九种药物对新城疫病毒的体外敏感性试验

利巴韦林、盐酸吗啉双胍(病毒灵)、聚肌胞、干扰素、黄芪多糖、双黄连、阿昔洛韦、胸腺肽、三黄植物血凝素这9种药物是临床上常用的抗病毒药物,它们对新城疫病毒的作用效果不一,试验测定了9种药物对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,并进一步对药物阻止病毒侵入CEF、抑制病毒在CEF内复制进行了测定,同时还筛选出有效的抗新城疫病毒的药物,为临床使用抗病毒药物提供了科学的理论依据.     

中草药在鸡胚成纤维细胞(CEF)上对新城疫病毒的作用研究

分离并培养鸡胚成纤维细胞(CEF),并感染新城疫病毒(NDV),通过观察细胞病变,检测在CEF上,复方中草药对NDV的影响。结果表明,中草药对新城疫病毒的中和、预防、治疗作用的最小抗病毒浓度分别是0.061mg/ml、0.244mg/ml、0.976mg/ml。     

重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究

为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID₅₀,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×2¹⁰ U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。     

生物表面活性素体外抗病毒活性

测定了表面活性素(Surfactin)的体外抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作用,并对其可能的机理进行了初步的探讨.结果表明,生物表面活性素对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)的TD50和TD0分别为62.5、16.125 mg/L;对猪肾(Porcine kidney,PK-15)细胞的TD50和TD0分别为31.25、4.03 mg/L;对NDV LaSota株、PRV株所致细胞病变效应有明显的抑制作用,可使细胞存活率显著升高;表面活性素可以直接作用于NDV LaSota株、PRV株,具有一定的抗病毒作用;同时还具有一定的预防NDV LaSota株感染及抑制其复制的作用.但对PRV病毒作用不显著.其抗病毒效果和相应的阳性对照抗病毒药物病毒唑(Ribavirin),无环鸟苷(Acyclovir,ACV)相当,并且由于其细胞毒性较弱,可作为一种抗病毒药物进行开发研究.     

6种桐籽粕提取物对鸡新城疫病毒体内体外抗病毒作用的研究

为了解6种桐籽粕提取物对正常单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的毒性作用,以及对鸡新城疫病毒(NDV)体内外抗病毒的作用效果,首先将桐籽粕提取物直接作用于正常的单层CEF,然后将桐籽粕提取物与鸡新城疫病毒37℃作用2 h,分别接种10日龄鸡胚和加入单层CEF。试验结果表明:过NKA 70%醇洗部分,对正常CEF的毒性作用最大,水提物毒性作用最小。而对新城疫病毒,水提物(0.125 m g/m l)的抗病毒效果最好;其次为过NKA大孔吸附树脂30%醇洗部分(0.2 m g/m l),然后依次是水提物(0.5 m g/m l)、水提物(0.25 m g/m l)、无水乙醇析出物(0.2 m g/m l)。     

抗病毒中药总黄酮成分复方的体外筛选

为筛选出体外抗病毒效果较好的中药总黄酮成分复方,本试验将经初步筛选出的抗病毒效果较好的淫羊藿总黄酮、黄芩总黄酮、野菊花总黄酮、三七总黄酮4个单味成分进行组方,得到9个中药总黄酮成分复方,分别从安全浓度起倍比稀释5个浓度后,以先加药物后加病毒、先加病毒后加药物、病毒和药物同时加入3种加药方式加入到CEF单层细胞中,通过MTT法观察了9个总黄酮成分复方对NDV感染CEF单层细胞的影响.结果表明,各黄酮成分复方在3种加药方式中均表现一定的抗病毒活性,以D570值和最高病毒抑制率综合评价,淫黄、淫野黄、淫三野黄3个复方的抗病毒效果最好.     

间接免疫荧光技术研究黄芪多糖体外抗新城疫病毒作用

为探究间接免疫荧光技术辅以MTT法研究黄芪多糖(APS)抗新城疫病毒(NDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)作用的可行性。将安全浓度范围内不同浓度APS和NDV以预防和治疗两种方式加入CEF培养体系中,MTT法测定CEF活力,间接免疫荧光技术检测NDV增殖情况。结果显示预防组CEF增殖活力强于治疗组,治疗组NDV的增殖量较预防组大,P<0.05或P<0.01。表明间接免疫荧光技术能直观的反应病毒在细胞上的增殖情况,该技术联合MTT法研究中药抗病毒作用可靠、可行。     

利用RNAi技术靶向新城疫病毒P基因抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制

构建了针对新城疫病毒NDV NA-1株P基因的RNAi质粒;转染质粒36 h后接种NDV,通过对病毒滴度测定、实时荧光定量PCR和细胞病变结果分析,表明其能抑制NDV在CEF中的复制和增殖.本试验为进一步研究NDV复制机理和抗病毒治疗提供了技术基础.     

细胞病变观察法检测人参皂苷及其衍生物抗马立克氏病病毒的作用

为探讨人参皂苷及其衍生物体外抗马立克氏病病毒的作用机理,采用体外细胞培养法,在药物安全浓度范围内,测定人参皂苷及其衍生物对马立克氏病病毒(MDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的保护效果。结果显示,修饰前的人参皂苷和修饰后的衍生物7具有较好的抗病毒效果。表明人参皂苷和衍生物7可以减轻病毒对CEF细胞的损伤程度。     

人参皂苷体外抗鸡新城疫病毒的效果观察

采用细胞培养法,在药物安全浓度范围内,测定人参皂苷对新城疫病毒(NDV)感染鸡胚成纤维细胞的保护效果,旨在观察人参皂苷抗NDV的效果,以筛选出作用较好的抗病毒中药,为研制新型抗病毒药物提供理论依据.