肌注猪促生长激素释放因子(pGRF)基因质粒后猪神经内分泌生长轴激素的变化规律

试验探讨pGRF基因质粒在猪体内的表达效应及作用机理。将10头体重相近([15.24±0.53)kg]、遗传基础相似的健康杜×长×大三元杂交阉公猪安装颈静脉血导管,随机分成2组。试验开始时,试验组每头猪左侧臀部肌肉注射4.5mgpGRF基因质粒,第30d时,试验组每头猪右侧臀部肌肉注射相同剂量pGRF基因质粒,对照组两次分别注射2ml生理盐水。测定采样血浆中GRF、SS、GH及IGF-I的浓度。结果表明:①第一次注射pGRF基因质粒8d时,试验组GH的水平较对照组有显著提高(P<0.05),第12dGH水平达最高,为对照组的157%(P<0.01);第8、12、17、22d的IGF-I水平分别为对照组的185%(P<0.01)、237%(P<0.01)、200%(P<0.01)、131%(P<0.05);第12d试验组的SS水平较对照组有明显下降(P<0.05),其余时间无明显变化;GRF的水平在第12d分泌量达到最高,为对照组的143%(P<0.01),17d为对照组的133%(P<0.05),此后逐步下降又上升,与对照组的水平差异不显著。②在此试验条件下,基因质粒在5～8d开始缓释表达,12d左右达到表达高峰,其有效剂量持续时间在20d以上。③第二次注射基因质粒后,试验组第33d以后GH的水平逐渐升高,到45dGH水平达到峰值,为对照组的144%(P<0.05);第39、45、60d的IGF-I水平分别为对照组的166%(P<0.05)、173%(P<0.05)、117%(P<0.05);GRF的水平在45d分泌量达到最高,为对照组的138%(P<0.05),其余时间无明显变化;SS水平较对照组无显著差异。④相关分析表明:注射基因质粒后,试验组GH与GRF的相关系数为0.81(P<0.01),与SS的相关系数为-0.65(P>0.05);GH、GRF与IGF-I存在着正相关,SS与IGF-I存在负相关性,除GH与IGF-I的相关系数为0.67,达到显著正相关水平(P<0.05),其余指标与IGF-I均未有显著相关。     

注射pGRF基因质粒对由脂多糖或三联疫苗诱导的免疫应激仔猪生长和免疫指标的影响

为研究猪生长激素释放因子(pGRF)基因质粒对由脂多糖或三联苗诱导的免疫应激仔猪生长性能和免疫指标的影响,选用36头(28±2)d断奶的杜长大(Duroc×Landrace×Yorkshire,DLY)三元杂交仔猪,按体重相近、阎公猪和母猪各1/2的原则,分为对照组(不注射pGRF基因质粒、大肠杆菌LPS或三联苗)、注射pGRF组、注射脂多糖(LPS)组、注射pGRF+LPS组、注射三联疫苗组(猪瘟兔化弱毒,猪丹毒杆菌G4T10弱毒,猪源多杀性巴氏杆菌E0630弱毒)和注射pGRF+三联疫苗6个处理,每个处理6个重复,每个重复1头猪.试验开始时,pGRF组、pGRF+LPS组、pGRF+三联疫苗组的仔猪大腿肌肉分别注射1.0 mg pGRF基因质粒;试验的第11天给LPS组、pGRF+LPS组仔猪注射100 ug/kg LPS生理盐水溶液,三联疫苗组以及pGRF+三联疫苗组注射2头份三联苗生理盐水溶液,对照组和pGRF组注射生理盐水;第18天时按照第11天的操作重复进行.结果表明,在2次注射LPS或三联苗后,即10～17 d和17～24 d阶段,pGRF+LPS组仔猪的ADG显著(10～17 d,P<0.05)或极显著(17～24 d,P<0.01)高于LPS组,F/G均显著低于LPS组(P<0.05);pGRF+疫苗组仔猪ADG均显著高于疫苗组(P<0.05),F/G显著低于疫苗组(P<0.05).在第11天和第18天,pGRF+LPS组仔猪的血清细胞因子(IL-1、IL-6)水平均极显著低于LPS组(P<0.01),类胰岛素生长因子(IGF-I)和IgG浓度均极显著高于LPS组(P<0.01);pGRF+疫苗组仔猪的血清IL-1和IL-6浓度显著低于疫苗组(P<0.05),lgG浓度极显著(11 d,P<0.01)或显著(18 d,P<0.05)高于疫苗组,IGF-I浓度显著(11 d,P<0.05)或极显著(18 d,P<0.01)高于疫苗组.证明pGRF基因质粒能缓解由LPS或三联疫苗免疫应激引起的仔猪生长抑制;能够抑制由脂多糖或三联苗诱导的血清IL-1和IL-6浓度的上升和血清IGF-I浓度的降低,同时能提高免疫应激仔猪的血清IgG浓度.     

生长肥育猪骨骼肌注射表达pGRF基因质粒的效应研究

将猪的GRF基因表达质粒注射于猪的骨骼肌后,研究其促生长效应与机理。选用始重6.3kg的44头去势长白×太湖仔猪,分6组,采用2×3因子安排的完全随机区组设计,按6～10kg、10～20kg、20～50kg、50～100kg4个阶段饲养。4个饲养阶段的饲粮低蛋白水平分别是20.70%,17.90%,15.03%,13.00%;高蛋白水平分别是23.70%,20.90%,18.02%,16.00%。pGRF基因质粒注射剂量设0mg、0.5mg、1.0mg3个水平,于试验开始与试验猪体重达60kg时共注射基因质粒2次。测定各阶段日增重,饲料消耗量,耗料增重比以及30、70、100kg时血液中GH、GRF、IGF-I的浓度。100kg时屠宰进行胴体品质测定。结果表明:饲粮蛋白水平对各阶段及全期试验猪日增重均有显著影响(P<0.05或P<0.01),对50～100kg阶段与全期日采食量和耗料增重比有显著影响(P<0.05或P<0.01)。注射pGRF基因质粒对各阶段及全期日增重均有显著影响(P<0.05),对6～10kg、10～20kg、50～100kg3阶段及全期日采食量有显著影响(P<0.05),对6～10kg阶段、50～100kg阶段及全期耗料增重比有显著影响(P<0.05)。注射pGRF基因质粒对30kg及70kg体重时猪血液中GRF、GH、IGF-I浓度均有显著影响(P<0.05)。提高饲粮蛋白水平与注射pGRF基因质粒均可明显降低超声波测膘厚及屠宰测膘厚、增大眼肌面积(P<0.05)。     

给猪注射pGRF基因质粒安全性的研究

将56头35日龄断奶DLY仔猪,随机分为4个处理,每个处理2个重复,每个重复7头猪。4个处理分别为对照组、3 mg组(第1天注射3 mg pGRF)、6 mg组(第1、45天分别注射3 mg pGRF)、9 mg组(第1天注射3 mgGRF、第45天注射6 mg pGRF)。到150 d时结束饲养试验,每个处理选择8头猪进行放血屠宰。屠宰前采试猪的全血10 mL制备血浆,分别测定血浆GH、SS和GRF的含量;屠宰后取心、肝、脾、肺和肾各一块用于制作组织切片;另取心、肝、脾、肺、肾、注射质粒部位肌肉和非注射部位肌肉各一块用于检测质粒的残留。结果表明:屠宰前各处理血浆激素的浓度没有显著差异(P>0.05),注射3 mg和6 mg使猪肝脏的器官系数显著下降(P<0.05),对其他器官和功能没有产生不良影响;注射9 mg使肝脏和肾脏产生广泛的颗粒变性。质粒的残留仅在9 mg组注射部位肌肉中能检测到。综合各项试验结果6 mg以下注射剂量的pGRF基因质粒在养猪生产上的使用是安全的。     

猪生长激素释放因子基因质粒对猪生长发育的影响

试验选用 30头杜洛克×太湖和汉普夏×太湖二元杂仔猪 ,平均 4 4日龄断奶 ,体重 (10 .30± 1.80 )kg ,研究了经腿部肌肉注射 0 ,0 .2 5 ,0 .5 ,1.0和 2 .0mg猪生长激素释放因子 (pGRF)基因质粒对猪生产性能、胴体品质和血液参数的影响。试验结果表明 ,pGRF基因质粒对猪不同生长阶段生产性能的影响不同 ,10～ 4 0kg阶段促生长效果好于 4 0～ 10 0kg阶段 ,且促生长效果与剂量有关。相对于促生长效果 ,在猪整个生长阶段pGRF基因质粒对饲料利用率的改善效果更明显。 10 0kg体重屠宰 ,2mg组对胴体品质改善最明显 ,但对肉质无影响 ;血液中GH、IGF I、GRF及血糖浓度和血清尿素氮与对照组均无显著差异     

沙棘提取物对东北民猪断奶仔猪生长性能和血清激素水平的影响

试验选用28±2日龄断奶的东北民猪仔猪24头,随机分成试验组和对照组,每组3个重复,每重复4头猪(公母各半)。试验组在对照组饲粮中添加0.1%沙棘提取物,研究沙棘提取物对东北民猪断奶仔猪生长性能和血清激素水平的影响。结果表明,试验组采食量显著低于对照组(P<0.05)。试验组在试验第7和28天时血清IGF-I浓度显著高于对照组(P<0.05);试验组在试验第21天时血清SS显著低于对照组(P<0.05)且在试验第28天时血清皮质醇浓度显著降低(P<0.05)。     

pGRF基因质粒对猪胴体性状和肌肉品质的影响

为研究猪生长激素释放因子(pGRF)基因质粒对猪胴体性状和肌肉品质的影响,试验选用24头大白×长白二元杂交去势公猪平均体重(17.25±0.62)kg,随机分为4个处理,每个处理6个重复,分别经臀部注射0、4.0 mg、6.0 mg和8.0 mg的pGRF基因质粒。结果表明:注射4.0 mg和6.0 mg的pGRF基因质粒有提高猪宰前活重、眼肌面积、屠宰率、胴体直长、胴体斜长及降低背膘厚的趋势,其中6.0 mg组宰前活重和胴体斜长与对照组相比差异显著(P0.05)。注射pGRF基因质粒对猪肌肉品质无显著影响(P0.05)。     

仔猪骨骼肌注射pGRF基因质粒的促生长及代谢调控效应研究

给体重约 5 0kg的长白×太湖仔猪以 0 2 5、0 5、1 0、2 0mg剂量半腱肌部位注射 pGRF基因的表达质粒 ,5～ 10kg阶段终体重分别比 0mg组增加 4%、17%、2 0 %和 16 % ,日增重增加 8%、37%、43%和 36 % ,采食量提高 17%、2 7%、2 3 %和 11% ;耗料增重比 ,0 5mg组、1 0mg组及 2 0mg组分别比 0mg组降低 8%、14%和 18%。1 0mgpGRF基因质粒使血液中生长激素释放因子 (GRF)比对照组升高 1 6倍 (P <0 0 5 )、生长激素 (GH)升高2 5倍 (P <0 0 1)、类胰岛素生长因子 (IGF Ⅰ )升高 2 3倍 (P <0 0 1) ,血液中尿素浓度降低 2 0 % (P <0 0 5 ) ,血液中甘油三酯浓度 (TG)明显下降 (P <0 0 5 )。试验研究还证明生长抑素 (SS)分泌的增加是限制 pGRF基因质粒高用量时正效应发挥的重要因素 ,1mg为 5～ 10kg阶段仔猪注射 pGRF基因质粒的适宜剂量。     

活体电穿孔方法提高外源GRF基因在小鼠肌肉组织中的表达

向小鼠后肢小腿肌注pGRF表达质粒并加以电穿孔条件,注射剂量分别为5,10,50μg,于注射前及注射后10,20,30d测体质量,并采血分离血清测血清GRF水平。结果显示,5μgpGRF质粒电穿孔组注射后10dGRF分别比对照组、5μgpGRF质粒组升高44.73%(P0.05),12.86%(P0.05);血清中GRF水平升高。30d累积增重,5μgpGRF质粒电穿孔组分别比对照组、5μgpGRF质粒组高11.46%,6.75%(P0.05);10μgpGRF质粒组分别比对照组和10μgpGRF质粒电穿孔组高19.52%(P0.05),19.42%(P0.05)。50μgpGRF质粒组45d累积增重分别比对照组、pGRF质粒电穿孔组高14.00%,12.00%(P0.05)。结果表明,电穿孔处理可提高GRF基因在小鼠肌肉中的表达。     

生长激素释放因子(GRF)在动物肌肉组织的表达

向大鼠后肢小腿前部注射生长激素释放因子 ( GRF)的表达质粒 pc DNA3 -GRF4 0 μg,于注射后 2 d开始 ,每隔 5d杀 2只取样 ,提取 RNA和 DNA,用 PCR和 RT-PCR检测质粒及其表达。结果表明 ,在 3 0 d时仍为阳性结果。注射部位肌肉组织免疫组化检测结果表明 ,在部分大鼠 ( 1 4/ 2 4 )的肌肉组织中检测到了 GRF分子。给家兔注射 pc DNA3 -GRF质粒 1 0 0μg(第 组注射质粒 ,第 组注射含 1 0 %甘油的质粒 ) ,于注射后 1 d开始采血分离血清 ,用 RIA法测定血清生长激素 ( GH)的水平。结果表明 ,第 组在 5d时 ,GH水平上升2 7.1 %( P <0 .0 5)。本研究结果表明 ,外源 GRF在肌肉组织可获得表达 ,并能提高动物体内的 GH水平