猪细小病毒病弱毒疫苗免疫效力评价及临床免疫试验

为制定猪细小病毒病弱毒疫苗效力检验的标准,用3批猪细小病毒病弱毒疫苗进行接种猪与接种豚鼠的平行试验;同时进行临床免疫试验。3批疫苗接种豚鼠和猪后定期进行PPVHI抗体检测;猪于免疫后攻毒,并进行病毒分离。免疫母猪在怀孕早期进行强毒攻击,40d扑杀进行病毒分离。用3批疫苗免疫后备母猪统计产仔成绩。结果显示,豚鼠接种后21d、猪接种后7d全部产生抗体反应。免疫攻毒的猪均未从血浆和内脏中分离到病毒,而从对照猪分离到病毒;怀孕母猪强毒攻击后扑杀,胎儿病毒分离均为阴性,而对照猪胎儿病毒分离为阳性;统计数据表明免疫猪的产仔成绩比未免疫猪高,平均每窝多产活仔1.85头,少产死胎木乃伊胎0.65头。结果表明,当免疫豚鼠PPV HI≥64时,免疫猪能抵抗PPV强毒攻击,两者呈正相关;免疫母猪的攻毒试验表明免疫母猪能抵抗PPV经胎盘感染;临床免疫试验证明疫苗具有良好的免疫原性和安全性。     

豚鼠对不同剂量猪细小病毒灭活苗的抗体反应

我研究所研制的猪细小病毒(PPV)AEI灭活苗对预防因PPV引起的母猪繁殖障碍病有良好的效果。该疫苗的效力检验以豚鼠为最易感。本文采用PPV灭活苗的不同剂量,分别为1ml二次、0.5ml二次、0.5ml一次和1ml一次,免疫PPV HI阴性豚鼠,观察豚鼠抗体反应的情况。现报告如下。一、材料和方法 1、材料:7批PPV AEI灭活苗,按本所“猪细小病毒AEI灭活疫苗的制造和检验试行规程”制做,经检验质量合格。     

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定

猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1:512;阳性血清HI效价达1:1024;阴性血清HI效价＜1:8,且特异性均良好。利用制备的血凝抑制试验抗原、阳性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原、阳性血清进行交叉反应试验,结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,可用于PPV制品的统一评价。     

新购试验豚鼠猪细小病毒抗体的检测

本实验室长期从事猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的研究,最近向某实验动物中心购买6只豚鼠准备用于PPV相关试验.在试验之前我们用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验检测这些豚鼠的PPV抗体.经检测发现这6只豚鼠的PPV抗体全部阳性,现将检测情况报告如下.     

用豚鼠检测猪细小病毒N株弱毒苗的血凝抑制抗体

由于猪细小病毒（ＰＰＶ）血清型单一及其高免疫原性,使得疫苗接种成为控制ＰＰＶ感染行之有效的方法。但检测ＰＰＶ疫苗的效力要求使用ＰＰＶ血清阴性的母猪,不仅成本高,而且管理和操作费时费力,同时不容易找到ＰＰＶ血清阴性的母猪,为了解决这一问题,国外曾试图寻找一种实验动物模型作为ＰＰＶ疫苗效力检测。Ｊｏｏ等［１］曾报道用豚鼠、兔和猪对ＰＰＶ灭活苗的抗体反应,证明豚鼠和兔对ＰＰＶ疫苗的血清学反应与猪相似,提供了用实验动物作为ＰＰＶ疫苗效力试验的可能性。国内潘雪珠等［２］也证明了豚鼠对ＰＰＶ灭活苗的抗体反应…     

纳米铝胶佐剂增强猪细小病毒灭活疫苗猪体免疫的效果

将20头35日龄断奶仔猪随机分为4组,将制备的纳米铝胶佐剂猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)灭活疫苗肌肉注射免疫接种,并以常规铝胶佐剂PPV灭活疫苗组、市售PPV油乳剂灭活疫苗组为疫苗对照,生理盐水组做阴性对照,应用HI和ELISA检测接种猪的体液免疫水平,流式细胞仪检测免疫猪的细胞免疫水平。体液免疫检测结果显示,PPV纳米铝胶佐剂疫苗组能显著提高机体产生抗体的速度,在首免后第2周产生有效保护抗体水平显著高于油乳剂疫苗和常规铝胶佐剂疫苗组(P0.05),在第3周其抗体水平达到峰值;细胞免疫检测结果显示,3种疫苗均能诱导机体产生细胞免疫应答,但各组之间差异不显著(P0.05)。结果表明,以纳米铝胶为佐剂制备的猪细小病毒灭活疫苗,能显著提高机体的免疫水平,并较早刺激机体产生抗体,具有较好的免疫保护效果。     

对不同月龄仔猪抗猪细小病毒母源抗体的检测

本试验对两个猪细小病毒(PPV)污染场的不同月龄仔猪母源抗体效价进行了检测,为PPV疫苗的免疫程序提供参考。     

ISA 206佐剂配制的猪细小病毒病油乳剂疫苗的检测

为验证Seppic公司的MONTANIDElMISA 206VG佐剂对猪细小病毒病灭活疫苗的效果,本实验用Seppic ISA 206VG佐剂替代白油佐剂,配制2批猪细小病毒病灭活疫苗,检测结果:疫苗的物理性状良好,接种乳鼠全部健活,接种豚鼠后28d全部产生抗体反应。证实Seppic公司的MONTANIDElMISA 206VG佐剂配制的猪细小病毒病灭活疫苗具有良好的安全性和免疫效力。     

用血凝抑制试验检测猪细小病毒抗体

国外用血清中和试验和免疫扩散试验诊断猪细小病毒,但都不实用,比较简便的方法是血凝抑制试验(HI),用鸡红血球结果判定最理想,但成鸡个体差异大;1～2日龄鸡血球产量低。豚鼠红血球终点界限不清晰,结果难以正确判定。我们参考虫媒病毒的HI法,改变了缓冲液的配方,并降低豚鼠红血球的浓度,用于检测猪血清中的PPV抗体获得较为满意的结果。     

猪细小病毒综述

猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一.从全球报道情况来看,猪场感染PPV非常普遍,而且无论是发生过疾病的,还是没有发生疾病的猪场都可以检测到病毒存在.如果母猪在感染前既没有免疫过疫苗,也没有接触过活病毒,其针对PPV的血清抗体就会呈现阴性,抗体阴性母猪在妊娠期间一旦...     

猪细小病毒(BJ-2株)灭活疫苗免疫效力试验

用实验室制备并经初步检验合格的猪细小病毒灭活疫苗免疫豚鼠和试验猪,测定免疫豚鼠和猪的HI抗体效价,并对免疫的怀孕母猪进行攻毒,探索HI抗体效价与攻毒免疫保护的相关性.结果显示免疫后一个月所有经免疫的豚鼠、猪的HI抗体效价均达到1∶256以上,高水平的抗体可持续一个月以上;初产母猪免疫后攻毒试验显示攻毒后免疫组不出现病毒血症,且免疫攻毒组的平均窝产仔数和产活仔数均明显高于未免疫攻毒组,且胎猪的体长、体重等指标存在显著差异,试验结果充分说明该疫苗的免疫效果是非常确实的.     

水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)效力检验用实验动物抗体效价的对比研究

为了变更"水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)"质量标准中效力检验用的试验动物,试验采用血凝抑制试验方法,对比检验水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)对水貂和兔产生的抗体效价水平。结果表明:水貂和兔接种疫苗后14～180天的血清HI抗体水平差异不显著(P0. 05),均达到效力检验质量标准要求。用兔替代水貂进行水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)的效力实验的抗体监测科学、方便、可行。     

注射猪细小病毒灭活疫苗的豚鼠的抗体反应

18批AEI灭活疫苗免疫53只PPV HI阴性豚鼠,每批2～3只,免疫后全部产生抗体反应。这些豚鼠全部产生抗体的时间是第一次免疫后4周,平均HI价2442。免疫豚鼠HI抗体的持续时间大于10个月。5批灭活苗对16只HI阴性豚鼠和16头HI阴性猪的免疫比较试验结果,免疫后HI阳性率均为100％,HI抗体全部出现的时间猪为第一次免疫后1周,豚鼠为第一次免疫后3周。免疫后3～5周的平均HI价猪为3925,豚鼠为1360。     

表达猪细小病毒VP2基因的重组伪狂犬病病毒构建及其免疫原性

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)均可引起母猪的繁殖障碍疾病。本试验以PRV基因工程弱毒株rPRVSMX为载体,构建了表达PPV流行毒株VP2基因的重组PRV(rPRVSMX-VP2)。Western blot和IFA试验均证明了重组病毒在细胞中成功表达了VP2蛋白。动物试验结果证明重组病毒可以诱导猪体产生特异性的PPV抗体,首免后40 d血凝抑制抗体(HI)为1∶192±73.9,虽然低于PPV商品化灭活疫苗免疫后所产生的HI抗体,但此时免疫系统被认为是激活的水平;重组病毒诱导产生的PRV抗体与载体毒株rPRVSMX诱导产生的抗体相当。由此可见该重组毒株经过优化后,可以作为二联疫苗的候选毒株防控猪伪狂犬病和细小病毒病。     

二乙烯亚胺对猪细小病毒的灭活作用

使用新型灭活剂二乙烯亚胺(binary ethylenimine,BEI)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)进行了灭活试验,通过ST传代细胞接种法观察病毒灭活后是否出现细胞病变,并结合血凝试验检测灭活效果,确定最佳灭活方法。用3～5日龄乳鼠检测BEI灭活后的病毒培养物和相应制备疫苗的安全性,并用豚鼠检测该灭活工艺制备疫苗的效果,与传统甲醛灭活进行了比较。结果显示,终浓度为1‰的BEI在32℃情况下经20 h即可彻底灭活PPV病毒;BEI灭活的病毒制备的疫苗免疫豚鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体。     

免疫增强剂提升猪用灭活疫苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂对猪细小-乙脑二联灭活疫苗的免疫效力提升作用,将免疫增强剂以伴侣形式与疫苗共同混合免疫5~6月龄阴性后备母猪和种公猪,检测其抗体水平。结果显示,免疫增强剂与疫苗混合免疫后1周抗体全部转阳,免疫后1~6月平均抗体效价均显著高于不含免疫增强剂的常规疫苗组,表明该免疫增强剂能够显著提升猪细小-乙脑二联灭活疫苗对后备母猪和种公猪的免疫效力。     

猪细小病毒BQ株灭活疫苗免疫剂量及免疫持续期的初步研究

为确定猪细小病毒(PPV)BQ株灭活疫苗(PPV-BQ)的免疫剂量及免疫持续期,本研究与市场上销售的2种PPV灭活疫苗A和B进行了比较。试验分6组,每组免疫3头PPV抗体阴性猪,1组～3组分别免疫BQ株灭活疫苗1mL、2mL、4mL,4组～5组按照说明书免疫A、B两种PPV灭活疫苗,6组为阴性对照组(免疫油佐剂)。两周后进行二免,定期检测血清抗体水平。结果表明,注射疫苗组均产生了PPV抗体,都能持续到免疫后24周。免疫不同剂量PPV-BQ各组间抗体水平差异不显著(p0.05),PPV-BQ与PPV-A抗体水平差异不显著(p0.05),与PPV-B抗体水平差异极显著(p0.01),显著优于PPV-B。PPV-BQ1mL免疫剂量即可达到或超过同类产品的免疫效果,是较为理想的PPV灭活疫苗。     

豚鼠对猪细小病毒弱毒苗抗体反应的研究

用不同批次、不同剂量、不同保存时间的猪细小病毒N株弱毒苗接种豚鼠，观察豚鼠对PPV N株弱毒苗的抗体反应。结果4种不同剂量和3个不同批次的PPV N株弱毒苗接种豚鼠后第14天均产生抗体反应，其PPV HI效价在1：16－1：64之间，0.1ml和1ml 剂量接种豚鼠产生的PPV HI抗体水平相近，抗体持续长达12个月以上。在4℃保存0天、12个月和－20℃保存2年、3年的PPV N株弱毒苗接种豚鼠，其PPV HI价在1：16－1：32之间，说明该苗在4℃至能保存12个月，－20℃能保存3年以上。比较了不同批次疫苗接种猪和豚鼠所产生的抗体反应，结果两者相似。用3批引起豚鼠产生抗体反应的PPV N株弱毒苗接种768头后备母猪，共产仔7136头，其中健活仔6575头，平均每窝产健活仔8．56头，产死仔仅0．73头。证明豚鼠是监测PPV弱毒苗抗体的首选实验动物。     

猪细小病毒结构蛋白VP2及其疫苗的研究进展

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一,该病毒在世界范围内广泛存在并呈地方性流行, 给生猪的繁殖、发展带来了巨大的经济损失,故防制猪细小病毒病非常重要。PPV VP2蛋白是病毒粒子的主要衣壳蛋白,在体外能自我装配成病毒样颗粒,并能刺激机体产生抗PPV中和抗体,且可作为抗原转运载体,所以研究VP2对PPV新型疫苗研制至关重要。文章综述了猪细小病毒结构蛋白VP2及其疫苗的研究进展。     

猪细小病毒NS1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及南充市猪细小病毒感染的血清学调查与分析

为了建立检测猪细小病毒(PPV)野毒抗体的间接ELISA检测方法,并掌握南充市猪细小病毒的感染情况,试验以原核表达的NS1蛋白为包被抗原建立检测PPV野毒抗体的间接ELISA方法,并应用该方法对2017年采集于南充市9个区(县)的1 854份猪血清样品进行检测与分析。结果表明:建立的NS1蛋白间接ELISA方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清和PPV疫苗免疫血清均为阴性,与HI试验的符合率达98.44%。在1 854份血清样品中共检测出PPV阳性样品349份,总阳性感染率达18.82%。其中南充市9个区县均存在PPV的感染,感染率为5.45%～36.79%;规模猪场、散养户和屠宰场的感染率分别为15.04%、26.39%和17.30%;种公猪、种母猪、后备母猪、仔猪和育肥猪的感染率分别为5.88%、24.75%、23.91%、17.38%和19.13%;自繁自养、自繁+引种、自繁+购活体、购活体4种不同繁育方式的感染率分别为13.58%、21.50%、19.77%和21.12%。说明试验成功建立了检测猪细小病毒野毒抗体的间接ELISA检测方法,且南充市养猪场普遍存在猪细小病毒的感染。