几个绵羊品种染色体Ag-NORs的研究

利用外周血淋巴细胞培养法研究了 4个绵羊品种的 Ag- NORs,结果表明 ,绵羊 Ag- NORs定位于 1 ,2 ,3,4和未判定的 2对小型染色体上。同羊、汉中绵羊、兰州大尾羊及罗姆尼羊的 Ag- NORs均数分别为 5.41± 1 .1 9,4.50± 1 .2 9,5.2 9± 1 .2 1和 5.60±1 .2 4 ,并且在品种间有显著或极显著差异 (P<0 .0 5,P<0 .0 1 )     

长距离PCR法扩增RHDV全基因组及其序列分析

从人工感染RHDV致死的兔肝组织中提取病毒总RNA,应用特异性引物将病毒RNA反转录成cD-NA,以此为模板用长距离PCR法扩增RHDV全基因组,将成功扩增出的RHDV全基因组克隆到pMD18-T载体中,经PCR鉴定及酶切分析后进行序列测定。测序结果表明,JX97全基因组由7 437个核苷酸组成,包括由9个核苷酸组成5′NCR、59个核苷酸组成3′NCR和一个至少含有27个核苷酸的poly(A)尾。序列比较结果显示,RHDVJX97株的衣壳蛋白与已报道的参考毒株具有较高的序列同源性,均在90%以上,提示所有的RHDV分离株具有较近的亲缘关系。     

奶山羊乳房炎灭活疫苗的制备及免疫效果检测

为评估奶山羊乳房炎灭活疫苗的免疫效果,以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性表皮葡萄球菌及产色葡萄球菌为材料,经甲醛37℃灭活,按照6∶1（V／V）与铝胶盐充分混匀,分别经腹股沟皮下、颈部皮下注射途径,免疫泌乳期奶山羊,免疫剂量均为2 mL,共免疫2次,每次间隔14 d。分别在免疫前及第1次免疫后10、24、60、180 d 采集血样和乳样,ELISA 测定抗体效价,用快速诊断液检测隐性乳房炎,统计患病奶山羊的数量。结果显示,与对照组相比,两次免疫后血液及乳汁中针对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性表皮葡萄球菌及产色葡萄球菌的抗体效价含量均显著增加（P ＜0．05）,抗体维持时间长;颈部皮下免疫组免疫后180 d,腹股沟皮下免疫组免疫后的60 d,隐性乳房炎奶山羊数量均明显下降。结果表明,本研究制备的奶山羊乳房炎疫苗不仅能够刺激机体产生较好的体液免疫应答,而且还对隐性乳房炎有显著的治疗效果。     

逆向遗传学技术在猪瘟病毒研究中的应用

猪瘟是猪的最严重疾病之一,其病原 是猪瘟病毒,基因组为单股正链RNA。猪瘟 弱毒疫苗在猪瘟的免疫防治中发挥了巨大作 用,但由于弱毒疫苗免疫的动物不能从血清 学上与自然感染动物区分,使其应用受到很 大限制,研制标记疫苗是解决这个问题的重 要途径。由于RAN的结构不稳定成为阻碍 RNA病毒研究的主要障碍,所以病毒分子生 物学是新型猪瘟疫苗研究的必要手段。近年 来兴起的逆向遗传研究将RNA病毒的基因 组转化为cDNA,文章就猪瘟病毒逆向遗传 研究的意义、方法、概况及其在猪瘟新型疫苗 研究中的应用进行了全面综述。     

新城疫病毒HN基因片段原核表达重组质粒的构建

根据GenBank中发表的新城疫病毒F48E9基因序列设计引物,采用RT-PCR技术,成功获得了该病毒HN基因中两个不交叉的基因片段,长度分别为790bp和579bp.将这两段基因分别克隆到pGEM-T vector中,经酶切鉴定和测序后克隆到原核表达栽体pET-28a,PCR和酶切鉴定表明,克隆的两个新城疫病毒基因片段已经正确地插入到了原核表达载体pET-28a之中.     

猪瘟病毒及其全长cDNA在猪肾细胞中增殖表达特性的比较研究

以猪瘟C-株弱毒疫苗株、经典强毒石门株和C-株全长cDNA为试验材料，以免疫荧光技术为主；结合ELISA和RT-PCR检测技术，对其在培养细胞中的增殖特性和表达规律进行了比较研究。同时筛选猪瘟病毒及其全长cDNA的敏感细胞，探索其增殖表达规律，以便为猪瘟病毒反向遗传操作提供技术方法和可操作的条件。     

猪瘟病毒C株重组标记疫苗的构建

利用构建的猪瘟病毒C株感染性克隆作为骨架，利用猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因作为标记基因，将GP5基因引入猪瘟病毒感染性cDNA中，体外转录得到RNA，转染SK6细胞后，检测了传代细胞中重组猪瘟病毒包含GP5区段的一段重组序列。结果表明，GP5基因稳定地插入在重组病毒基因组中，改造后的重组病毒可望作为C株活病毒标记疫苗。     

转移因子对犬细小病毒体外增殖的影响

转移因子(transfer factor,TF)是从淋巴细胞中提取的一类低分子肽,具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体特异性和非特异性细胞免疫功能等作用,被誉为T细胞活性的触发剂、细胞免疫增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生     

猪生殖与呼吸综合征病毒多基因重组真核表达质粒的构建及诱导的小鼠体液免疫

根据猪生殖与呼吸综合征病毒已知序列设计了3对引物,采用RT—PCR方法分别扩增ORF3、ORF5和ORF6基因,并将其依次与真核表达质粒pcDNA4．0定向连接,构建了重组质粒pcDNA4．0-ORF6-ORF3-ORF5,经提纯后,给试验组小鼠后肢胫前肌注射,每只100big,2周后再注射1次。首免后每隔7d采血1次,用间接ELISA检测血清抗体水平并测定其中和抗体水平。结果显示,所构建的重组质粒能够诱导小鼠产生很高的ELISA抗体和中和抗体水平。