用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒，减蛋综合症病毒等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７Ｃ孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗，进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＴＢＤＶ、ＩＬＴ     

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合培养相互作用研究

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用。分别将按２００倍、５００倍、１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株、肾型Ｊ株、Ｈ１２０２８／８６株,Ｈ５２和Ｈ１２０株和１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔,同时设单独培养作对照,９６小时后收取尿囊液,用对流免疫电泳法检测鸡传染性支气管炎病毒效价,用血球凝集试验检测尿囊液鸡新城疫病毒效价。结果表明,鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作用,但无抑制现象;鸡传染性支气管炎病毒浓度过大时,对鸡新城疫病毒有一定抑制作用,在适当浓度时二者之间无干扰作用。以ＮＤＶ１００倍ＩＢＶ１０００倍稀释混合作用后联合接种培养对二者效价均无明显干扰,ＮＤＶ血凝效价可达１１ｌｏｇ２,ＩＢＶ对流免疫电泳沉淀效价可达９ｌｏｇ２,效果最佳。联合培养省时、省力、节约鸡胚损耗。     

抗传染性以气管炎病毒单克隆抗体的研究

经密度梯度离心法提纯鸡胚尿囊液中的传染性支气管炎病毒Ｈ１２０，获得了较纯的Ｈ１２０抗原。动用细胞杂交瘤技术，区获得了２３株阳性杂交瘤细胞株。对２３株阳性杂交瘤细胞株进行特异性鉴定，其中３株稳定白，命名Ｍｃ。用单抗介导的间接免疫荧光抗体技术检测鸡鸡胚尿囊细胞中ＩＢＶ的方法测定Ｍｃ的ＩＢＶ的反应谱，证明Ｍｃ反应谱较广，是１株ＩＢＶ群特异性单克隆抗体。     

同胚增殖鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果观察及免疫应答反应

鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）混合在同一鸡胚中增殖,当ＮＤＶ和ＩＢＶ接种浓度控制在一定范围时,最佳收毒时间选择使ＮＤＶ有足够时间增殖到最佳滴度,且在这一时间内不至于因孵育时间过长而致ＩＢＶ毒力减弱。结果表明ＮＤＶＬａｓｏｔａ株经１０倍稀释分别与４株ＩＢＶ１０００倍稀释液等体积混合后接种,能在同一鸡胚中正常增殖,即９６ｈ收毒,血凝（ＨＡ）方法测定两种病毒的血凝价均能达到最佳滴度,其血凝价不低于各自单独增殖的滴度。４种ＩＢＶ株与ＮＤＶ同胚增殖的ＨＡ滴度进一步证实,在合适的条件下,ＩＢＶ均不对ＮＤＶ的复制产生干扰作用,４种ＩＢＶ的血凝价无明显差异。免疫试验中用同胚增殖两种病毒二联苗接种,鸡体血清中可产生抗两种病毒的ＨＩ抗体,与各自单独接种时的ＨＩ抗体水平几乎一致。本试验中制备的ＩＢ血凝抗原在４℃保存一个月,其血凝活性保持不变。ＩＢＶ微量血凝抑制（ＨＩ）试验特异性测定结果证实,用自制ＩＢＶ血凝抗原进行ＨＩ试验检测鸡ＩＢ阳性血清均能产生稳定的特异性反应,并且无交叉反应。说明ＨＩ试验是检测ＩＢＶ抗体水平的有效可行的方法。     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病,经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ＧＩＢ）,并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２株,ＨＡ效价为２＾１２,ＥＩＤ５０为１０＾－６．８１／０．２ｍＬ。病毒干扰试验中,ＩＢＶ ＪＢ９７０２＋ＮＤＶ ＬｓＡｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾４～６,ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾１０～１１;用ＩＢＶ ＪＢ９７０２病毒液１：１０稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ     

鸡胚接种NDV病毒后尿囊液量及血凝效价的研究

鸡胚接种ＮＤＶ病毒后尿囊液量及血凝效价的研究伍富尧，刘治西（莱阳农学院）王元彬，王洪本（临沂市畜牧局）试验Ｉ为了解不同来源的鸡胚接种ＮＤＶ后的尿囊液量及其血凝（ＨＡ）滴度的差异，进行本试验。１材料和方法１．１毒种新城疫毒种为ＬａＳｏｔａ弱毒株，由中监...     

鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究

本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。     

鸡肾型传染性支气管炎多价油乳剂灭活苗的研究

将四株青岛地区分离的肾型传染性支气管炎病毒（Ｈ，ＳＨ，Ｊ和Ｍ株）和传统的疫苗株Ｈ５２株，分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经甲醛灭活，按一定比例配合（每头份疫苗中含各株病毒的量不低于１０＾６个气管环组织半数致死量）以矿物油为佐剂制成多价油乳剂灭活苗，本苗接种于１５日龄的雏鸡，免疫后３０天保护率达到１００％，而Ｈ１２０免疫后的鸡群仅获得８０％的保护率，免疫后１６天抗体达到最高水平，免疫后１９０天，抗体效价     

RT-PCR检测禽传染性支气管炎病毒

用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ,分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０、２２８、６０２ｂｐ的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、Ｃｏｎｎ、Ｇｒａｙ、Ｔ、Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒、上毒、云毒、ＨＫ、１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ,结果除Ｈｏｌｔｅ株和２个分离株（宜毒、云毒）外,其余均成功地扩增出６００ｂｐ的片段。用１．７、０．２、０．６ｋｂ３对引物对６个ＩＢＶ毒株和６个分离株的含毒尿囊液在相同和不同条件下进行ＲＴ－ＰＣＲ,结果３对引物分别扩增出３、５、９株ＩＢＶ,同时可将不同血清型的１２个ＩＢＶ株分成６种基因型。将ＩＢＶ分离株ＨＫ与标准株Ｍ４１经ＰＣＲ扩增、ＨａｅⅢ和Ｈｉｎｄ酶切、ＲＦＬＰ分析,表明属同一马萨诸塞血清型。３株ＩＢＶ（Ｈ１２０,ＨＫ,Ｍ４１）在鸡胚中繁殖,ＰＣＲ最早检出的时间为２０～２４ｈ。ＲＴ－ＰＣＲ提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测病毒的新方法。     

Observations on the preparation and stability of infectious bronchitis virus hemagglutination antigen from virus propagated in chicken embryos and chicken kidney cell cultures

A total of 166 infectious bronchitis virus (IBV) hemagglutination (HA) antigen preparations were made during a 30-month period from allanto-amnionic fluid (AAF) from chicken embryos inoculated with 10 different IBV strains (Mass 41, Conn 46, H52, Florida 18288, Ark 99, JMK, T, Holte, EF, SE17). Antigens were prepared by inoculating 9- or 10-day-old embryos with 10(5.0) to 10(6.5) EID50 IBV, harvesting AAF after a 30-hour-postinoculation incubation, and phospholipase C (PLC) treatment of virus concentrated by pelleting from the AAF. Longer (48 hr) incubation times were tried, but production of H52 HA antigen was successful only from AAF harvested after 30 hours of incubation. AAF from JMK-infected embryos had lower infectivity titers and frequently yielded lower HA antigen titers than the other strains. The treatment of AAF with fluorocarbon did not enhance or diminish HA activity but did yield clearer antigens by removing extraneous material. Polyethylene glycol precipitation of virus was an acceptable alternative to pelleting virus at 39,000 X g. Inactivation of IBV with 0.1% betapropiolactone did not affect HA activity, whereas inactivation with 0.1% formalin caused a marked reduction in HA titer. Different buffer formulations including phosphate, tris, or HEPES were tried to optimize the conditions for PLC treatment of virus concentrate, but there were no apparent differences in the antigens prepared in the different buffers. The HA antigen preparations were stored and were stable at 4 C. Antigen titers of greater than or equal to 64 after storage for 20 months or longer were not uncommon. Addition of merthiolate as a preservative had no deleterious effect on HA activity. Antigen stability appeared to be enhanced by incorporating EDTA in buffer for virus pellet recovery and during enzyme treatment. Attempts to produce HA antigens from cell-culture-adapted virus propagated in chicken kidney cells were less satisfactory. An acceptable HA antigen was prepared from only two (Mass 41, SE17) of the seven strains that were tried. Virus propagation in chicken embryos is the better method of the two for IBV HA antigen production. Aside from the need to concentrate virus and treat the concentrate with PLC, there appeared to be considerable latitude in the procedures that can be used to make acceptable IBV HA antigens.     

Study on the Characteristics of Two Low Hemagglutinating Activity H9N2 AIV Strains

To study the characteristics of 2 low hemagglutinating activity H9N2 avian influenza virus (AIV) strains.2 strains were identified by HA/HI,electron microscope observation,HA and NA sequencing.The virus characteristics were studied by morphology,chemistry and biology.2 isolates were identified as H9N2 AIV.The observations demonstrated that the virions expressed various shapes of spherical,oval,elongated forms and polymorphism with diameters in a range of 80 to 120 nm.Hemagglutinin(HA) of the 2 strains was medium-stable to heat,and they were heat-resistant under 50 ℃.2 isolates could agglutinate cock and human O type red blood cells.The agglutination did not appear on the original isolates,but recovered with the passage of virus gradually.2 isolates did not agglutinate pig,cattle,sheep,rabbit and horse red blood cells.2 strains were not sensitive to the ether and chloroform,and only one isolate was sensitive to acids.2 strains were not fatal to the chicken embryo,and the EID₅₀ were both 1×10^-7/0.2 mL.The small White mice showed no clinical symptoms and no deaths after being inoculated with the viruses via respiratory route in our experiment.Serum antibody HI titers of the survived mice were measured after inoculated 14 d,and the antibody of H9N2 AIV were positive.Some tolerant H9N2 strains existed in live animal markets of Shanghai area.     

2株弱血凝活性H9N2亚型禽流感病毒特性的研究

试验旨在对2株血凝活性较弱的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)进行病毒特性的研究。采用HA/HI、电镜观察、HA和NA测序等方法对2株分离株进行了病毒的鉴定;采用形态学、化学和生物学方法对这2株分离株进行研究。2株病毒被确定为A型H9N2亚型AIV;病毒粒子在透射电镜下为圆形、椭圆形、杆状并呈多型性,大小为80~120 nm;血凝素(HA)均为中等耐热型;病毒50 ℃均耐热;均能凝集公鸡和人O型红细胞,但凝集作用开始并未出现,而是随着病毒的传代逐渐恢复;均不凝集猪、牛、羊、兔和马红细胞;2株病毒均对乙醚、氯仿不敏感,只有1株病毒对酸敏感;病毒对鸡胚无致死性,EID₅₀均为1×10^-7/0.2 mL;经鼻腔途径感染小白鼠,均未导致小鼠出现症状和死亡,接种后第14天在小鼠血清中可检出相应病毒的抗体。研究结果表明,上海地区活禽交易市场存在对环境条件具有较强耐受性的H9N2亚型AIV。     

国内外常用新城疫活疫苗的毒力和血凝滴度测定试验报告

本试验通过对国内外常用新城疫弱毒疫苗最小致死量（MLD）测定、鸡胚平均致死时间（MDT）测定，对疫苗的毒力强弱和致病型进行分析。对疫苗的血凝试验（HA）滴度进行测定。根据疫苗的抗原含量推断免疫效力。测定新城疫不同毒株的弱毒疫苗单苗和与传染性支气管火H120等的二联苗或三联苗共14种，对其中9种疫苗进行了鸡胚最小致死量（MLD）测定和鸡胚平均致死时间（MDT）试验，对所有的疫苗都进行了HA试验。不管是进口疫苗还是国产疫苗其MDT有较大的差异，其毒力有强有弱，有的为中发型（中等毒力）疫苗，主要是温和型（低毒力）疫苗，最小致死量（MLD）范围为10^-8-10^-10/0.1ml。不同厂家生产的疫苗HA滴度有较大的区别。国产疫苗的质量与进口疫苗无明显的差异，有的比进口疫苗质量还好。对出口养禽企业选用低毒力、HA滴度高的疫苗具有较好的指导作用。     

人源H3N2亚型猪流感重组病毒的分离鉴定及全基因序列分析

本研究由疑似猪流感病料样品中分离一株病毒,通过HA、HI、电镜观察、生物学特性测定及全基因序列测定表明,分离病毒株为H3N2亚型人流感病毒和H1N1亚型古典猪流感病毒(SIV)的重组体,命名为A/Swine/Fujian/F2/07(H3N2).该分离株含有8个基因片段,共13 442 bp,与GenBank中登录的H3N2亚型人流感病毒、H1N1亚型古典SIV和H3N2亚型SIV进行比较分析显示:分离株的HA、NS、NA基因与H3N2亚型人流感病毒株的同源性分别为84.7 ％～98.1％、94.4 ％～99.5％和88.6 ％～97.6％;与H3N2亚型SIV的核苷酸同源性分别为87.7％～98.5％、82.5 ％～99.9％和87.6 ％～98.4％;M基因与H3N2亚型人流感病毒和SIV的同源性均在90.1％以下,而与H1N1亚型古典SIV的同源性在97.6％以上.基因型分析表明分离株的PB2、PBI、PA、HA、NP、NA和NS基因片段来源于1975年～1982年的人流感病毒,而M基因来源于H1N1亚型古典SIV,充分证明猪作为流感病毒“混合器”的作用.     

鸡胚蛋重比作为评价传染性支气管炎病毒致侏儒化指标的研究

在鸡胚上接种鸡传染性支气管病毒（M41、H120、HN99株）后6 d内,每天称量胚体和各自种蛋的重量,计算胚体/种蛋重量的比值（EE值）。EE值与未接种病毒的对照组鸡胚相比,计算出最小感染量,EE指数通过接种过IBV的鸡胚EE值和对照组EE值相比计算出来。结果表明,在接种M41株和HN99株后第4天EE值与对照组差异显著,在接种H120株后第5天EE值与对照组差异显著,可初步判定是被传染性支气管炎病毒感染,这种方法可更快更有效的观察胚体损伤程度,尤其适用于需经传代才能看到矮小化现象的野毒株。     

重组鸡α-干扰素对新城疫病毒复制的影响

毕赤酵母表达鸡α-干扰素经纯化后,以50000U、5000U和500U分别与200ELD50新城疫病毒疫苗株LaSota和中等毒力Q株等量混合,接种9～10日龄SPF鸡胚,记录鸡胚死亡情况并测定尿囊液HA效价,结果表明,高浓度重组干扰素可使病毒致死鸡胚时间延长,并使Q株在尿囊液中的HA效价下降2～3个滴度。     

H3N2亚型猪流感病毒中国分离株的克隆纯化及生物学特性

以有限稀释克隆法对29株H3N2亚型猪流感病毒(SIV)不同地区分离株进行纯化，并对其生物学特性进行了研究。结果，8株对鸡呈现中等致病力，21株对鸡呈现低致病力。不同地区SIV分离株(第5代)的EID50差异较大，以安徽分离株最高，为10^-10.77／0．2mL，其他毒株在10^-5.5～10^-10.56／0．2mL之间。黑龙江省分离株和浙江省分离株的LD50高达10^-2.84／0．1mL，其他分离株在10^-1.17～10^-2.56／0．1mL之间。经鸡胚分离传代后，SIV分离株均能凝集0．7％人“O”型血、绵羊、兔、豚鼠、小鼠、大鼠及鸡的红细胞，其红细胞凝集谱的差异主要表现在对马、牛、驴、猪红细胞的凝集特性上。大部分SIV分离株为热不稳定型，部分毒株表现为中等热稳定型和热稳定型。从其抗原特性看，大部分SIV分离株表现为亲和相，对AIV参考毒株DKUK63和SIV参考毒株SWTN77表现出较高的HI滴度；部分分离株经鸡胚传代后，出现了相别的变异。     

3株H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

为了获得H9亚型禽流感病毒(AIV)流行毒株并掌握流行毒株的分子特征和致病性,采用病毒分离、血凝性试验、鸡胚半数感染量(EID₅₀)测定、HA基因序列分析、致病性试验、交叉保护性试验等对3份临床疑似H9亚型AIV感染病料进行了研究。结果:3份临床病料样品可引起10日龄SPF鸡胚规律性死亡,3株分离毒株对1%鸡红细胞的凝集效价分别10log₂、11log₂和10log₂;对SPF鸡胚的EID₅₀分别为10^-8.83/mL、10^-9.50/mL和10^-9.0/mL;与2018年上海分离毒株亲缘关系较近,进化树处于同一分支;对SPF雏鸡的发病率分别为80%、100%和90%;均未引起SPF雏鸡死亡;彼此之间具有100%的交叉保护率,商品化禽流感(H9亚型)灭活疫苗对3株分离毒株的保护率分别为100%、90%和100%。本试验成功分离鉴定到了3株低致病性H9亚型AIV流行毒株,并证实当前商品化疫苗对H9亚型AIV流行毒株仍具有较好的保护效果。     

鸽新城疫病毒的分离及鸽群自然感染状况的调查

将在北京某信鸽群采集的两只具神经症状的病鸽脑组织悬液接种ＳＰＦ鸡胚后，分离出二株病毒分离物ＰＢ９６０１和ＰＢ９６０２，通过对鸡红血球的血球凝集试验，用已知鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）高免血清任务在球凝集抑制试验（ＨＩ）及２～３月龄鸽的攻毒试验，证明这两个毒株为对鸽呈高致病性的ＮＤＶ。交叉ＨＩ试验表明，鸽ＮＤＶ分离株与鸡ＬａＳｏｔａ株间有很高的血清交叉反应，但也存在着一定抗原性差异。对扬州地区若鸽群中２－