有促进新生IUGR仔猪肠道组织生长的作用，同时能够刺激IUGR仔猪小肠黏膜上皮细胞的增殖和提高小肠黏膜麦芽糖酶和碱性磷酸酶的活性。     

半胱胺盐酸盐对仔猪胃黏膜细胞H+-K+-ATPase活性和生长抑素表达的影响

将分离的仔猪胃粘膜细胞分为4组，在含10％胎牛血清的DMEM高糖培养液中培养24h后，分别在新鲜的基础培养液中添加0（对照组）、0．001（低水平组）、0．01（中水平组）和0．1（高水平组）g／L的半胱胺盐酸盐，继续培养20h后收集细胞。测定细胞H^＋-K^＋-ATPase活性，同时用相对定量RT—PCR法测定细胞H^＋-K^＋-ATPase和生长抑素（SS）mRNA的相对丰度。结果表明：（1）低水平的半胱胺盐酸盐对H^＋-K^＋-ATPase的表达和活性没有影响（P〉0．05），但中、高水平的半胱胺盐酸盐显著提高了H^＋-K^＋-ATPase的表达和活性（P〈0．05），其中H^＋-K^＋-ATPase mRNA的相对丰度分别提高了36％和44％，H^＋-K^＋-ATPase活性分别提高了57％和53％。（2）低水平半胱胺盐酸盐对SSmRNA的表达没有影响（P〉0．05），中、高水平的半胱胺盐酸盐显著提高了SSmRNA的相对丰度（P〈0．05），提高幅度均为52％。以上结果提示半胱胺盐酸盐可增强体外培养的仔猪胃黏膜细胞H^＋-K^＋-ATPase的表达及活性，而这一作用可能由SS所介导。     

四君子汤对脾虚北京鸭胃肠组织中血管活性肠肽和生长抑素mRNA表达的影响

为从分子水平阐明脾虚与胃肠激素之间的关系以及健脾中药四君子汤防治脾虚的机制，首次用北京鸭复制脾虚证模型，以半定量的RT—PCR方法检测其腺胃、十二指肠和空肠血管活性肠肽（VIP）和生长抑素（SS）mR—NA表达的变化。结果表明，脾虚组腺胃VIPmRNA表达显著高于对照组（P〈0．05），十二指肠和空肠VIPmR—NA表达有所升高（P〉0．05）；脾虚组腺胃（P〈0．01）、十二指肠（P〈0．05）和空肠（P〈0．01）SSmRNA表达显著低于对照组。经四君子汤预防和治疗后二者恢复到接近对照组水平。提示脾虚证与VIP和SS有一定关系，四君子汤对VIP和SS水平的影响可能是该方治疗脾虚证的作用机制之一。     

玉米赤霉烯酮对Leydig细胞凋亡及caspase-9、caspase-3蛋白表达的影响

以不同浓度的玉米赤霉烯酮（Zearalenone,zEA）对大鼠睾丸间质细胞（Leydig）细胞进行染毒,采用噻唑蓝比色法观察了ZEA对Leydig细胞活力的影响;流式细胞术分析检测了ZEA对细胞的凋亡率、线粒体膜电位变化的影响;Westernblotting等技术检测了Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP蛋白的表达情况。结果显示,ZEA可明显抑制睾丸Leydig细胞的活力（染毒各组与对照组比较P〈0．05）,40mg／L染毒组相对活力为40．67％;与对照组比较,5、10、20mg／LZEA染毒组睾丸Leydig细胞凋亡率均极显著升高（P〈0．05）,呈明显剂量关系;线粒体膜电位变化测定显示,各染毒组与对照组比,线粒体膜电位均下降（P〈0．05）,且有明显的剂量关系;Westernblotting分析显示,与对照组比较,5、10、20mg／LZEA染毒组Bax、caspase-9、caspase-3、PARP蛋白表达均上调,bel-2蛋白表达均下调。结果表明,ZEA能诱导大鼠睾丸间质细胞发生凋亡,Bax、Bcl-2、caspase-9、caspase-3等基因参与ZEA诱导Leydig细胞凋亡的调控。     

复合酶和益生素对肉鸡生产性能及氮、磷利用率的影晌

本文旨在探讨复合酶和益生素对肉鸡生产性能及氮、磷利用率的影响。1日龄AA肉仔鸡90只随机分为对照组、复合酶组和益生素组,每组3个重复,每个重复10只鸡,试验期6周。结果表明：复合酶组和益生素组日增重与对照组相比前期（1～21日龄）提高7．35％（P〈0．05）和2．71％（P〉0．05）、后期（21～42日龄）提高4．25％（P〈0．05）和5．55％（P〈0．05）、全期（1～42日龄）提高5．19％（P〈0．05）和4．69％（P〈0．05）;料重比分别比对照组降低6．12％（P〈0．05）和4．08％（P〈0．05）（1～21日龄）、5．oo％（P〈0．05）和6-36％（P〈0．05）（21～42日龄）、6．06％（P〈0．05）和5．56％（P〈0．05）（1～42日龄）。复合酶组比对照组鸡粪中氮、磷的含量分别降低14．92％（P〈0．05）、11-30％（P〈0．05）,氮、磷利用率提高15．11％（P〈0.05）、8．49％（P〈0．05）;益生素组对肉鸡氮、磷含量及氮、磷利用率与对照组相比差异不显著（P〉0．05）。     

复合酶和益生素对肉鸡生产性能及氮、磷利用率的影响

本文旨在探讨复合酶和益生素对肉鸡生产性能及氮、磷利用率的影响。1日龄AA肉仔鸡90只随机分为对照组、复合酶组和益生素组,每组3个重复,每个重复10只鸡,试验期6周。结果表明：复合酶组和益生素组日增重与对照组相比前期（1～21日龄）提高7．35％（P〈0．05）和2．71％（P〉0．05）、后期（21～42日龄）提高4．25％（P〈0．05）和5．55％（P〈0．05）、全期（1～42日龄）提高5．19％（P〈0．05）和4．69％（P〈0．05）;料重比分别比对照组降低6．12％（P〈0．05）和4．08％（P〈0．05）（1～21日龄）、5．oo％（P〈0．05）和6-36％（P〈0．05）（21～42日龄）、6．06％（P〈0．05）和5．56％（P〈0．05）（1～42日龄）。复合酶组比对照组鸡粪中氮、磷的含量分别降低14．92％（P〈0．05）、11-30％（P〈0．05）,氮、磷利用率提高15．11％（P〈0.05）、8．49％（P〈0．05）;益生素组对肉鸡氮、磷含量及氮、磷利用率与对照组相比差异不显著（P〉0．05）。     

复合酶和益生素对肉鸡生产性能及氮、磷利用率的影响

该文旨在探讨复合酶和益生素对肉鸡生产性能及氮、磷利用率的影响。1日龄AA肉仔鸡90只随机分为对照组、复合酶组和益生素组,每组3个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂基础日粮,复合酶组饲喂在基础日粮上添加0．5％复合酶的日粮,益生素组饲喂在基础日粮中添加0．1％益生素,试验期6周。结果表明：复合酶组和益生素组日增重与对照组相比前期（1-21日龄）提高7．35％（P〈0．05）和2．71％（P〉0．05）、后期（21-42日龄）提高4．25％（P〈0．05）和5．55％（P〈0．05）、全期（1-42日龄）提高5．19％（P〈0．05）和4．69％（P〈0．05）;料重比分别比对照组降低6．12％（P〈0．05）和4．08％（P〈0．05）（1-21日龄）、5．00％（P〈0．05）和6．36％（P〈0．05）（21-42日龄）、6．06％（P〈0．05）和5．56％（P〈0．05）（1-42日龄）。复合酶组比对照组鸡粪中氮、磷的含量分别降低14．92％（P〈0．05）、11．30％（P〈0．05）,氮、磷利用率提高15．11％（P〈0．05）、8．49％（P〈0．05）;益生素组对肉鸡氮、磷含量及氮、磷利用率与对照组相比差异不显著（P〉0．05）。     

鸡胚骨骼肌细胞增殖和融合培养模型的建立

本实验建立了鸡胚骨骼肌细胞增殖和融合培养模型,增殖和融合培养液分别为添加5％胎牛血清(FCS)和添加10％FCS+0．5％鸡胚浸出液的DMEM培养液。结果表明:培养的骨骼肌细胞增殖和融合情况良好,可存活1周以上。胰岛素(INS,10-1 000 ng/mL)处理48 h显著促进骨骼肌细胞增殖,而100-1000 ng/mL INS处理96 h可显著促进骨骼肌细胞融合。该模型可用来研究激素、生长因子或营养物质对骨骼肌细胞增殖和分化的影响。     

牦牛IGF-II干扰载体的构建及其转染对睾丸支持细胞的影响

旨在构建干扰胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor-II,IGF-II）的重组质粒载体,研究IGF-II对牦牛睾丸支持细胞的影响。本研究设计并合成针对牦牛IGF-II的shRNA寡核苷酸,并将其克隆至pLKO.1质粒载体上,转染牦牛睾丸支持细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定的细胞株,并采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法检测IGF-II基因和蛋白的表达,采用细胞生长分析仪分析支持细胞的增殖凋亡情况。结果显示,干扰牦牛IGF-II表达的pLKO.1质粒载体构建成功,其可在睾丸支持细胞中稳定表达,且能有效抑制IGF-II基因的表达。与对照组相比,pLKO.1-shRNA2的干扰效率最显著,IGF-Ⅱ的表达量下调至19.1%（P<0.05）,且pLKO.1-shRNA2可使内源性IGF-II蛋白的表达量减少76.3%（P<0.05）。pLKO.1-shRNA2质粒转染及筛选得到的稳定细胞株培养48 h后的细胞分裂增殖活性显著低于对照组（P<0.05）。qRT-PCR结果显示,干扰内源性IGF-II后,睾丸支持细胞中的IGF-I和IGF-IIR基因表达出现了显著的上调（P<0.05）,IGF-IR与Bcl-2的表达出现了显著的下调（P<0.05）。综上表明,牦牛IGF-II干扰质粒构建成功,其转染至牦牛睾丸支持细胞有效抑制了IGF-II的表达,改变了IGF-IR与Bcl-2的表达模式,潜在影响了牦牛支持细胞的分裂增殖,具体作用机制有待进一步研究。     

Construction of IGF-II shRNA Knockdown Vector and Its Effect on Sertoli Cells in Yak

The aim of this study was to construct shRNA recombinant vector interfering insulin-like growth factor-II (IGF-II), and study the effects of IGF-II on the yak sertoli cells. The shRNA oligonucleotides targeting yak IGF-II were designed and synthesized and it was cloned into pLKO.1 plasmid vector, after transfected into yak sertoli cells, a stable cell line was obtained by puromycin selection. The relative expressions of IGF-II mRNA and protein were identified by qRT-PCR and Western blotting, respectively. The proliferation and apoptosis of sertoli cells were analyzed by proliferation measurement system. The results showed that the pLKO.1-shRNA vector interfering IGF-II was successfully constructed, which was stably expressed in sertoli cells and could interfere the expression of yak IGF-II effectively. Compared with the control group, the interference efficiency of pLKO.1-shRNA2 was the most significant, IGF-II expression down-regulated to 19.1% (P<0.05), and could reduce the expression of endogenous IGF-II protein by 76.3% (P<0.05). The stable cell line obtained by transfection and screening of pLKO.1-shRNA2 plasmid had significant lower activity of cell division and proliferation than that of control group after 48 h of culture (P<0.05). The results of qRT-PCR showed that the expressions of IGF-I and IGF-IIR in sertoli cells were significantly up-regulated (P<0.05), and the expressions of IGF-IR and Bcl-2 were significantly down-regulated (P<0.05) after interfering IGF-II. In conclusion, the interference plasmids of IGF-II were successfully constructed. After interference plasmid was transfected into yak sertoli cells, it could effectively inhibit the expression of IGF-II, change the expression pattern of IGF-IR and Bcl-2, and potentially affect the division and proliferation of yak sertoli cells, however, the specific regulation mechanism requires further studied.     

橙皮苷对3种霉菌毒素处理的HepG2细胞增殖和迁移的影响

探讨橙皮苷对3种霉菌毒素处理的HepG2细胞增殖和迁移作用的影响。采用MTT、Griess、细胞划痕愈合试验分别检测细胞活力、细胞分泌NO、细胞迁移率。结果3种毒素对HepG2细胞增殖的影响随毒素浓度的增加呈现先促进后抑制的作用,低浓度DON、OTA(0.04μmol/L和0.08μmol/L),ZEN(<2μmol/L)显著提高HepG2细胞活力及促进增殖,高浓度霉菌毒素明显降低HepG2细胞活力及抑制细胞增殖。与霉菌毒素组比较,橙皮苷组HepG2细胞活力降低及增殖减弱,表示橙皮苷能缓解霉菌毒素对细胞的毒性。与空白对照组比较,霉菌毒素组HepG2分泌NO量显著降低,不同浓度及不同霉菌毒素对NO分泌没有明显影响;与霉菌毒素组比较,橙皮苷组不同浓度DON处理的细胞分泌NO差异不显著。低浓度DON毒素(0.08μmol/L^2μmol/L)处理HepG2细胞24、36、48 h后,DON毒素能极显著促进HepG2细胞迁移,随着霉菌毒素对细胞处理时间延长细胞迁移快,而高浓度DON毒素(10μmol/L、50μmol/L)对促细胞迁移影响显著低于低浓度DON。结果低浓度DON霉菌毒素促进HepG2细胞增殖及迁移,表明DON毒素对HepG2具有潜在的致癌性,橙皮苷能抑制HepG2细胞增殖及缓解霉菌毒素毒性的作用。     

In vitro effects of 2-methoxyestradiol on canine tumour cells

The in vitro antiproliferative, apoptotic and cell‐cycle effects of 2‐methoxyestradiol (2ME₂), an endogenous oestrogen metabolite, were investigated using a variety of canine tumour cell lines. The cells were cultured under standard conditions and incubated with varying concentrations of 2ME₂. Inhibition of tumour cell proliferation was evaluated using a tetrazolium‐based colorimetric assay. DNA content analysis was performed using propidium iodide staining and flow cytometry. Cytologic analysis with Leukostat staining solution and Hoechst 33342 staining and Annexin V‐fluorescein isothiocyanate (FITC) fluorescence were used to quantify cell‐cycle distribution and apoptosis induction. Tumour cell proliferation was inhibited by 50% at concentrations of 2ME₂ ranging from 0.88 to 7.67 µM, depending on the cell line tested. Profound G₂/M phase arrest, an increase in binucleate cells and induction of apoptosis were observed in all cell lines tested, in a dose‐dependent manner. Based on these results, this compound has potential as an agent for the treatment of canine cancer and warrants further investigation. The canine lymphoma cell line, 1771, was inhibited at concentrations that may be achievable in vivo.     

Effect of constitutive expression of porcine IGFBP-3 on proliferation and differentiation of L6 myogenic cells

We have previously shown that exogenous recombinant porcine IGFBP-3 (rpIGFBP-3) suppresses proliferation and differentiation of L6 myogenic cells in an IGF-I-dependent manner and suppresses proliferation of L6 myogenic cells via an IGF-I-independent mechanism. In order to assess the effects of endogenously produced IGFBP-3, we have transfected L6 myogenic cells with a pEF6/V5 vector containing pIGFBP-3 cDNA under the control of the human elongation factor 1alpha (hEF-1alpha) promoter and with the empty vector. We have isolated a cell population that constitutively produces porcine IGFBP-3 (tL6 cells) and a stable mock transfected cell population containing the empty vector (mtL6 cells). Constitutive expression of IGFBP-3 slightly reduced the expression of IGFBP-5 but had no effect on IGFBP-4 production by L6 myogenic cells. Immunoneutralization of IGFBP-3 increased both IGF-I- and Long-R3-IGF-I-stimulated proliferation of tL6 cells (58 and 33%, respectively) (P<0.01). These data indicate endogenous pIGFBP-3, like exogenous rpIGFBP-3, suppresses the proliferation of L6 myogenic cells via both IGF-I-dependent and -independent pathways. Immunoneutralization of IGFBP-3 also increased IGF-I-stimulated differentiation (21%, P<0.05) but had no effect on Long-R3-IGF-I stimulated differentiation of tL6 myogenic cells. Results indicate that exogenous and endogenous IGFBP-3 affect proliferation and differentiation of L6 myogenic cells in a similar way. Immunohistochemical localization data reveal that pre-incubation with anti-pIGFBP-3 dramatically reduces the level of intracellular IGFBP-3 in tL6 myogenic cells indicating that endogenously produced IGFBP-3 must first be secreted before it is internalized and that anti-pIGFBP-3 prevents internalization of IGFBP-3. TL6 and mtL6 cells provide a good system to further investigate the mechanisms by which IGFBP-3 affects proliferation and differentiation of myogenic cells.     

生长抑素亚单位苗对鸡粘膜免疫的影响

在肌肉注射生长抑素 (SS)亚单位苗的基础上应用鸡新城疫弱毒苗进行消化道粘膜免疫鸡 ,显示和检查小肠粘膜中免疫球蛋白A (SIgA)阳性细胞和上皮内淋巴细胞 (iIEL)数量的变化。结果表明 ,应用SS亚单位苗首免后第 3周和第 4周 ,十二指肠中iIEL数量比对照组均显著增加(P <0 0 5) ;首免后第 3周 ,十二指肠、空肠和盲肠扁桃体中SIgA阳性细胞比仅用新城疫弱毒苗免疫组极显著增加 (P <0 0 1 ) ;首免后第 4周 ,十二指肠和空肠中SIgA阳性细胞比仅用新城疫弱毒苗免疫组极显著增加 (P <0 0 1 )。提示SS可抑制小肠粘膜中SIgA阳性细胞和iIEL的分化和增殖。SS亚单位苗可中和体内SS ,作为粘膜免疫促进剂预防家禽传染病     

二甲双胍对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响

为探究二甲双胍对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响，本研究将体外培养的牛骨骼肌卫星细胞分别用0（对照组）、1、2、4 mmol/L二甲双胍进行处理，采用CCK-8法筛选出二甲双胍作用于牛骨骼肌卫星细胞的最适浓度，接着通过EdU染色法检测二甲双胍处理牛骨骼肌卫星细胞后对其增殖的影响，然后对二甲双胍处理的牛骨骼肌卫星细胞进行体外成肌诱导分化，通过显微镜观察牛骨骼肌卫星细胞分化时期的细胞状态，然后利用Western blotting技术检测牛骨骼肌卫星细胞的分化标志因子肌球蛋白重链（MyHC）、肌细胞生成素（MyoG）在分化24、48和72 h的表达情况。结果表明，二甲双胍作用于牛骨骼肌卫星细胞的最适浓度为2 mmol/L。2 mmol/L二甲双胍处理牛骨骼肌卫星细胞后，其细胞增殖率显著降低（P<0.05），说明二甲双胍可以抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖；牛骨骼肌卫星细胞诱导分化后形成的肌管数量和直径均呈现减少趋势，牛骨骼肌卫星细胞成肌分化标志因子MyHC、MyoG在分化24、48和72 h的表达均显著低于0 mmol/L （对照）组（P<0.05），说明2 mmol/L二甲双胍能够抑制牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。研究结果表明，二甲双胍可以显著抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖及成肌分化过程。该研究为二甲双胍在肌肉发育调控及肌损伤修复方面的应用提供一定的理论依据。     

In vitro study to assess the efficacy of CDK4/6 inhibitor Palbociclib (PD‐0332991) for treating canine mammary tumours

Therapy of canine mammary tumours (CMTs) with classical antitumour drugs is problematic, so better therapeutic options are needed. Palbociclib (PD‐0332991) is an innovative and effective anticancer drug for the treatment of breast cancer in women. Palbociclib is an inhibitor of cyclin‐dependent kinase 4 (CDK4) and CDK6, which are key regulators of the cell cycle machinery and thus cell proliferation. In the present in vitro study, we investigated whether Palbociclib also represents a candidate drug to combat CMT. For this purpose, the effect of Palbociclib was analysed in P114 and CF41 cells, two CMT cell lines with an endogenous CDK4/6 co‐expression. Incubation of P114 and CF41 cells with Palbociclib resulted in a dose‐ and time‐dependent loss of phosphorylated retinoblastoma protein (pRb), a classical CDK4/6 substrate within the cell cycle machinery. Moreover, treatment of CMT cells with Palbociclib‐induced cell cycle arrest affected cell viability, prevented colony formation and impaired cell migration activity. Palbociclib also inhibited the growth of P114 and CF41 cell spheroids. Immunohistochemical analysis of canine patient samples revealed a consistent expression of CDK6 in different canine mammary carcinoma types, but an individual and tumour‐specific expression pattern of phosphorylated pRb independent of the tumour grade. Together, our findings let us suggest that Palbociclib has antitumour effects on CMT cells and that canine patients may represent potential candidates for treatment with this CDK4/6 inhibitor.     

玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞的毒性作用

采用台盼蓝计数、流式细胞仪分析等方法,离体研究玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞增殖与细胞周期的影响,结果发现:不同质量浓度(1～25 mg/L)玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞的增殖均具有显著抑制作用(P<0.05),并表现出与剂量和处理时间依赖性关系.高剂量(10～25 mg/L)ZEA使小鼠胸腺上皮细胞细胞周期显著阻滞于G2/M期(P<0.05),并存在剂量依赖性关系.这些结果表明,玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞有直接毒害作用.