一株干酪乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

本研究旨在分离既能用于微生态制剂又能用于青贮饲料发酵剂的优良乳酸菌,采集规模化牛场青贮饲料,取梯度稀释液涂布MRS平板,进行厌氧培养,筛选优势菌株,观察其菌落形态,并进行生化试验和特异性PCR鉴定。研究自筛乳酸菌的生长曲线、产酸曲线、培养温度及培养基初始pH对菌株生长的影响,并研究其抑菌特性、药物敏感性和安全性。试验筛选到1株菌落形态圆形、边缘整齐、表面光滑、乳白色、镜检为革兰氏阳性的无芽孢杆菌。生化结果显示,分离菌株可厌氧生长,运动性试验、过氧化氢酶试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试验、吲哚试验结果均为阴性,15种糖醇发酵试验结果符合干酪乳杆菌生化特征。用干酪乳酸杆菌特异性引物对菌株进行PCR鉴定,琼脂糖凝胶电泳结果显示在727 bp处出现特异性扩增条带,与生化鉴定结果相符,将分离菌株命名为RS1。RS1在0~4 h时发酵液pH变化不明显,处于生长延迟期;4~16 h时发酵液pH下降较快,进入对数生长期;16~36 h时发酵液pH下降缓慢,进入稳定期。RS1在培养温度为20~50 ℃范围内均能生长,适宜生长温度为25~40 ℃;在培养液初始pH 1.0~9.0条件下均能生长,最适pH为6.0~8.0;对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为23 mm,对大肠杆菌的抑菌圈直径为17 mm;对恩诺沙星和头孢他啶耐药;经14 d灌服小鼠生长状况良好。上述结果表明,本试验筛选到的干酪乳杆菌RS1安全、无致病性,在微生态制剂及生物饲料添加剂领域具有潜在的开发价值。     

鸡源凝结芽孢杆菌的分离鉴定及耐受性分析

【目的】 试验旨在寻找1株性能稳定、环境耐受性强的凝结芽孢杆菌菌株,以在实际生产中发挥其替抗功能。【方法】 本研究采集160日龄健康海兰褐蛋鸡的粪便样本,进行细菌分离纯化,并对分离菌进行形态学特征观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析。通过绘制该菌的生长动力曲线确定其生长规律;利用耐酸、耐胆盐试验分析该菌株的耐受性;通过单因素试验对分离菌株的培养条件进行优化。【结果】 分离菌在普通培养基上长出表面粗糙、不规则的灰白色菌落,镜检为杆状、芽孢端生的革兰氏阳性菌。结合生化试验及16S rDNA基因序列分析综合鉴定该菌株为凝结芽孢杆菌,命名为NJ001。生长动力曲线表明,7~24 h为该菌株的对数生长期,24 h活菌数达到顶峰,凝结芽孢杆菌NJ001的最佳培养时间为24 h;耐受性试验结果显示,该菌株pH 3.0温育2 h存活率为59.5%,pH为4.0时存活率达到87.6%以上,对酸有较强耐受力;0.3%胆盐处理2 h存活率为54.0%,胆盐浓度升至0.5%时存活率仍有50%以上,该菌对胆盐有较强的耐受性。单因素试验结果发现,该菌的最佳培养温度为40 ℃,接种量2%,初始pH 7.0,摇床转速220 r/min。综合以上最佳培养条件,菌株活菌数可达最大值,为1.93×10⁸ CFU/mL。【结论】 所分离的菌株为具有较强耐酸耐胆盐特性的凝结芽孢杆菌,其最适生长条件易于实现;且与动物体内胃肠道环境基本吻合,具备作为微生态制剂的应用潜力。     

猪源生物膜乳酸菌的筛选与生物学特性分析

为了筛选能够用于养猪生产中的潜在益生乳酸菌,试验从健康猪粪便中筛选出乳酸菌,并采用16S rDNA分子生物学方法进行鉴定,然后进一步对该菌株进行体外生物学特性分析和小鼠致病性试验。结果表明:从猪粪便中共分离出3株疑似乳酸菌菌株,而后从3株疑似乳酸菌菌株中成功筛选出1株具有抗菌活性和生物被膜形成能力的乳酸菌,命名为L-18,并确定乳酸菌L-18株为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)。L-18株乳酸菌具有产酸能力,能够耐受50℃和60℃、pH值2.0～10.0以及1%胰蛋白酶环境;对猪小肠上皮细胞的黏附率为77.04%,与鼠李糖乳杆菌ATCC53103相比差异显著(P0.05);在MRS液体培养基中培养大约4 h后进入对数生长期,并持续生长8 h后进入稳定期;对青霉素等8种药物高度敏感,对头孢他定等6种药物中度敏感,对庆大霉素等6种药物表现出耐药;小鼠致病性试验表明L-18株乳酸菌具有安全性,无毒性。说明L-18株乳酸菌具有益生菌的典型特性和功能,可用于开发和利用。     

1株鲤鱼源植物乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

【目的】筛选具有优良益生特性的鲤源乳酸菌作为水产养殖用微生态制剂候选菌株。【方法】以鲤鱼肠道内容物及黏膜为菌株的分离来源，采用MRS培养基进行菌株分离纯化，经16S rRNA测序鉴定后，对分离菌株生长特性、产酸能力、耐酸、耐胆盐、抑菌特性、药物敏感性及安全性等生物学特性进行分析。【结果】试验成功分离到1株植物乳杆菌，将其命名为YY001，该分离株在MRS培养基上菌落形态为圆形、表面光滑、边缘整齐、呈乳白色，革兰氏染色为阳性、无芽孢、两端钝圆的短小杆菌；4 h后进入对数期生长，12 h后生长达到稳定期；具有较强的产酸能力，产酸曲线显示，0~12 h pH迅速下降，培养16 h的菌液pH达3.8；在pH 3.0和0.3%胆盐的条件下具有一定耐受性；该分离株对水产常见致病菌柱状黄杆菌、维气氏单胞菌和嗜水气单胞菌均具抑菌效果，且对柱状黄杆菌的抑菌效果最显著，抑菌圈直径达34.19 mm；药物敏感性试验结果显示，分离株对卡那霉素、链霉素和万古霉素耐药；每天一次连续1周灌胃10⁸CFU分离菌株对小鼠无毒害作用。【结论】本研究分离到的菌株YY001具有优良的生物学特性，可作为水产养殖用微生态制剂候选菌株，为后续制备鲤鱼用微生态制剂奠定基础。     

产纤维素酶解淀粉芽胞杆菌分离株的生物学特性研究

对发酵黄芪样品中分离的1株产纤维素酶解淀粉芽胞杆菌的生物学特性进行了检测,试验结果表明,菌株在10℃~60℃环境均能生长,最适生长温度为35℃~40℃。pH5.0~8.0培养基均适宜菌株生长,其中最适pH为6.0。在37℃环境200r/min振荡培养的生长曲线在0~4h为延迟期,4h~12h为对数期,12h~24h为稳定期,24h以后为衰亡期。细菌37℃培养32h开始产生芽胞,在培养72h时芽胞形成率达到80.67%。菌株对多数抗菌药物敏感,且安全性良好。该菌株适应性强,生长条件较为宽松,这为其开发应用提供了依据。     

一株优良乳酸菌的分离鉴定与特性研究

利用乳酸菌分离专用培养基-MRS培养基从发酵40 d的酸菜汁中分离得到一株乳酸菌,利用经典分类法对所分离的乳酸菌菌株进行了系统的细菌学鉴定和生物学特性研究。结果该菌株被鉴定为乳杆菌属、植物乳杆菌。对其进行生长曲线、pH及酸度的测定,结果显示分离乳酸菌的对数生长期较长;培养以后pH下降达到稳定;酸度较高的产酸时间为前20 h。抑菌试验表明：该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有明显抑制作用。由于该菌具有生长快、产酸量高并具有抑菌活性等特点,因而适合作为微生态制剂的优良菌种开发利用。     

猪源罗伊氏乳杆菌GL001的分离与益生特性研究

为了给猪源益生菌制剂的研究与开发提供更多理论依据,从小型巴马猪粪便中分离获得罗伊氏乳杆菌GL001,对该分离菌株的生长特性、产酸性能、模拟胃肠道环境下的耐受能力、药物敏感性及动物安全性进行检测。结果显示：罗伊氏乳杆菌GL001能迅速进入对数生长期,在16 h达到最高生长点后,pH值也相应变平稳;罗伊氏乳杆菌GL001在模拟的胃液环境中,1.5 h的存活率为93.84%,3 h后为88.41%;对0.3%的胆盐环境耐受性强;罗伊氏乳杆菌GL001对阿莫西林、链霉素、多西环素、氧氟沙星敏感,但对青霉素不敏感;细菌的上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用;大鼠安全性试验表明,分离的罗伊氏乳杆菌GL001对雌鼠、雄鼠的生长和脏器指数均无影响,大鼠脏器没有细菌异位情况。研究表明,分离得到的罗伊氏乳杆菌GL001可作为潜在饲用益生菌进一步研究。     

一株仔猪源枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其益生特性研究

为了筛选优质猪源益生菌菌种资源,为畜禽微生态制剂的研究与开发提供优质候选菌株,试验以健康仔猪新鲜粪便为分离材料,通过高温处理分离芽孢杆菌,并对其进行形态特征、生化及分子生物学鉴定与益生特性研究。结果表明:从健康仔猪新鲜粪便中分离获得多株细菌,选取其中1株生长快速、形态特征典型的菌株进行鉴定,确定该分离菌为枯草芽孢杆菌。益生特性研究表明,该分离菌菌株具有较强的耐热、耐酸、耐胆盐等益生特性,同时具有一定的拮抗致病菌作用,对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用,可作为畜禽微生态制剂菌种的候选菌株。     

猪源乳酸菌菌株的生物学特性研究

为了研究乳酸菌的生物学特性,为猪用微生态制剂的研发提供菌种资源及理论依据,试验选择从健康仔猪肠道及粪便中分离鉴定的4株乳酸菌(C1、C2、F1、F2),分别进行生长特性试验、药敏试验、抑菌试验和对酸、胆盐、温度的耐受情况以及模拟人工胃液、肠液的生存情况和安全性试验研究,从而评估各菌株的生物学特性。结果表明:4株乳酸菌对大肠杆菌均有一定的抑制作用;对酸、胆盐、温度均有一定的耐受力;在模拟肠道耐受性试验中,各菌株都保持一定的存活率,其中C2、F1、F2的各种耐受力都强于C1;安全性试验中,各菌株均未引起小鼠中毒和内脏出血等症状,证明这4株菌株均是安全的。说明C2、F1、F2可作为下一步猪用微生态制剂益生效果研究试验的优良菌株。     

猪乳酸菌的分离与鉴定

微生态制剂不但能提高机体的生长性能,而且能够影响肠道菌群的微生态平衡。乳酸菌是肠道主要益生菌,所以,开展乳酸菌微生态制剂的研究对于畜牧养殖业发展来说具有重要的意义。本试验的目的是从健康猪的肠道及新鲜粪便中分离乳酸菌。在无菌条件下,笔者采集健康猪各段肠内容物、肠黏膜及新鲜粪便,接种于MRS培养基,厌氧培养分离出6株乳酸菌,并对分离菌进行形态学观察和生化鉴定。试验结果表明,C2和C3是乳酸菌,其进行耐酸、耐胆盐试验,表明C3的耐性较好。下一步需对其进行16S r RNA序列分析鉴定,并对该菌株的抑菌生物学特性进行研究,以期为微生态制剂的研发提供生物学特性良好的菌株。     

卤水中耐酸耐盐产细菌素乳酸菌的筛选

为筛选出适合作为微生物饲料添加剂且有抑菌活性的乳酸菌，以贵州省黔东南苗族侗族自治州农家生产卤水为试验对象，筛选耐酸、耐盐且有抑菌活性的乳酸菌。采用琼脂扩散法，对其生长曲线、产酸能力、耐酸能力和耐盐能力进行研究，经过观察其生长特性、生理生化鉴定、16S r DNA测序分析对菌种进行鉴定，并通过排酸试验、排过氧化氢试验和蛋白酶敏感试验对其抑菌物质种类进行初步分析。结果显示：从卤水中初步分离出的155株菌，筛选得到1株MMB-09，对金黄色葡萄球菌、腐败希瓦氏菌、大肠杆菌以及蜡样芽孢杆菌有良好的抑菌效果，其中对腐败希瓦氏菌的抑菌效果最显著，抑菌圈直径达（14.3±0.42）mm；该菌株在8 h时OD600达到2.0以上，在12 h进入生长稳定期；有较好的产酸能力，8 h时其pH就已经降至4.2；具有较好的耐酸性和耐盐性，在pH为3和盐含量80 g/L时仍生长良好。对菌株进行形态学特征、生理生化鉴定和16S r DNA测序分析鉴定其为植物乳杆菌。该菌株在pH为6时还保留50.15%的抑菌活性，对过氧化氢酶不敏感以及蛋白酶处理后抑菌效果下降明显（P <0.05），表明其抑菌成分中包含蛋白类...     

一株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

以鸡肠道和泡菜为分离源,采用常规微生物学方法分离乳酸菌,筛选到一株产酸性能良好的菌株W7。结合对菌株的形态观察、生理生化试验以及16S rRNA基因序列分析,对菌株进行鉴定,并对W7进行特性试验研究。结果表明,W7为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,在培养22h时,活菌数最高;耐酸效果好,在pH值为2.0时,存活率仍然为100%;在胆盐浓度为0.30%时,仍然可以生长;抑菌效果较好;黏附率为79.9%。     

谷草青贮用耐低温产乳酸芽孢杆菌的筛选、鉴定及性质研究

本试验旨在筛选一株谷草青贮用耐低温产乳酸芽孢杆菌,首先通过溴甲酚紫平板扩散法和气相色谱法分离得到1株乳酸产量较高的菌株。再通过形态学观察、16S rDNA序列发育树分析和生理生化试验对目的菌株进行种属鉴定。最后对目的菌株进行性质研究,包括pH耐受性、温度耐受性、抑霉菌试验、产酸时间。结果表明:筛选获得了1株产乳酸含量较高的菌株F-1,该菌株在10℃、180 r/min培养48 h后乳酸产量为1328.9 mg/L,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。性质研究发现,菌株F-1耐酸,在pH为3.0的条件下可以生长;该菌耐低温,在10℃时生长良好;对禾谷镰刀菌有明显的抑制作用;摇床培养12 h菌株开始产酸,并且随着发酵时间的延长产酸量越来越大。     

益生菌腊样芽孢杆菌的筛选及培养基的优化

为开发具有特定生理活性的新型微生态制剂,以益生菌腊样芽孢杆菌(BacillusCereus)为初发菌株,对蜡样芽孢杆菌的初发菌株进行了耐受性试验,其耐受性结果为:pH4.8;胆盐浓度(W/V)0.01%;温度48℃。然后对蜡样芽孢杆菌的初发菌株通过紫外线诱变,筛选出能够适应肠道生存环境,耐受胆盐和高温的优良菌株,其极限耐受条件为:pH4.2,胆盐浓度0.045克/100毫升,温度55℃。通过单因素试验和正交实验确定了腊样芽孢杆菌发酵培养基的最佳配比为(W/V):葡萄糖1.0%,豆粕粉3.0%,玉米浆0.3%。对诱变后的菌株进行了生长曲线的测定,并通过生理生化试验对筛选出来的菌株进行鉴定。     

几株高产蛋白酶菌株的分离鉴定及初步研究

从采集的245份海洋生物及环境样本中筛选高产蛋白酶菌株,进行形态学和分子生物学鉴定,并对其生物学特性和菌株间的配伍效果进行研究。结果显示,所分离的菌株中Pe、Pc为枯草芽孢杆菌,Ps为地衣芽孢杆菌。培养16 h后进入生长平台期,Pc和Ps菌株生长的最适pH均为7.0,最适生长温度均为35℃;菌株Pe的最适pH为6.5,最适生长温度是30℃。菌株Pe与Ps 1:1配伍后产酶效果最好。     

动物源乳酸菌的分离鉴定以及生物学特性研究

为了筛选性状良好的动物源乳酸菌为微生态制剂的制备提供候选菌株,试验对鸡、雏鸭、甲鱼和小鼠的肠道内容物进行细菌分离鉴定,并对鉴定的乳酸菌进行耐酸、耐胆盐和生长特性研究。结果表明:从鸡、雏鸭、甲鱼和小鼠肠道内容物中各分离出了一株乳酸菌;相比其他三株乳酸菌,分离自甲鱼肠道的类肠膜魏斯氏菌生长性能优良,具备较强的耐酸、耐胆盐能力,且在pH值为7和pH值为4.5的条件下均具有较快的生长速度。说明分离自甲鱼的乳酸菌能够作为微生态制剂制备的候选菌株。     

猪源粪肠球菌的分离与鉴定

从新鲜仔猪粪便中分离益生菌,筛选出适合养猪生产的益生菌株,为进一步开发猪用微生态制剂奠定基础。采集长春市双阳地区某猪场健康仔猪新鲜粪便,分离纯化粪肠球菌,通过形态学观察、体外耐酸耐胆盐性能和抑菌能力试验,筛选出益生特性的候选菌株,16S rDNA序列分析方法鉴定其种属,并对候选菌株生长情况及其对抗菌药物敏感性进行评价。成功筛选出2株(S-50、和S-4)耐酸、耐胆盐和抑菌能力较强的粪肠球菌,且具有较好的生长性能,为研发微生态制剂提了供理论依据。     

一株高产酸乳酸菌的分离、鉴定及高密度发酵研究

为获取产酸能力强、发酵性能好、具有强抑菌能力的乳酸菌,本试验以35日龄断奶健康仔猪粪便为菌源,对其乳酸菌进行筛选、分离、鉴定,并对分离菌株进行发酵性能研究。从35日龄断奶健康仔猪粪便中分离得到6株目标菌株,经产酸测试及抑菌试验后,得到一株产酸能力强、抑菌效果良好的筛选菌株,命名为RSJ-5。通过对RSJ-5菌株的菌落与菌体形态观察、生理生化鉴定试验、糖醇发酵试验,确定其为嗜酸乳杆菌。利用50 L发酵罐接种RSJ-5菌株厌氧发酵36 h,发酵液活菌数达158 CFU/mL,乳酸钙含量为85 mg/mL,pH4.2,发酵液对大肠杆菌、沙门氏菌有较强抑菌作用。结果表明RSJ-5嗜酸乳杆菌具备优良乳酸菌发酵剂的性能,探索了发酵工艺的可行性,为液体饲料(乳酸菌发酵液)大规模发酵生产提供参考。     

高产纤维素酶益生乳酸杆菌的分离鉴定

本研究通过从河南不同地区采集土壤、牛粪便、羊粪便等样品80余份,利用羧甲基纤维素钠MRS培养基分离能够产生纤维素酶的乳酸杆菌,通过耐酸、耐胆盐试验对菌株进行筛选,采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定了纤维素酶酶活,对筛选到的优良菌株进行了生理生化和分子鉴定。结果表明分离得到一株性能优良的菌株L.B01,显微形态呈长杆状、单个、成对或呈短链状;生理生化试验和16SrDNA序列测定鉴定该菌株为唾液乳酸杆菌,酶活为12.07U/mL。优良性能试验结果表明该菌株在pH3.0时仍能保持60%的活性,在1%的胆盐中仍具有较强的存活能力,为研究其作为饲料添加剂菌种奠定了良好基础。     

高寒草甸牧草内生解淀粉芽胞杆菌261MY6发酵工艺优化

为提高生防菌株解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）261MY6的生物量,本试验对高寒草地内生细菌解淀粉芽胞杆菌261MY6生长温度、pH和生长周期等进行测定,并结合单因素试验和正交设计试验对其发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,菌株261MY6最高生长温度为56℃、最低温度为4℃、致死温度为95℃和最适温度为28~36℃,最适pH值为5~7,在5 h进入对数生长期,在10 h时进入稳定生长期。最优发酵培养基为：牛肉膏3 g,乳糖25 g,MgSO₄ 3 g,酵母膏7 g,水1000 mL。最优发酵条件为：温度32℃,接种量14%,装液量40 mL·（150 mL）^-1,摇床转速210 rpm,pH 7。最优条件下,发酵261MY6,最佳放罐时间为30 h,活菌数达2.37×10¹² CFU·mL^-1。该结果为菌株261MY6开发为微生物菌剂奠定了基础。