抗肝片吸虫病药物化合物：N-（2＇，4＇，5＇-三氯）苯基-2-羟基-3，5，6-三氯苯磺酰胺的杀虫活性研究

本文研究了治疗牛、羊等家畜肝片吸虫病药物N-（2＇，4＇，5＇-三氯）苯基-2羟基-3，5，6-三氯-苯磺酰胺化合物的杀虫机理，通过实验及药物分子的结构分析，初步认为其杀虫机理是对线粒体氧化磷酸化反应的解偶联作用；采用氧电极法、测线粒体呼吸过程中磷的变化以及测ATP酶活性等方法研究其对线粒氧化磷酸化反应的解偶联作用，结果表明标题药物化合物是较好的解偶联剂，其解偶联活性高于典型的解偶联剂DNP。     

抗肝片吸虫病药物化合物：N—（2′，4′，5′—三氯）苯基—2—羟基—3，5，6—三氯苯磺酰胺的杀虫活性研究

本文研究了治疗牛、羊等家畜肝片吸虫病药物N－（2′，4′，5′－三氯）苯基－2羟基－3，5，6－三氯－苯磺酰胺化合物的杀虫机理，通过实验及药物分子的结构分析，初步认为其杀虫机理是对线粒体氧化磷酸化反应的解偶联作用；采用氧电极法、测线粒体呼吸过程中磷的变化以及测ATP酶活性等方法研究其对线粒氧化磷酸化反应的解偶联作用，结果表明：标题药物化合物是较好的解偶联剂，其解偶联活性高于典型的解偶联剂DNP。     

UCPs基因多态性与脂肪代谢的相关性研究

解偶联蛋白(uncoupling protein,UCPs)是线粒体内膜上具有调节质子跨膜转运作用的载体蛋白,在调节动物能量代谢、脂肪沉积及脂肪酸氧化等方面起着重要作用。到目前为止,至少有5种(UCP1、UCP2、UCP3、UCP4和UCP5)这个家族的蛋白质已经在人类、哺乳动物、禽类、鱼甚至在植物的不同组织线粒体的内膜上被发现。UCPs在能量代谢动态平衡中、机体生热作用、肥胖、糖尿病及自由基代谢中起到重要的作用,解偶联蛋白基因已经被列为参与能量代谢和体温调节的候选基因。大量的研究报道了人类UCPs基因突变对脂肪代谢、糖尿病及其并发症、肥胖症的影响。作者从UCP1、UCP2及UCP3基因的定位、结构、分布、基因的多态突变与脂肪代谢、糖尿病及肥胖症之间的相关性研究进行了综述。     

猪UCP3基因的分离与多态分析

解偶联蛋白3是一种线粒体内膜上的转运蛋白,可以使氧化过程与ADP磷酸化过程解偶联。本研究分离了猪UCP3基因的外显子2~3和外显子6。经过序列分析,发现猪UCP3基因共有3处框移突变和18个SNP位点。在猪UCP3片段中分别包含一个SmaⅠ和SduⅠ酶切位点。UCP3片段SmaⅠ位点在大白×梅山F2家系中经PCR-RFLP分析,表现为AA、AB和BB 3种基因型,A基因频率为0.57,B基因频率为0.43。因此,可以将UCP3基因作为猪分子遗传育种的候选基因。     

哺乳动物精子线粒体研究进展

哺乳动物精子线粒体是维持精子活力的关键细胞器,对精子超激活运动、获能、顶体反应及受精等过程起到重要的调节作用。哺乳动物精子线粒体特有的形态特征与特异性酶异构体使其具有独特动力学和调节特性。精子线粒体中发生的氧化磷酸化过程是维持精子运动的重要途径,该过程产生的活性氧对精子功能的维持具有重要作用,但过量可能导致精子损伤,加速精子凋亡。哺乳动物精子质膜磷脂酰丝氨酸外翻和相关半胱氨酸蛋白酶激活级联反应引起细胞凋亡。区别于体细胞线粒体,精子线粒体钙信号可能并未参与精子固有的凋亡途径,作为衡量线粒体功能的敏感指标,其对线粒体膜电位和耗氧量的检测研究至关重要。哺乳动物精子线粒体具有自身的遗传系统,线粒体基因拷贝数可能作为无创衡量精子质量和受精能力的标记。作者重点阐述了哺乳动物精子线粒体的结构、线粒体鞘的形成及其生物功能,包括发生在线粒体中的氧化磷酸化过程、活性氧对精子的利与弊、线粒体参与钙稳态与细胞凋亡过程;介绍了线粒体膜电位和耗氧量的检测,简述了线粒体基因组的研究进展,为进一步探讨线粒体所涉及的精子功能机制奠定基础。     

哺乳动物精子线粒体研究进展

哺乳动物精子线粒体是维持精子活力的关键细胞器，对精子超激活运动、获能、顶体反应及受精等过程起到重要的调节作用。哺乳动物精子线粒体特有的形态特征与特异性酶异构体使其具有独特动力学和调节特性。精子线粒体中发生的氧化磷酸化过程是维持精子运动的重要途径，该过程产生的活性氧对精子功能的维持具有重要作用，但过量可能导致精子损伤，加速精子凋亡。哺乳动物精子质膜磷脂酰丝氨酸外翻和相关半胱氨酸蛋白酶激活级联反应引起细胞凋亡。区别于体细胞线粒体，精子线粒体钙信号可能并未参与精子固有的凋亡途径，作为衡量线粒体功能的敏感指标，其对线粒体膜电位和耗氧量的检测研究至关重要。哺乳动物精子线粒体具有自身的遗传系统，线粒体基因拷贝数可能作为无创衡量精子质量和受精能力的标记。作者重点阐述了哺乳动物精子线粒体的结构、线粒体鞘的形成及其生物功能，包括发生在线粒体中的氧化磷酸化过程、活性氧对精子的利与弊、线粒体参与钙稳态与细胞凋亡过程；介绍了线粒体膜电位和耗氧量的检测，简述了线粒体基因组的研究进展，为进一步探讨线粒体所涉及的精子功能机制奠定基础。     

铜对肉鸡肝细胞线粒体H2O2生成的影响

选用硫酸铜作为实验铜源,向即时分离的肉鸡肝细胞线粒体溶液内加入不同浓度的铜,孵育不同时间后,以2',7'-二氯二氢荧光磺为荧光指示剂,琥珀酸盐为底物,以SOD为催化刑观察在不同抑制剂存在下肝细胞线粒体H2O2生成的变化.结果显示:分别用10 μmol/L Cu(试验组Ⅰ)、20 μmol/L Cu(试验组Ⅱ)和30 μmol/L Cu(试验组Ⅲ)孵育线粒体10 min后.其过氧化氢生成速率显著高于对照组(0 μmol/L)(P<0.01).此外各组的起始H2O2含量也随铜浓度的升高和孵育时间的延长而增加.结果表明.Cu2-对线粒体H2O2的生成有显著影响,不但可以提高线粒体中的基准H2O2含量,而且能加快H2O2的生成速率.铜浓度越高.孵育时间越长,生成速率越大,说明铜可诱导体内的氧化反应,或降低体内的抗过氧化作用,促使线粒体氧化呼吸链中电子的漏出.在SOD催化下,H2O2生成增多并加快.这种现象的发现可能是微量元素铜对生物机体造成毒害作用的原因之一.     

波尔山羊线粒体融合蛋白2基因的克隆及序列分析

线粒体融合蛋白2(mitofusin-2,MFN2)是位于线粒体外膜上的跨膜蛋白,也是外膜的信号分子和药物作用靶蛋白,它在细胞增殖、分化、凋亡和多种疾病中起着重要作用。为深入研究山羊MFN2基因在炎症疾病过程中的分子作用机制,本试验采用RT-PCR的方法克隆了波尔山羊MFN2基因,并对其进行了序列测定及其编码蛋白的结构分析。结果显示,克隆得到的波尔山羊MFN2基因大小为2 441 bp,其编码的蛋白由705个氨基酸组成。波尔山羊MFN2基因种间同源性低,存在Fzo-mitofusin结构域、DLP-2结构域,是结构保守蛋白;存在1个潜在跨膜区,位于576—595位氨基酸(loop1);不存在信号肽。试验首次克隆了波尔山羊MFN2基因,为探索山羊MFN2基因与炎症发生之间关系的分子机制提供了基础数据。     

线粒体与种子老化的关系

种子作为最基本的生产资料,其活力高低直接关系到农业生产的成败。关于种子老化机理的研究是种子科学研究的热点和难点。线粒体是真核生物细胞内重要的细胞器,是细胞能量合成和物质代谢的中心,也是活性氧产生的主要位点,且普遍认为,活性氧是导致种子老化的主要因素。种子老化过程中线粒体的典型结构逐渐被破坏,呼吸速率和氧化磷酸化效率降低,抗氧化功能发生改变,因此,本文主要概述种子的老化与线粒体结构、呼吸作用、抗氧化系统变化的关系,并阐述线粒体与细胞程序性死亡关系的研究进展,系统分析种子老化与线粒体变化研究中存在的问题及未来发展趋势,以期为研究种子老化的线粒体作用机理提供理论基础。     

线粒体DNA在先天性免疫中的作用

线粒体是细胞内重要的细胞器,具有多种功能,是细胞的能量工厂。线粒体含有自己的遗传物质线粒体DNA,线粒体DNA因其在氧化磷酸化中的作用而广为人知。近年来,越来越多的研究表明线粒体DNA可作为先天性免疫系统的激动剂,并在病原体感染和炎性疾病的病理发展中起重要作用。线粒体DNA在进入细胞质或细胞外环境后,可以激活多种先天性免疫系统的模式识别受体,从而触发促炎细胞因子分泌和Ⅰ型干扰素反应。因此,本文就线粒体DNA激活先天性免疫的机制以及其在病原体感染和相关疾病发生发展中的作用进行讨论、总结,以期为进一步深入开展线粒体DNA在病原体感染及相关疾病中的作用及其机制研究提供理论依据。     

猪水泡病病毒5''和3''非编码区一级和二级结构分析

应用RT-PCR技术,用特异性引物扩增出SVDV HK’70 5’和3’非编码区,并将目的片段连接于pMD18-T载体,转化JM109感受态细胞。重组质粒经双酶切、PCR鉴定后测序。核苷酸序列比较结果表明,SVDV HK’70 5’非编码区与参考毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76核苷酸的差异率分别为1.6％、1.9％;SVDV HK’70 3-NCR与参考毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76核苷酸的差异率分别为1.0％、1.0％。应用计算机软件对3个SVDV毒株非编码区的二级结构进行预测,结果表明,SVDV HK’70 5’非编码IX-"级结构中存在13个结构域,SVDV J1’73 5’非编码区二级结构中存在9个结构域,SVDV H/3’76 5’非编码区二级结构中存在10个结构域;SVDV HK’70 3’非编码区二级结构中存在3个结构域,且与其他的两个毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76基本相同。     

Effect of oral administration of 3,3',4,4',5-pentachlorobiphyenl on the intestinal microbiota of Sprague–Dawley rats

The effect of the endocrine-disrupting chemical 3,3',4,4',5-pentachlorobiphyenl (PCB 126) on intestinal microbiota after oral administration, and the improvement of intestinal microbiota and feces quantity by the subsequent administration of Lactobacillus acidophilus or Lactobacillus reuteri was investigated. All the rats were given 100 μg/kg bodyweight of PCB 126. The changes in bacterial counts were confirmed using a culture method. The administration of PCB 126 tended to decrease the bacterial counts of lactobacilli (10^9.6−10^10.2 to 10^8.8−10^9.2) and bifidobacteria (10^5.3−10^6.1 to 10^3.6−10^4.2), and to increase those of Enterobacteriaceae (10^8.2−10^9.1 to 10^9.4−10^10.3) and staphylococci (10^6.6−10^7.4 to 10^7.2−10^8.4) compared to no PCB 126 administration. After administration of PCB 126, L. acidophilus or L. reuteri orally administered to rats caused Enterobacteriaceae and staphylococci counts to decrease, suggesting that the intestinal microbiota was improved by the lactobacilli. The administration of L. acidophilus and L. reuteri improved the balance of intestinal microbiota, and defecation volume returned to its normal level. L. acidophilus and L. reuteri have a remedial effect on intestinal microbiota affected by PCB 126 and can function to lessen accumulated PCB 126 volume.     

制备性分段电泳纯化基因工程白细胞介素—2

采用具有高分辨率特性的聚丙烯酰胺凝胶为载体,以电泳技术将工程菌株的各种蛋白成分精细分离,再用紫外检测手段对白细胞介素—2(IL—2)基因表达产物在凝胶上定位,通过准确地切割凝胶,提取其中的蛋白质,获得了高纯度(>95%)的基因工程IL—2产物.经用同位素掺入法测定,其对小鼠胸腺细胞有明显的促进增殖活性     

无公害食品鄂梨1号、鄂梨2号

1范围 本标准规定了无公害食品鄂梨1号、鄂梨2号的要求、检验方法、检验规则和标志. 本标准适用于无公害食品鄂梨1号、鄂梨2号果品质量检测.     

PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建

根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列，分别设计一对引物，应用PCR和RT-PCR扩增出PCV-2 ORF2基因和PRRSV ORF5基因。将PCR产物ORF2经Nhe Ⅰ／EcoRⅠ双酶切回收后插入真核表达载体pIRES得到pIRES-ORF2，RT-PCR产物ORF5经NotⅠ／XbaⅠ双酶切回收后插入pIRES-ORF2构建重组质粒pIRES-ORF2／ORF5。对此质粒中的插入片段，进行PCRRT-PCR及双酶切鉴定，同时对插入序列进行测序分析，表明SD1株ORF2与国内多种毒株的同源性为99％，pIRES-ORF2ORF5转移载体ORF5基因的核苷酸推导氨基酸与北美洲原型（VR-2332株）氨基酸同源性为99％。此重组表达载体的成功构建，为进一步研究PCV-2ORF2及PRRSV ORF5编码蛋白的生物学活性及研究猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二联核酸疫苗奠定了基础。     

表达PRRSV ORF5和PCV2 ORF2基因的重组鸡痘病毒的构建及鉴定

分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞,进行同源重组。通过3次溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)加压筛选,经RT-PCR、IFA和Western blot鉴定,表明重组鸡痘病毒中的目的基因在鸡胚成纤维细胞中得到表达,获得一株携带有目的基因ORF2和ORF5的重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5。     

IBV D41株主要结构基因及3′端非编码区序列分析

采用反转录及聚合酶链式反应 ( RT-PCR) ,成功地扩增出鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)人工致弱毒D41株 S1基因、M基因、N基因和基因组 3′端非编码区 ( U TR)的 c DNA。序列测定结果表明 :D41株的 S1基因全长 1611bp(从 ATG到 S前体蛋白裂解位点 ) ,编码一条由 53 7个氨基酸组成的多肽 ;M基因全长 678bp,编码一条由 2 2 6个氨基酸组成的多肽 ;N基因全长 12 3 0 bp,编码一条由 410个氨基酸残基组成的多肽 ,3′端 UTR长度为52 5bp,其中高变区 ( HVR)长度为 2 2 5bp。与国内外已报道的一些 IBV标准毒株的相应基因序列进行核苷酸序列同源性分析后发现 :D41株与麻省血清型的毒株同源性最高 ,尤其与国际常用的标准疫苗株 H52和 H12 0的亲缘关系最接近。但它与国内“腺胃型”毒株 QXIBV在系统发生进化树上却相隔较远     

雏鸡人工感染马立克氏病强毒后白细胞介素2及其受体的变化

１日龄雏鸡人工感染马立克氏病强毒后，脾脏Ｔ淋巴细胞白细胞介素２诱生活性比健康对照雏鸡显著降低，胸腺Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２诱生活性虽见降低但无统计学显著性差异。脾脏和胸腺Ｔ淋巴细胞白细胞介素２受体诱导表达显著减少。     

猪IL-2真核表达质粒构建及对PRRSV-ORF5基因疫苗免疫佐剂作用的研究

本研究应用真核表达载体pcDNA3.1（＋）和猪白细胞介素2（IL-2）基因成功构建了IL-2的真核表达质粒（pcDNA-IL-2）,探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）ORF5基因疫苗（pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5）免疫猪的增强作用。经间接ELISA法、MTT比色法及流式细胞仪分别对pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪、pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪、pcDNA3.1（＋）空载体和灭菌水免疫对照猪的血清抗PRRSV抗体IgG、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4^＋和CD8^＋细胞比例进行检测,结果表明pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪的IgG含量、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4^＋和CD8^＋细胞比例与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪相比有显著差异（P〈0.05）。说明pcDNA-IL-2能显著增强pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫猪的体液和细胞免疫应答,可作为PRRSV基因疫苗的良好佐剂。