蛔虫抗原基因ALAg克隆及序列分析

为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT - PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18 -T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析.结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为95％,与西式贝蛔虫Ag3抗原基因(EU927...     

鹅蛔虫ITS rDNA的分子特征及种类分析

为探究从广东省清远的鹅体内采集的蛔虫(Ascaridia anseris)的种类,对临床采集的鹅蛔虫样品,在形态观察的基础上,用保守引物NC5和NC2扩增鹅蛔虫的ITS rDNA基因片段,将扩增产物经克隆测序后,获得大小为1 009bp的鹅蛔虫ITS rDNA基因序列(GenBank登录号为KC905082)。序列比对和系统进化分析表明,鹅蛔虫5.8SrRNA基因与GenBank收录的鸡蛔虫(登录号为AJ001508)同源性为96%,而与不同地理株的鸽蛔虫的同源性在91%~96%之间;禽蛔科的鸡蛔虫、鸽蛔虫和鹅蛔虫同一进化分支,鹅蛔虫、鸡蛔虫和鸽蛔虫处于各自的独立进化分支。上述证明,鹅蛔虫是不同于鸽蛔虫的一个独立有效种,在系统发生关系上与鸡蛔虫更亲近。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析

根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计合成一对引物,应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因(N基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF7重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF7基因序列进行分析。结果表明,ORF7基因的原核表达载体构建成功。ORF7基因序列与美洲型的ORF7基因核苷酸同源性为92.8%～99.7%,与LV株的相应基因核苷酸同源性为65.3%;推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为92.0%～99.2%,与LV株的同源性为65.3%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。本研究为N蛋白的进一步研究和制备诊断性抗原奠定了基础。     

捻转血矛线虫ZJ株24000分泌排泄(ES)蛋白基因的克隆和序列分析

通过 RT- PCR方法 ,从捻转血矛线虫成虫总 RNA中扩增得到特异性片段 ,并把这一基因片段克隆到 p U C18克隆载体上 ,进行测序及同源性比较。序列分析可知 ,其核苷酸序列与国外已发表的 2 4 0 0 0分泌排泄抗原基因的同源性为 99.2 %。表明本试验成功提取了捻转血矛线虫成虫总 RNA,并用 RT- PCR方法克隆了 2 4 0 0 0分泌排泄抗原基因 ,为该基因的表达及其免疫学作用研究奠定了基础     

猪巨细胞病毒gB蛋白抗原表位富集区的表达和抗原性的分析

为表达猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因,本研究根据GenBank登录的PCMV gB基因序列设计1对引物,以感染PCMV猪肺细胞总DNA为模板,采用PCR扩增得到gB基因片段,克隆于pMD-18T并进行核苷酸序列测定。利用DNAStar分析gB蛋白的抗原表位,选择抗原表位富集的2个基因片段(命名为PCMVgB1和PCMVgB2)分别克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒并转化Rosetta(DE3)宿主菌。结果显示:扩增的gB基因与GenBank登录的PCMV gB基因的核苷酸同源性在97.6%～98.9%之间,推导的氨基酸同源性在97%～98.6%之间。经IPTG诱导的含pET-gB1和pET-gB2重组质粒的宿主菌可表达重组gB1和gB2蛋白,SDS-PAGE显示分子量约为62ku和36ku。Western blot和间接ELISA结果表明,重组gB1和gB2蛋白均具有反应原性。     

链球菌Gapc基因检测及其序列分析

根据已发表的猪链球菌2型3-磷酸甘油醛脱氢酶(Gapc)基因保守区域设计并合成1对特异性引物,对10株不同来源链球菌Gapc基因进行PCR扩增,并选择PCR产物进行克隆并测序分析,结果在10株不同来源链球菌菌株中有8株可扩增出与预期大小(1011 bp)相一致的DNA片段;选取4株细菌PCR产物进行克隆测序,发现其片段大小为1009或1012 bp,与GenBank参考菌株Gapc基因序列的核苷酸同源性为85.3%~98.3%,氨基酸同源性为87.2%~99.4%;生物学软件分析结果显示Gapc基因在链球菌属细菌中相对保守,且具有较多的潜在抗原表位。本研究为链球菌检测技术和核酸疫苗的研究奠定了基础。     

皮蝇素A基因的克隆与序列分析

首先提取采自甘肃玛曲的皮蝇一期幼虫的总RNA,合成cDNA,根据设计的特异引物,利用PCR技术扩增出Hypodermin A(HA)基因片段,将此片段与PGEM-T Easy载体连接,构建克隆载体PGEM-HA,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,进行测序与分析。结果表明,扩增的HA基因长678bp,编码229氨基酸。克隆到的基因序列与NCBI GenBank上登陆的皮蝇HA基因序列核甘酸同源性为96.6%,推导氨基酸同源性达97.8%。该基因的成功克隆为其进一步表达打下了坚实的基础。     

牛病毒性腹泻病毒P20和P14基因的克隆及序列分析

参考GenBank中BVDV Oregon C24V株的基因组序列设计两对引物,利用套式PCR方法扩增P20基因,扩增出预期525 bp的目的片段.扩增产物克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序.测序结果与参考序列Oregon C24V比较,二者的核苷酸同源性仅为80.95%,推导氨基酸同源性为87.50%.测序结果经NCBI上的Blast(Http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)同源性比较,克隆得到的基因与Osloss株同源性最高,核苷酸同源性为93.65%,推导氨基酸同源性为95.83%.根据P20的测序结果,参照GenBank中BVDV Osloss株设计一对引物,扩增P14基因,经同源性比较,扩增的P14基因与Osloss株核苷酸同源性为94.77%,推导氨基酸同源性为95.10%,通过系统发生分析,推测P20基因和P14基因与Osloss株在进化上比较接近.     

呼和浩特地区布鲁菌OMP25基因的克隆、序列分析

为了扩增呼和浩特地区布鲁菌OMP25基因的序列,试验参照GenBank上已登录的布鲁菌外膜蛋白OMP25的基因序列设计1对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术从灭活的羊种布鲁菌中扩增出OMP25基因片段,将其克隆到pMD19-T载体后测序并应用计算机软件进行分析。结果表明:所测定的序列与羊种布鲁菌(B.melitensis)U33003 OMP25基因的核苷酸同源性为99.5%,推导出的氨基酸同源性为98.1%;与绵羊种布鲁菌(B.ovis)U33004 OMP25基因的核苷酸同源性为98.7%,氨基酸同源性为97.0%。     

大熊猫等8种野生哺乳动物蛔虫的线粒体COXⅠ和COXⅡ基因的亲缘关系分析

为了探讨寄生于大熊猫、小熊猫、北极熊、棕熊东北亚种、棕熊西藏亚种、黑熊四川亚种、黑猩猩和白眉长臂猿体内蛔虫的分类地位,采用PCR技术扩增了这些野生动物体内寄生蛔虫的线粒体COXⅠ、COXⅡ基因序列,并与GenBank中注册的同源性序列进行了分析。序列分析结果显示:扩增的8种野生哺乳动物蛔虫的COXⅠ、COXⅡ基因长度均分别为393和582bp,其中大熊猫与小熊猫及4种熊科动物蛔虫COXⅠ和COXⅡ基因的相似性分别为94.8%～95.0%和94.9%～95.5%;黑猩猩和白眉长臂猿蛔虫的COXⅠ、COXⅡ基因的相似性分别为99.8%和99.5%。分子系统树(NJ/MP/ML)表明,寄生在大熊猫、小熊猫和4种熊科动物体内的蛔虫均为贝蛔属(Baylisascaris)蛔虫;而黑猩猩和白眉长臂猿体内寄生的蛔虫应为蛔属(Ascaris)蛔虫。同时,分析结果也揭示了蛔虫与宿主之间存在协同进化关系。     

大熊猫蛔虫ITS及5.8SrDNA序列的克隆与分析

基于核糖体DNA第一与第二转录间隔序列以及5.8S序列,以分离自广州动物园大熊猫体内的蛔虫为研究对象,用保守引物NC_5和NC_2对核糖体DNA（rDNA）的内转录间隔区ITS-1,ITS-2及5.8S序列进行PCR扩增,扩增后的片段纯化后克隆至pGEM-Teasy载体,重组质粒通过菌液PCR鉴定后,对阳性菌落进行序列测定及分析,鉴定大熊猫蛔虫的种类。结果显示,目的片段总长为910 bp,2个不同样品之间的ITS及5.8S序列没有差异,与GenBank~（TM）中的拜林蛔线虫（Baylisascaris transfuga）、猪蛔虫（Ascaris suum）和人蛔虫（Ascaris lumbricoides）的ITS序列相似性分别为96.6%、82.9%和82.7%。结果表明,此次分离的大熊猫蛔线虫可能为拜林蛔线虫。     

小耳花猪蛔虫ITS及5.8S rDNA序列扩增与分析

以分离自小耳花猪消化道内的蛔虫为研究对象,提取虫体的DNA片断,然后用引物对核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区ITS-1、ITS-2及5.8S序列进行PCR扩增。结果显示,目的片段ITS总长为1441 bp,2个不同样品之间的I TS序列没有差异。通过BLAST检索,与相关蛔虫I TS序列进行比较,发现与拜林蛔线虫(Bayl i sascari s t ransfuga)、猪蛔虫(Ascari s suum)和人蛔虫(Ascari s l umbri coi des)的ITS序列相似性分别为88%、98%和86%,与其他蛔虫的相似性均小于90%。     

棕熊蛔虫ITS rDNA的PCR扩增与序列分析

目的以核糖体DNA（rDNA）的第一与第二内转录间隔区序列（ITS-1及ITS-2）鉴定从广州动物园棕熊分离的蛔虫种类。方法应用PCR方法以保守引物NC5和NC2扩增蛔虫样本的ITS及5．8SrDNA序列,将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-TEsay载体,用菌落PCR及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落进行测序,并与Gen．Bank“公布的人蛔虫（Ascaris lumbricoides）、猪蛔虫（Ascariis suum）、浣熊贝利斯蛔虫（Baylisascaris procyonh）及狮弓蛔虫（Toxascaris leonina）ITS序列比较。结果从棕熊分离的2个蛔虫样本的ITS及5．8SrDNA总长为859—861bp,种内相似性为99．7％,与GenBank^TM公布的人蛔虫、猪蛔虫、浣熊贝利斯蛔虫及狮弓蛔虫的相似性分别为84．6％、84．5％、89．3％及72．3％,序列差异明显。结论棕熊蛔虫不同于上述种类蛔虫,可能为Baylisacaris transfuga.     

小熊猫蛔虫ITS及5.8S rDNA序列的克隆与分析

以广州动物园小熊猫体内分离出的蛔虫为研究对象,运用PCR方法,以保守引物NC5和NC2扩增其核糖体DNA（rDNA）的内转录间隔区（ITS）和5.8S序列,并对扩增后的片段进行纯化、克隆至pGEM-Teasy载体、转化、测序和序列分析,以鉴定小熊猫蛔虫的种类。结果显示2条蛔虫样品的ITS及5.8S rDNA序列基本一致,总长为913 bp,样品间序列相似性为99.7%。将序列与GenBank^TM公布的相关序列进行比较分析,结果显示2条蛔虫的ITS及5.8S序列与黑熊横走贝蛔虫（Baylisascaris transfuga注册号AB571304）相似性分别为98.1%、98.4%,与大熊猫西氏贝蛔虫（Baylisascaris schroederi注册号JN210912）相似性分别为96.9%、97.1%,与猪蛔虫（Ascaris suum注册号AB571302）相似性分别为89.9%、90.1%,与人蛔虫（Ascaris lumbricoides注册号AB571296）相似性分别为89.8%、90.1%,ITS-1序列与浣熊贝蛔虫（Baylisascaris procyonis注册号AB053230）相似性分别为92.0%、92.3%。研究结果表明小熊猫体内分离的蛔虫可能为贝蛔属蛔虫,从而为蛔虫的进一步分类、鉴定和遗传变异研究奠定了基础。     

笼养蓝孔雀寄生虫病的调查与防治

为摸清湖南省野生动物救护繁殖中心饲养场笼养蓝孔雀组织滴虫等寄生虫病感染情况,笔者对3个饲养场的48只笼养蓝孔雀进行了调查。通过对发病蓝孔雀的临床症状、死亡病例的病理变化、实验室检查综合诊断,采用饱和盐水漂浮法、离心沉淀等方法对卵囊进行镜检。结果表明:笼养蓝孔雀为组织滴虫等寄生虫病混合感染,异刺线虫感染强度为++,球虫感染强度为+++,蛔虫感染强度为+,死亡率为8.3%。同时,笔者对笼养蓝孔雀感染情况进行综合分析后,制定了防治措施,病情得到了控制。     

犊牛蛔虫病流行病学调查及防控对策

[目的]为有效防控犊牛蛔虫病,[方法]采用选点入户、化验查卵、驱虫试验、剖检查虫等方法,[结果]查明蛔虫病发病率64.99%(20%～100%);致死率13.81%(4%～60%)。粪便蛔虫卵检出率80.40%,E.P.G平均(291±125)枚。驱虫试验排虫率91%,头均(50±19)条;剖检查虫头均(53±13)条。天然牧草、草下表土、草滩积水、牛栏牛舍泥土样本感染性蛔虫卵检出率79%,虫卵数平均(10±6)枚/g。[结论]当地犊牛蛔虫病流行,由草场、牛舍蛔虫卵污染造成。据此制定实施母牛适时驱除幼虫,犊牛早期驱除蛔虫,牛舍草场灭卵净化,严防母牛感染的综合防控对策。     

Acute Atypical Bovine Pneumonia Caused by Ascaris Lumbricoides

A case of acute atypical pneumonia (bovine asthma, pulmonary emphysema, or pulmonary adenomatosis) occurred in a group of cross-bred beef type yearlings in late autumn. Clinical signs included a forced expiratory grunt, excessive salivation, ruminal stasis and, on auscultation over the lungs, pulmonary emphysema and oedema. The cattle had been brought in from a poor summer pasture and housed in a pig pen heavily contaminated with Ascaris lumbricoides eggs as it had contained unwormed feeder pigs all summer.

Fifteen out of seventeen head were affected ten days following housing and all within twenty-four hours. One steer of the group died and at necropsy fourth stage A. lumbricoides larvae were isolated from lungs showing profuse oedema and some emphysema. Histopathological examinations of the lungs showed a diffuse interstitial pneumonia. All remaining animals appeared clinically normal six days following the outbreak.

     

Effects of high hydrostatic pressure on embryonation of Ascaris suum eggs

High hydrostatic pressure processing (HPP) has been shown to be an effective non-thermal means of inactivating microorganisms from various food products. Little information is available regarding the effects of HPP on metazoan parasites. Outbreaks of food-borne disease have been associated with importation of food contaminated with fecal material. Ascaris suum is used as a surrogate model metazoan parasite for the human roundworm, Ascaris lumbricoides, to study the effects of treatments on the inactivation of eggs in sludge. The present study was conducted to determine the effects of HPP on A. suum eggs. Unembryonated A. suum eggs were subjected to 138-552 megapascals (MPa) for 10-60s in a commercial HPP unit. Embryonation was induced after HPP treatments by incubating eggs in 0.01N sulfuric acid at room temperature. After 21 days, 100 eggs were examined per treatment using a light microscope and the percent of embryonated eggs was determined. Embryonation was induced in 38-76% eggs that were subjected to 138 and 270MPa. No embryonation was observed in eggs exposed to pressures of 241MPa or more for 60s or in eggs exposed to 276MPa for 10-30s. These results indicate that HPP treatment could be used to protect contaminated food items by inactivating A. suum eggs and may also have potential in reducing food-borne illness resulting from fecal contamination.     

江苏省规模化猪场蠕虫感染情况调查

为了解江苏省规模化猪场蠕虫的感染情况，笔者从徐州、泰州、宿迁、盐城、扬州和南通6个地区的12个规模化养猪场随机采集937份粪便样品，采用离心沉淀法、饱和氯化钠漂浮法和饱和硫酸镁漂浮法对粪便样品进行了检查。结果显示，在12个养殖场均发现寄生虫感染，粪便样品中蠕虫虫卵的检出率为7.6%。徐州地区的两个猪场感染率最高，合计达20.7%；泰州地区的两个猪场感染率最低，仅有1.7%。宿迁、盐城、扬州和南通地区的调查猪场感染率分别为6.5%、8.2%、5.4%和5.4%。调查显示，感染虫种包括蛔虫、鞭虫、后圆线虫、食道口线虫和类圆线虫，其中蛔虫和食道口线虫的感染率较高，分别为5.2%和3.6%。徐州、宿迁、盐城、扬州和南通5个地区的猪场内存在蛔虫和鞭虫、蛔虫和食道口线虫，以及蛔虫和后圆线虫混合感染的情况。经比较发现，妊娠母猪和哺乳母猪的肠道寄生虫感染率高于其他生产阶段，仔猪感染率最低。检查中未见绦虫、吸虫和棘头虫等虫卵。本研究结果表明，江苏地区的规模化猪场普遍存在线虫感染的情况，蛔虫、食道口线虫和鞭虫感染强度较高，定期驱虫有助于规模化猪场线虫病的防控。     

Ascarid nematodes in domestic and wild terrestrial mammals

The biology of the ascarid nematodes has been discussed in the context of their important economic role in farm animals, pet animals and zoo animals with special attention to carnivores and primates. In farm animals, infection with the most common roundworm of horses (Parascaris equorum) and swine (Ascaris suum) depend on many factors such as environmental conditions (larval development in the egg and egg survival), age of the host, breed, husbandry system, hygiene and treatment schedule. The monoxenic ascarids Toxocara canis and T. cati are the most important nematodes in carnivorous animals (dogs, cats, foxes) and carnivores in the zoo. In the period of March 2000 till March 2001, 57.1% of examined representatives of Felidae, Ursidae and Canidae in the Zoological Garden of Wroc?aw were found to be infected with ascarids (T. canis, T. cati, Toxascaris leonina). The prevalence of T. canis in the Canidae was 66.7%, of T. cati in the Felidae was 14.3%, while 57.1% of the Felidae carried T. leonina infection. Ascaris lumbricoides, a typical parasite of primates, was found in some gorillas, chimpanzees and orang-utans during parasitological survey.