禽霍乱禽霍乱、新城疫二联灭活疫苗免疫攻毒试验与HI试验的平行关系研究

对8批禽霍乱、新城疫二联灭活疫苗进行新城疫组分的效力检验,在检测新城疫血凝抑制效价(HI)的同时,进行新城疫病毒强毒攻击试验,旨在寻找抗攻毒保护与HI抗体效价之间的平行关系。结果表明:免疫剂量与HI抗体效价和攻毒保护率呈正相关,免疫40、20、10、5μL剂量组攻毒保护率和HI抗体效价分别为94.9%(75/79)、5.2 log_2,87.5%(70/80)、4.4 log_2,29.1%(23/79)、2.7 log_2,11.4%(9/79)、2.1 log_2;对照组攻毒保护率为0(0/10),HI抗体效价≤2.0 log_2;新城疫HI抗体效价与攻毒保护率也呈正相关,当HI3.0 log_2,攻毒保护率为4.1%;HI=3.0 log_2,攻毒保护率为22.9%;HI=4.0 log_2,攻毒保护率为87.7%;HI=5.0 log_2,攻毒保护率为94.4%;HI=6.0 log_2,攻毒保护率为100%。本研究为制定疫苗质量标准中新城疫病毒株的效力检验方法和标准提供实验室理论依据。     

新城疫-禽流感(HH9N2亚型)二联灭活疫苗免疫效果评估

为筛选适合父母代种鸡场的新城疫(ND)-禽流感(H9N2 AI)二联灭活疫苗(以下简称"新流"),研究选择A、B、C、D、E、F 6个公司的"新流"产品,分别在7、21日龄对SPF鸡进行两次颈部皮下免疫。免疫后定期采集血清,通过血凝与血凝抑制试验(HI)集中检测H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)和新城疫病毒(NDV)抗体,绘制HI抗体曲线。免疫后48 d用106EID50H9N2AIV攻毒,定期采集喉头、泄殖腔棉拭子检测排毒情况。结果表明:两次免疫"新流"产品后,H9N2AIV和NDV抗体效价在46日龄达到最高峰,在49日龄开始下降。攻毒后,免疫C和D公司"新流"的SPF鸡H9N2 AIV排毒时间最短。研究结果为鸡场选择疫苗提供了科学依据。     

新城疫-禽流感(H9N2亚型)二联灭活疫苗免疫效果评估

为筛选适合父母代种鸡场的新城疫(ND)-禽流感(H9N2 AI)二联灭活疫苗(以下简称"新流"),研究选择A、B、C、D、E、F 6个公司的"新流"产品,分别在7、21日龄对SPF鸡进行两次颈部皮下免疫。免疫后定期采集血清,通过血凝与血凝抑制试验(HI)集中检测H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)和新城疫病毒(NDV)抗体,绘制HI抗体曲线。免疫后48 d用106EID50H9N2AIV攻毒,定期采集喉头、泄殖腔棉拭子检测排毒情况。结果表明:两次免疫"新流"产品后,H9N2AIV和NDV抗体效价在46日龄达到最高峰,在49日龄开始下降。攻毒后,免疫C和D公司"新流"的SPF鸡H9N2 AIV排毒时间最短。研究结果为鸡场选择疫苗提供了科学依据。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗最小免疫剂量试验

将ND-AI(H9亚型)二联苗分别以1.0、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02 mL 6个不同剂量免疫5周龄SPF鸡,免疫后3周采血测NDV及AIV 的HI抗体,并用H9亚型AIV及NDV F48株攻击.结果表明,这6个免疫组鸡的NDV HI抗体几何平均效价分别为2 10、2 8.8、2 8.5、2 7.0、2 6.1、2 5.7;AIV HI抗体水平分别为2 9.3、2 8.4、2 7.7、2 5.7、2 5.1、2 2.8;对照组鸡的NDV及AIV HI抗体均为零.攻毒试验证实,以0.1～1.0 mL剂量免疫鸡获得了100%的抵抗NDV及AIV强毒攻击的保护力;0.02 mL和 0.05 mL的免疫剂量也可使其对NDV与AIV的保护率达到90%～100%.     

基于悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)安全性和免疫产生期研究

为探讨悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)(以下简称二联灭活疫苗)的安全性和免疫产生期，试验用新城疫病毒(NDV)La Sota株和H9亚型禽流感病毒(AIV)BX13株分别接种BHK-21和MDCK悬浮细胞，收获抗原液，制备二联灭活疫苗；采用1 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡进行二联灭活疫苗的安全性试验；以0.02、0.05、0.1、0.3、0.5 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡，免疫后7、14、21 d采血测定NDV HI和AIVHI抗体，并于免疫后21日龄攻毒进行免疫保护试验和免疫产生期试验。结果显示：二联灭活疫苗对SPF鸡安全，鸡只无不良反应，疫苗吸收良好；各剂量组免疫后抗体水平均逐渐升高，免疫后21 d NDV HI效价为6.1～8.5 log₂,AIV HI效价为7.5～11.2 log₂；免疫后21 d,0.02 mL/只剂量组对两种毒株的攻毒保护率均为9/10，其余剂量组均为10/10保护。研究表明，二联灭活疫苗对SPF鸡安全，以0.1 mL/只的剂量免疫SPF鸡21 d可...     

鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗对不同日龄雏鸡的免疫效力研究

为评估鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-传染性法氏囊病(IBD)三联灭活疫苗对不同日龄和不同水平母源抗体雏鸡的免疫效力和持续期,本试验用该疫苗免疫7、14、21日龄SPF雏鸡和有母源抗体的普通雏鸡,免疫后采血测定ND血凝抑制抗体(HI Ab)、IB血凝抑制抗体(HI Ab)及IBD中和抗体(NA),并用传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒攻击。结果显示,7日龄SPF雏鸡免疫后21 d ND HI抗体、IB HI抗体及IBD中和抗体效价分别为7.9log2、6.9log2和14.1log2,SPF鸡日龄越大,抗体水平越高;28日龄SPF鸡免疫后3个月,0.3 mL免疫剂量组试验鸡ND HI、IB HI及IBD中和抗体效价分别达6.5log2、6.1log2和13.6log2,IBDV攻毒保护率均为100%(10/10);不同日龄普通雏鸡免疫效果与SPF鸡试验一致,抗体水平随鸡日龄增大而升高,IBD攻毒保护率也都达到100%(10/10)。试验结果证实,鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗可使7、14及21日龄SPF雏鸡和普通雏鸡产生良好的免疫力,对雏鸡的免疫期至少为3个月。     

鸡新城疫-传染性法氏囊病-禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗的研究

为研制鸡新城疫(ND)-传染性法氏囊病(IBD)-禽流感(AI,H9亚型)三联灭活疫苗,用新城疫病毒(NDV)La Sota株及H9亚型禽流感病毒(AIV)WD株分别接种易感鸡胚培养,用传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJQ902株接种DF-1细胞培养,收获病毒液,经超滤浓缩、甲醛灭活后,加入油佐剂乳化制成3批疫苗。对3批制品进行了检验,其性状检验、装量检查、无菌检验、甲醛、汞类防腐剂残留量测定均符合要求,鸡对疫苗无任何不良反应。效力检验结果显示:ND部分以20μL/只剂量免疫,血凝抑制(HI)效价达5.6~6.1 log_2,攻毒后均能提供100%保护;IBD部分以0.5 mL/只剂量免疫,中和抗体效价达16.0~16.4 log_2,攻毒后均能提供100%保护;AI(H9亚型)部分以0.3 mL/只剂量免疫,HI效价达8.7~9.0 log_2,攻毒后均能提供100%保护。试验结果证实,研制的疫苗安全、免疫效力高。     

鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）最小有效免疫剂量的研究

为科学指导鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）的临床免疫剂量,通过测定免疫鸡HI抗体滴度和攻毒保护试验,进行了10日龄和30日龄SPF鸡最小有效免疫剂量的研究。动物实验使用10 μL、20 μL和40 μL三种不同免疫剂量,免疫疫苗后21 d检测HI抗体效价,10日龄SPF鸡001批次疫苗HI抗体平均效价依次为：4.8、6.2和6.5,攻毒保护率依次为80%、100%和100%,30日龄SPF鸡HI抗体平均效价依次为：5.0、6.3和6.5,攻毒保护率依次为70%、100%和100%,结果表明,新城疫灭活标记疫苗（MG7株）HI 抗体效价和保护效力呈正相关, 免疫剂量与HI 抗体效价和保护效力也呈正相关。用NDV基因Ⅶ型强毒G7株进行攻毒保护试验,两种日龄鸡在20 μL的免疫剂量下,疫苗仍能达到良好的免疫保护效果。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗免疫效力试验

为评价鸡新城疫和禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗(以下简称"二联苗")对SPF鸡的免疫保护效力,进行了血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护相关性的研究及免疫持续期试验。不同抗体水平的SPF鸡攻毒试验结果表明,当NDV HI≥5.0log2,AIV HI≥6.0log2时,分别攻击NDV、AIV,试验鸡的保护率均达到100%;免疫期试验结果表明,二联苗以0.3mL和0.5mL的剂量分别免疫SPF鸡,免疫接种后各试验组鸡均产生较高的HI抗体,其免疫期分别能持续18周和36周。表明二联苗对试验鸡有较好的保护效果。     

新城疫病毒HN标记疫苗的构建及免疫效力

将新城疫病毒AI4株的HN蛋白胞外区替换成禽副黏病毒2型T4株HN相应部分,构建获得了一株重组病毒r AI4-T4HNECD,该病毒具有较高繁殖性能,且毒力弱。将该病毒制成灭活疫苗免疫2周龄SPF鸡后,定期采血用于血凝抑制试验(HI),免疫后3周以基因Ⅶd亚型NDV强毒株JS-5-05攻毒,攻毒后定期采血用于HI检测。结果显示:免疫后,该疫苗可有效诱导抗体的产生,并能提供较强的免疫保护。血清学测定数据显示:攻毒前,免疫组鸡血清对AI4株的HI平均效价低于2 log_2,但感染后第5、7天免疫组鸡血清对AI4株的HI平均效价可分别达4.3 log_2和9.4 log_2,而免疫未攻毒组对AI4株的HI效价仍低于2 log_2,根据血清对AI4株HI效价的变化可区分免疫动物和感染动物。因此,重组病毒rAI4-T4HNECD可用于新城疫标记疫苗的开发。     

新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗免疫效力试验

用新城疫病毒（NDV）LaSota株与禽流感病毒（AIV）F株尿囊腔接种非免疫难胚，取72－120小时死亡鸡胚液。灭活后分别制成新城疫油乳剂灭活苗、禽流感（H9亚型）油乳剂灭活苗、新城疫与禽流感（H9亚型）二联油乳剂灭活苗，免疫7日龄非免疫雏鸡，一周后开始检测ND、AI血凝抑制（HI）抗体体，两周时各免疫组鸡的抗体效价都达到6log2以上，3周达到高峰，后维持在较高水平达45天以上，在65日龄进行攻毒，结果单苗和二联苗免疫鸡全部得到保护。     

马立克病毒感染对鸡体液免疫的影响

为了验证和探讨马立克病毒(MDV)对肉鸡的免疫抑制作用,同时对比研究MDV疫苗和强毒株对机体免疫力的影响,试验通过人工攻毒MDV,建立MD模型,各组SPF鸡于2日龄注射NDV+H9N2 AIV灭活苗,7日龄时以LaSota株NDV弱毒疫苗饮水免疫,在SPF鸡14,21,28,35,42日龄时,各组无菌采血25份,分离血清,利用血凝/血凝抑制试验研究各组ND和H9N2的体液抗体水平。结果表明:在整个试验周期,疫苗对照组和空白对照组NDV和H9N2 AIV抗体水平差异不显著;攻毒组SPF鸡在21~42日龄时,NDV和H9N2 AIV抗体水平显著或极显著低于对照组。     

鸡新城疫－传染性支气管炎－传染性法氏囊病三联灭活疫苗对不同日龄雏鸡的免疫效力研究

为评估鸡新城疫（ND）-传染性支气管炎（IB）-传染性法氏囊病（IBD）三联灭活疫苗对不同日龄和不同水平母源抗体雏鸡的免疫效力和持续期,本试验用该疫苗免疫7、14、21日龄SPF雏鸡和有母源抗体的普通雏鸡,免疫后采血测定ND血凝抑制抗体（HI Ab）、IB血凝抑制抗体（HI Ab）及IBD中和抗体（NA）,并用传染性法氏囊病病毒（IBDV）强毒攻击。结果显示,7日龄SPF雏鸡免疫后21 d ND HI抗体、IB HI抗体及IBD中和抗体效价分别为7.9log2、6.9log2和14.1log2,SPF鸡日龄越大,抗体水平越高;28日龄SPF鸡免疫后3个月,0.3 mL免疫剂量组试验鸡ND HI、IB HI及IBD中和抗体效价分别达6.5log2、6.1log2和13.6log2,IBDV攻毒保护率均为100%（10/10）;不同日龄普通雏鸡免疫效果与SPF鸡试验一致,抗体水平随鸡日龄增大而升高,IBD攻毒保护率也都达到100%（10/10）。试验结果证实,鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗可使7、14及21日龄SPF雏鸡和普通雏鸡产生良好的免疫力,对雏鸡的免疫期至少为3个月。     

鸡新城疫-传染性法氏囊病-禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗对雏鸡的免疫效力研究

为了评估鸡新城疫(ND)-传染性法氏囊病(IBD)-禽流感(AI)(H9亚型)三联灭活疫苗对雏鸡的免疫效力,采用该疫苗分别免疫1、7、10、14、21日龄SPF雏鸡和带有母源抗体的普通雏鸡,免疫后21d~28d采血测定ND血凝抑制抗体(HIAb)、IBD中和抗体(NA)及AI(H9)HIAb抗体,并用传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒攻击。结果显示,免疫后各不同日龄免疫组SPF雏鸡的ND HIAb、IBD NA及AI(H9)HIAb滴度分别为7.9log2~8.3log2、13.9log2~15.8log2及8.0log2~8.9log2,IBDV攻毒均100%保护;而普通雏鸡免疫后的ND HIAb、IBD NA及AI(H9)HIAb滴度,1日龄免疫组分别为5.9log2、12.1log2和5.6log2,7、10、14、21日龄免疫组分别为6.1log2~7.0log2、12.6log2~14.5log2和6.0log2~7.5log2;IBDV攻毒,1日龄免疫组普通雏鸡保护率为60%,7、14及21日龄免疫组保护率均为100%;结果证实,SPF雏鸡所产生的免疫效力要高于带有母源抗体的普通雏鸡,1日龄普通雏鸡免疫所产生的免疫效力明显低于其他日龄。根据试验结果,推荐该疫苗对雏鸡的使用日龄为7日龄~14日龄。     

鸡传染性鼻炎(三价)和新城疫二联灭活疫苗的研究

利用Page A型、B型、C型副鸡禽杆菌和新城疫病毒La Sota株,研制鸡传染性鼻炎(三价)和新城疫二联油乳剂灭活疫苗。用3个批次疫苗进行单剂量(0.5mL/次)3次接种和大剂量(2.0mL)单次接种的安全性试验、SPF鸡的免疫效力试验、商品鸡的免疫持续期试验和疫苗的保存期试验。结果表明,3批疫苗对试验鸡安全无副作用;免疫接种SPF鸡只30d后对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%,用20μL/只疫苗免疫接种SPF鸡21d后新城疫的平均HI抗体24;商品鸡42日龄首免,110日龄二免,二免后9个月对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥70%,对新城疫病毒强毒100%保护;用4℃~8℃保存12个月和15个月的3批疫苗进行了SPF鸡的近期免疫效力试验,结果对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥70%,用20μL/只疫苗免疫SPF鸡,免疫接种后21d新城疫病毒的平均HI抗体24,对新城疫病毒强毒的攻毒保护率70%。说明研制的疫苗安全有效。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活苗(La Sota株+M41株+Re-9株)应用效果研究

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活苗(La Sota株+M41株+Re-9株)(三联苗(Re-9株))为国内首个采用基因重组H9亚型禽流感疫苗株研制的新支流三联灭活疫苗。为研究疫苗上市后的实际应用效果,使用7日龄AA肉鸡和260日龄产蛋期蛋鸡评价三联苗(Re-9株)有效性。结果显示:肉鸡免疫后14 d即可激发抗体,免疫后21 d,新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)的血凝抑制(HI)抗体分别达8.6log2、6.2log2、8.3log2,出栏时仍维持在较高水平;于免疫后14 d抽样进行NDV、H9 AIV攻毒,对照组均100%发病或排毒,免疫鸡均可获得100%保护;在蛋鸡上,免疫三联苗(Re-9株)后28 d,NDV、IBV、H9 AIV的HI抗体效价分别达12.0log2、7.8log2、12.2log2,免疫后6个月仍可以维持在较高水平。结果表明:三联苗(Re-9株)在实际应用中免疫效果较好,本研究将为鸡新城疫、传染性支气管炎、H9亚型禽流感的防控提供有力支撑。     

鸡新城疫(基因Ⅶ型)、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(aSG10株+G株)在蛋鸡上的安全性及免疫效果研究

为了研究成都天邦生物制品有限公司生产的鸡新城疫(基因Ⅶ型)、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(aSG10株+G株)对蛋鸡的安全性和免疫效果,在北京市华都峪口禽业有限责任公司京红1号蛋鸡养殖场进行相关试验。结果显示:疫苗经不同免疫途径(皮下注射和肌肉注射)、不同免疫剂量(单剂量和超剂量)接种115日龄蛋鸡后,未见任何不良反应,注射部位疫苗吸收良好,产蛋率与空白对照组无明显差异。试验鸡免疫后14d,新城疫HI抗体平均滴度为10.9log2,H9亚型禽流感HI抗体平均滴度为9.1log2,免疫后6个月新城疫HI抗体水平不低于6.9log2,H9亚型禽流感HI抗体水平不低于7.4log2。分别于免疫后21d和6个月对免疫鸡进行攻毒,新城疫攻毒保护率为100%,禽流感攻毒保护率为95%。表明该二联苗对蛋鸡安全、有效,且免疫持续期长,可用于蛋鸡的免疫。     

H9亚型禽流感病毒HF株灭活疫苗对流行毒株的免疫保护研究

为评价H9N2亚型禽流感病毒HF株灭活疫苗对流行毒株的免疫保护效果,将禽流感病毒HF株灭活疫苗和商品化鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗分别以0.3 mL/只接种21日龄SPF鸡,3周后采血测定HI抗体效价,并用2018年-2019年分离的4株H9亚型禽流感病毒分别进行攻毒。结果显示,免疫后21 d, HF株灭活疫苗免疫组HI抗体效价达到9.1 log2以上,商品化疫苗HI抗体效价几何平均值则为6.3 log2以内。4株H9亚型禽流感病毒流行毒株以10~(7.0)EID_(50)的剂量静脉攻毒后,HF株灭活疫苗免疫组可抵抗流行毒株的攻击,保护率为100%;而商品化疫苗对流行毒株的攻毒保护率仅为40%～60%。说明H9N2亚型禽流感病毒HF株灭活疫苗具有较强的免疫原性,能使免疫鸡抵抗流行毒株的攻击。     

鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(HH9亚型)-传染性法氏囊病四联灭活疫苗的研究

为研制鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-禽流感(AI,H9亚型)-传染性法氏囊病(IBD)四联灭活疫苗,用易感鸡胚增殖NDV La Sota株、IBV M41株及AIV H9亚型WD株,用DF-1细胞增殖IBDV BJQ902株,收获病毒液,经浓缩、灭活后,制成3批油乳剂灭活疫苗。按照《中国兽药典》对疫苗进行检验。结果显示:3批疫苗的性状检验、装量检验、无菌检验、甲醛、汞类防腐剂残留量测定和安全性检验均合格。效力检验显示:NDV血凝抑制(HI)效价为6.0～6.2 log2;IBV HI效价二免是首免的8.00～13.92倍;AIV(H9)HI效价8.8～9.1 log2;IBDV中和抗体效价15.7～16.1 log2。攻毒后免疫鸡均100%保护(10/10),对照鸡全部发病(5/5)。研究结果表明制备的四联苗安全有效、免疫效力高,为该疫苗的产业化开发提供了依据。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对新城疫La Sota疫苗免疫效果的影响

用鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗免疫1日龄SPF雏鸡和普通京粉雏鸡,间隔1、2周后免疫新城疫La Sota疫苗,以单独免疫新城疫La Sota疫苗为对照,免疫后2、3、4和5周对各组鸡采血测定新城疫HI效价,并在免疫5周后用新城疫强毒攻击,计算各组保护率。结果显示,1日龄时首免IBD免疫复合物疫苗间隔不同时间再免疫新城疫La Sota疫苗,与单独免疫新城疫La Sota疫苗相比,新城疫HI抗体水平均无显著差异(P0.05)。证明IBD免疫复合物疫苗在SPF雏鸡和普通雏鸡上对新城疫La Sota疫苗免疫均无免疫抑制作用。