JEV分子生物学与新型疫苗研究进展

流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严惩危害人畜健康的虫媒病毒。本文对JEV的基因组结构、结构蛋白、非结构蛋白及其功能、重组活疫苗和核酸疫苗的研究现状以及与常规疫苗相比所具有的优缺点等方面进行了较为详尽的综述，并且提出JEV复制的确切机制及其蛋白尤其是非结构蛋白的结构与功能尚需深入研究，以期为坦步改良JE新型疫苗打下基础。     

日本脑炎病毒NS3蛋白多克隆抗体的制备

日本脑炎(JE)是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种中枢神经系统疾病。该病可以感染人和多种动物,并造成不可逆的神经损害。NS3蛋白在JEV多聚蛋白水解过程中起着重要的作用,是日本脑炎病毒复制所必需的。因此,NS3蛋白可能成为治疗日本脑炎的潜在药物靶标。研究成功构建了p ET-28a-NS3质粒,并在IPTG诱导下被大肠杆菌BL21(DE3)成功表达,表达的重组蛋白分子量为55 ku,与预测分子量相符;用NS3蛋白免疫BALB/c小鼠,制备阳性血清,经间接免疫荧光法(IFA)鉴定。结果表明:制备的NS3蛋白阳性血清可与感染JEV病毒的细胞产生荧光反应。     

病毒与宿主细胞相互作用:乙型脑炎病毒复制组装机制

正乙型脑炎病毒(JEV)主要在东南亚地区流行,且存在全球性扩散风险。JEV感染是亚洲地区病毒性脑炎中最重要的病因。疫苗免疫为预防该病的有效手段,但目前还没有针对JEV的特异性治疗方法。为寻找新的潜在性药物靶位点,需要加深认识病毒复制过程以及与宿主间相互作用机制。研究表明SPCS1是JEV等黄病毒在细胞内复制所需的宿主因子之一,在病毒多聚蛋白剪切加工中发挥重要作用。最新发表于《Journal of Virology》中的关于     

猪乙型脑炎疫苗研究进展

猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种经蚊虫传播的人畜共患病,且是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。猪是JEV的重要储存宿主和扩增宿主,同时也是乙型脑炎的主要传染源,可引起母猪繁殖障碍和公猪睾丸炎。人是JEV的终末宿主,特别是儿童,感染发病后,死亡率可达25%。目前,仍无有效药物治疗乙型脑炎感染,而其流行区域的扩大及其优势基因型的改变为JEV防控策略带来了新的挑战。近年来,随着基因工程和蛋白质工程的发展,以及对病毒分子结构和功能的深入研究,一些新技术新手段被应用到JEV疫苗研发中,基因工程亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、嵌合病毒减毒活疫苗、多表位疫苗、DNA疫苗等应运而生。在疫苗制备过程中,培养工艺的优化、病毒抗原的纯化、新型佐剂和耐热保护剂的应用等生产工艺的提升策略,为保障JEV疫苗的质量提供了新方向。文章简述了猪JEV疫苗的使用现状及研发进展,旨在为研制更安全、有效的猪JEV疫苗提供参考依据。     

猪乙型脑炎疫苗研究进展

猪乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）是由乙型脑炎病毒（JEV）引起的一种经蚊虫传播的人畜共患病，且是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。猪是JEV的重要储存宿主和扩增宿主，同时也是乙型脑炎的主要传染源，可引起母猪繁殖障碍和公猪睾丸炎。人是JEV的终末宿主，特别是儿童，感染发病后，死亡率可达25%。目前，仍无有效药物治疗乙型脑炎感染，而其流行区域的扩大及其优势基因型的改变为JEV防控策略带来了新的挑战。近年来，随着基因工程和蛋白质工程的发展，以及对病毒分子结构和功能的深入研究，一些新技术新手段被应用到JEV疫苗研发中，基因工程亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、嵌合病毒减毒活疫苗、多表位疫苗、DNA疫苗等应运而生。在疫苗制备过程中，培养工艺的优化、病毒抗原的纯化、新型佐剂和耐热保护剂的应用等生产工艺的提升策略，为保障JEV疫苗的质量提供了新方向。文章简述了猪JEV疫苗的使用现状及研发进展，旨在为研制更安全、有效的猪JEV疫苗提供参考依据。     

猪瘟病毒非结构蛋白NS4B与宿主蛋白相互作用的研究进展

猪瘟病毒(CSFV)是一种可感染猪只并引起典型或慢性猪瘟(CSF)的单链RNA包膜病毒,严重影响动物的健康和养猪业的经济发展。CSFV自身编码的结构蛋白和非结构蛋白可与宿主蛋白相互作用,促进病毒自身的复制、翻译和增殖,并影响病毒毒力和免疫反应等。CSFV的非结构蛋白NS4B在病毒生命周期中发挥重要作用,其自身结构上含有多种特定区域靶点,可与多种蛋白发生相互作用;其作为CSFV复制体碳价结构最重要的组成部分,还可被非结构蛋白NS3切割,在细胞内与CSFV自身蛋白或其他宿主蛋白,如核糖体蛋白侧柄亚基P1(RPLP1)、铁蛋白重链(FHC)、Rab蛋白22a(Rab22a)、脂肪酸合成酶(FASN)、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、肿瘤易感基因101(Tsg101)蛋白和猪指环蛋白114(pRNF114)等相互作用。本文对CSFV非结构蛋白NS4B的结构功能以及与宿主蛋白发生相互作用的研究进展进行概述,以期为CSFV致病机理研究和感染防控提供理论帮助。     

日本脑炎病毒引起细胞凋亡的信号转导通路研究进展

日本脑炎病毒(JEV)是虫媒传染性病毒,感染动物后会产生严重的脑炎症状,严重威胁着公共卫生安全.病毒粒子主要通过胞吞作用进入宿主细胞,在细胞浆复制,在细胞内部膜结构上成熟.JEV侵入神经细胞引起脑炎症状,其机理可能与JEV诱导细胞凋亡有关.目前,研究人员就有关JEV诱导细胞凋亡信号转导途径方面做了大量研究工作.在被JE...     

基因Ⅰ型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的制备及其对小鼠的免疫原性分析

降低猪场的流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)感染率对于阻断人的JE暴发至关重要,鉴于我国JE防控形势的紧迫性和现有基因Ⅲ型商品化乙型脑炎病毒疫苗对部分基因Ⅰ型乙型脑炎病毒(genotypeⅠJapanese encephalitis virus, GⅠJEV)流行毒株免疫保护的不确定性,急需研制安全高效、成本低廉的新型猪用GI JEV疫苗。本研究在杆状病毒载体pFastBac~(TM)多克隆酶切位点插入GⅠJEV的prME基因表达盒,测序验证后的阳性重组质粒转染DH10Bac~(TM)感受态细胞后获得Bacmid-prME重组杆粒,进一步将其转染至Sf9昆虫细胞后,获得Bac-prME重组杆状病毒。Western blot、间接免疫荧光及电镜观察GⅠJEV病毒样颗粒组成蛋白表达及病毒样颗粒形成情况,通过小鼠免疫试验初步评价GⅠJEV病毒样颗粒的免疫原性。Sf9昆虫细胞中prME基因表达盒编码的蛋白得到高效表达,且组装形成病毒样颗粒。病毒样颗粒免疫原性评估结果表明:GⅠJEV病毒样颗粒可诱导免疫小鼠产生高滴度的乙型脑炎病毒中和抗体。本研究利用杆状病毒昆虫细胞表达系统获得了GⅠJEV病毒样颗粒,为研制安全高效的乙型脑炎病毒病毒样颗粒亚单位疫苗提供物质基础。     

日本脑炎病毒非结构蛋白功能的研究进展

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)为单股正链RNA病毒,可通过蚊虫为媒介引起人畜共患的急性中枢神经系统传染病,目前暂无特效治疗药物。JEV基因全长11 kb可编码3个结构蛋白(C、PrM、E)和7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)。7个非结构蛋白占JEV编码蛋白质的大半,对于JEV发挥生物学功能有着重要意义。本文就JEV非结构蛋白功能进行了总结论述,以期为JEV分子生物学研究和防控提供参考。     

基因Ⅰ型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的制备及其对小鼠的免疫原性分析

降低猪场的流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）感染率对于阻断人的JE暴发至关重要，鉴于我国JE防控形势的紧迫性和现有基因Ⅲ型商品化乙型脑炎病毒疫苗对部分基因Ⅰ型乙型脑炎病毒（genotype Ⅰ Japanese encephalitis virus，GⅠ JEV）流行毒株免疫保护的不确定性，急需研制安全高效、成本低廉的新型猪用GI JEV疫苗。本研究在杆状病毒载体pFastBac^TM多克隆酶切位点插入GⅠ JEV的prME基因表达盒，测序验证后的阳性重组质粒转染DH10Bac^TM感受态细胞后获得Bacmid-prME重组杆粒，进一步将其转染至Sf9昆虫细胞后，获得Bac-prME重组杆状病毒。Western blot、间接免疫荧光及电镜观察GⅠ JEV病毒样颗粒组成蛋白表达及病毒样颗粒形成情况，通过小鼠免疫试验初步评价GⅠ JEV病毒样颗粒的免疫原性。Sf9昆虫细胞中prME基因表达盒编码的蛋白得到高效表达，且组装形成病毒样颗粒。病毒样颗粒免疫原性评估结果表明：GⅠ JEV病毒样颗粒可诱导免疫小鼠产生高滴度的乙型脑炎病毒中和抗体。本研究利用杆状病毒昆虫细胞表达系统获得了GⅠ JEV病毒样颗粒，为研制安全高效的乙型脑炎病毒病毒样颗粒亚单位疫苗提供物质基础。     

日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4~+T细胞应答的研究

为了解日本乙型脑炎病毒(JEV)强、弱毒株非结构蛋白的免疫效果,笔者分析了JEV强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A真核表达的差异。通过观察JE减毒活疫苗(SA14-14-2株)和JEV贵州分离株(GZ株)分别在BHK-21细胞上出现的CPE,并收集强、弱毒株的细胞悬液,提取总RNA,分别设计6对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A的编码基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NS1r、pcDNA3.1(+)-NS2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1-2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1q、pcDNA3.1(+)-NS2Aq和pcDNA3.1(+)-NS1-2Aq,将构建成功的6种真核表达质粒免疫健康小鼠,最后采集小鼠的血液和组织分别进行JEV抗体检测和细胞免疫水平检测。研究结果显示:JEV GZ强毒株与JEV SA14-14-2弱毒株能在BHK21细胞上增殖并产生CPE现象;构建的6种真核表达质粒免疫小鼠后经血常规和T淋巴亚群检测可以极显著或显著增加CD4+和CD8+细胞的含量。表明JEV强毒株非结构蛋白所诱导的细胞免疫略优于弱毒株非结构蛋白诱导的细胞免疫,但差异不明显。本研究结果可为日本乙型脑炎病毒的病原基础研究提供参考。     

乙型脑炎病毒NS1蛋白亚单位疫苗制备及其免疫效果评价

为制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)NS1蛋白亚单位疫苗并评价其免疫效果，将JEV NS1基因克隆至杆状病毒表达载体，构建重组杆状病毒。将重组杆状病毒感染High5细胞，收集培养基上清，并用镍柱亲和方法纯化NS1蛋白。将纯化的NS1蛋白与弗式佐剂制成亚单位疫苗，并通过小鼠免疫接种和攻毒模型评价该疫苗的免疫效果。结果表明，50,100,200μg/只剂量的亚单位疫苗免疫组的保护率分别为70%,80%,90%;同时，较非疫苗免疫组，NS1亚单位疫苗免疫可以显著降低小鼠脑组织中的病毒载量和炎症因子的表达，减轻小鼠的神经症状和脑部病理损伤。以上结果表明NS1蛋白作为亚单位疫苗具有较好的免疫保护效果，具有开发为JEV新型疫苗的潜力。     

流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法获得1株特异性针对JEV E蛋白的杂交瘤细胞,命名为5D4,经测定5D4单抗亚类属于IgG2a,轻链为κ链。经Western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEV E蛋白结合。结果表明,所制备的抗JEV E蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。     

乙型脑炎病毒E蛋白N端片段在大肠杆菌中的表达

利用 PCR扩增乙型脑炎病毒 E蛋白基因 5′端片段 ,克隆入原核表达载体 p ET-2 8a,转化大肠杆菌 BL2 1 ( ED3 )。经 IPTG诱导表达后 ,SDS-PAGE分析表达产物。结果表明 ,所表达的E蛋白片段的分子量约为 3 .4万 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 5%。 JEV E蛋白片段在大肠杆菌中的成功表达 ,为制备 JE实验室诊断抗原和分析 E蛋白基因结构与功能的关系提供条件     

抗乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体5D4重链可变区基因的克隆及序列分析

流行性乙型脑炎(JE)简称乙脑,是由乙型脑炎病毒引起的一种重要蚊媒性人兽共患传染病.多种动物易感,蚊是JEV 的主要传播媒介,猪是该病毒在自然界中最重要的贮存与增殖宿主,母猪感染可引起繁殖障碍,给养猪业造成巨大的经济损失.JEV主要在亚洲流行,而最近发现在南半球也有报道,这说明流行性乙型脑炎可能在世界范围内威胁着人类健康[1].JEV属黄病毒科黄病毒属,为单股正链、有囊膜的RNA病毒.     

猪日本脑炎的诊断

日本脑炎(japanese encephalitis, JE)又称流行性乙型脑炎、日本乙型脑炎,简称乙脑,是由日本脑炎病毒(japanese encephalitis virus, JEV)引起的一种严重的人兽共患虫媒病毒性疾病,该病对人类危害巨大,主要引起中枢神经系统损害.     

日本乙型脑炎病毒感染宿主后引起相关信号通路变化的研究进展

日本乙型脑炎(JE)是一种神经性人畜共患传染病，主要症状表现为中枢性神经炎症，尚未完全了解其致病机制，且目前尚无有效的治疗药物。近年来人们对于日本乙型脑炎病毒(JEV)感染后引起的相关信号通路变化进行深入研究，许多信号通路传导机制不断被发现，但仍缺乏系统性的探究，本文就JEV感染后引起的相关信号通路变化研究做综述总结，为JEV研究提供新的思路。     

猪瘟病毒与宿主蛋白相互作用的研究进展

猪瘟是一种高度传染性和致死性的病毒性疾病,给全球养猪业带来严重的经济损失。疫苗免疫是预防该病的主要手段,目前为止尚未研究出针对猪瘟病毒(CSFV)的特异性治疗药物。CSFV是一种专性细胞内寄生物,其复制严格依赖于宿主细胞,病毒与宿主细胞因子的相互作用关系决定了病毒感染、复制和致病的分子基础,因此设计针对相互作用的病毒蛋白或宿主蛋白的药物有可能治疗CSFV引起的疾病。本文对CSFV与宿主蛋白相互作用及其机制进行了综述,为猪瘟的预防及治疗提供理论依据。     

日本乙型脑炎病毒抗NS3和NS5蛋白单克隆抗体的制备

本研究在大肠杆菌中表达了日本乙型脑炎病毒(JEV)非结构蛋白NS3和NS5,并纯化NS3和NS5蛋白,免疫小鼠获得脾淋巴细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合筛选得到2株抗NS3蛋白单克隆抗体1H7和2D4,3株抗NS5蛋白单克隆抗体3C4、3H7和3F10。试验通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western blotting和间接免疫荧光检测(IFA)检测了单克隆抗体的活性。结果显示,所有的单克隆抗体1∶100稀释进行IFA和1∶500稀释进行Westernblotting时均具有高特异性和高敏感性。抗JEV NS3和NS5蛋白单克隆抗体的成功制备为进一步研究JEV的蛋白结构和致病性奠定基础。     

流行性乙型脑炎病原生态学的研究概况

流行性乙型脑炎也称日本脑炎(简称乙型脑炎或乙脑),是由日本脑炎病毒(JEV)经媒介蚊虫传播的严重的人兽共患病.JEV能侵害人的中枢神经系统,引起病毒性脑炎,具有很高的病死率.JEV的宿主种类众多且自然分布广泛,为了有效地预防乙脑疫情的发生,有必要开展乙脑的病原生态学研究.论文就乙型脑炎的病原学特征、地理分布、自然宿主、...