秦川牛心肌细胞色素C提取纯化及鉴定的研究

以健康秦川牛新鲜心肌为材料,采用酸化水提取,人造沸石吸附,硫酸铵盐析,三氯乙酸沉淀,透析过滤后采用国产D-85大孔离子交换树脂纯化.研究结果表明,提取纯化后细胞色素C,定性鉴别正常,与标准品在紫外可见分光光度上扫描,吸收光谱相同,在520nm和550nm处有最大吸收峰.电泳图谱显示,纯化后的细胞色素C为一条粗带,与纯品比较位置相同.纯化后样品铁含量平均为0.42%,酶活力平均为96.2%,符合中国药典规定.     

紫花苜蓿总皂甙测定及不同组织含量分布的研究

以紫花苜蓿中苜1号为研究对象,采用固相萃取(SPE)纯化后紫外分光光度(UV)法对紫花苜蓿不同组织中的总皂甙含量进行比较研究。通过对总皂甙提取纯化工艺进行优化,以香草醛-高氯酸为显色剂使皂甙显色后,用分光光度法(λ=545nm)对紫花苜蓿根、茎、叶、种子及全株总皂甙含量进行测定。结果表明,最佳提取纯化工艺为:70%乙醇溶液进行超声辅助提取、提取液注入Sep-Pak C18后用水和30%甲醇淋洗纯化,最终4ml甲醇洗脱总皂甙。紫花苜蓿不同部位总皂甙含量分布不均匀:根1.98%~2.27%、茎0.87%~0.97%、叶1.15%~1.30%、种子0.88%~0.99%、全株1.08%~1.23%。     

拟南芥细胞色素P450 94B3-N25的原核表达

为拟南芥细胞色素P450 94B3-N25的优化表达和纯化,利用原核表达技术,成功在大肠埃希菌内表达了拟南芥细胞色素P450 94B3-N25。首先,用热激转化方法将载体pMAL-c2x-IPN-CYP94B3-N25转入Rosseta,利用菌落PCR挑选阳性克隆,设置交叉试验,摸索最适表达温度和时间表达目的蛋白,并在450nm处利用分光光度法测定菌液里有目的蛋白的表达。破碎细胞后,提取细胞总蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示目的蛋白表达成功,但蛋白质变性。     

吴茱萸有效部位的提取纯化及含量测定

目的:对吴茱萸挥发油、吴茱萸总生物碱进行提取纯化,使其纯度达到有效部位的要求。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用浓度为70%乙醇对挥发油提取后的药渣提取吴茱萸总生物碱,用中性氧化铝柱层析进行纯化,采用可见-紫外分光光度法测定含量。结果:吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在0.404-4.040μg/m L和0.484-5.808μg/m L范围内呈良好的线性关系,回归方程分别为A=0.193C+0.0231(r=0.999 9)和A=0.1327C-0.0012(r=0.999 8),平均回收率和RSD分别为100.3%、99.6%和1.80%、1.12%,吴茱萸挥发油、吴茱萸总生物碱含量分别为0.38%和80%以上。结论:该提取纯化方法所得样品纯度高,达到了有效部位要求。     

桑椹色素提取方法及特性的初步研究

桑椹中的色素是一类天然的且具有潜在商业价值的着色素。研究了桑椹色素的提取方法及对光照、温度、氧化剂和还原剂等的稳定性。桑椹色素的最佳提取工艺条件:提取剂95%乙醇与0.1%HCl的体积比为1∶1;温度70℃;提取时间2h。桑椹色素的最大吸收波长为516nm,对光照、氧化剂、还原剂不稳定,3周光照处理后,色素损失率达19.55%;80℃下保存3h,色素损失率达20.9%,但在低温下相对稳定;吸收值随着过氧化氢或亚硫酸钠浓度的增加而减少,但色素的损失率随着浓度的增加而增加;吸收值随时间的延长而降低。     

副猪嗜血杆菌脂多糖的提取、鉴定及初步应用

为建立一种有效提取高纯度副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的方法,进一步阐明HPS的致病机制,通过热酚水法提取LPS,浓缩后,采用酶解法和超离法纯化提取物,分别用硫酸-苯酚法、BCA法、紫外分光光度法,测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量,通过SDSPAGE电泳银染方法鉴定提取物。将提取的LPS作用于猪肺泡巨噬细胞,通过荧光定量方法检测IL-1β的表达量差异。结果显示:纯化的LPS平均产率为2.56%;LPS提取物中不含还原性单糖,多糖含量为3.27%,蛋白含量为0.77%,核酸含量为0.90%;提取的LPS能够引起猪肺泡巨噬细胞IL-1β表达量显著上调。因此,通过该方法提取纯化的LPS可以用于HPS与宿主细胞间作用机制的研究。     

牛奶中埃谱利诺菌素(eprinomectin)荧光高效液相色谱检测方法的建立

建立了以多拉菌素 (doramectin,DOR)作为内标检测牛奶中埃谱利诺菌素 (eprinomectin,EPR)的荧光高效液相色谱 (HPL C)检测法。用乙腈作为牛奶中蛋白质的沉淀剂和 EPR的提取剂。用 ODS- C1 8固相萃取法对提取的 EPR进行纯化。用真空干燥箱对提取和纯化后的 EPR进行干燥。在无水条件下 ,用三氟乙酸酐和 N-甲基咪唑作荧光衍生化剂 ,加入冰醋酸 ,在加热条件下对干燥后的 EPR进行荧光衍生化。用荧光 HPL C进行检测 ,检测条件 :流动相为 A液(为乙腈与无水甲醇按 1∶ 2的比例配制而成 )与水之比为 98∶ 2 ,流速为 1.0 m L/ m in,激发波长为 36 6 nm,发射波长为 4 6 5 nm,进样量为 10 0 μL,柱温为室温。本方法的检测限为 0 .1μg/ L,在 1～ 4 0 μg/ L 血浆的浓度范围内 ,标准曲线方程为 Y=0 .1787x- 0 .117,R2 =0 .997;样品的回收率为 83.4 0 %～ 10 5 .6 5 % ;变异系数为 6 .32 %～ 9.0 5 %。结果显示 :本方法灵敏度高 ,干扰少 ,重复性好。     

秦岭野板栗壳棕色素提取物的分离与纯化研究

本文以秦岭野板栗壳为原料,采用浸取法提取色素,利用硅胶色谱柱对其进行分离纯化,并通过紫外可见分光光度计对色素进行表征。结果表明:该色素分离提纯最佳洗脱液为8:2乙醇—氯仿溶液。     

超声波法提取罗非鱼鳍条总色素研究

采用单因素试验设计,以乙醇为提取溶剂,在不同温度(20～50℃)和时间(5～20min)超声波处理下,测定相同质量鳍条总色素提取液的吸光度,从而探索出超声波技术提取罗非鱼鳍条总色素的适宜条件,并与传统振荡浸提法进行比较.试验表明,超声波法提取时间为15min,提取温度为20℃,提取溶剂为乙醇时,鳍条总色素提取效率最高;超声波法(提取温度为20℃,时间为15min,吸光度为0.177)提取鳍条总色素的效果不如振荡法(提取温度为30℃,时间为3h,吸光度为0.211).     

玉米芯色素成分的提取纯化研究

随着我国养殖业的不断发展壮大，畜牧业消耗的粮食也日益增多，为了减少食用粮食用量、降低饲料成本，蛋白质含量比较高的玉米芯可用来替代部分粮食饲料。为了提取玉米芯色素并对提取方法进行验证，采用称取干燥后粉碎的紫色玉米芯粉末25 g，乙醇浓度50%，料液比1:20（体积比计算），依据不同萃取方法，不同萃取时间、萃取温度等进行对比研究，从而选出最佳提取方法。结果表明，采用微波法进行提取并利用XAD-4树脂在一定条件下进行纯化，能够获得较高纯度和浓度的玉米芯色素。     

高效液相色谱法测定鸡蛋中氯霉素残留量

采用高效液相色谱法(HPLC)检测鸡蛋中氯霉素的残留量。鸡蛋(全蛋)试样中残留的氯霉素用乙酸乙酯提取,35℃减压蒸干。残渣用正己烷-氯仿(1 1,V/V)溶解,加少量水,混匀后,离心,取上清液作为试样溶液供高效液相色谱仪(紫外检测器)在280nm处测定,外标法定量。本方法在鸡蛋中检出限为2μg/kg,回收率在60％～90％,批内变异系数小于12.0％,批间变异系数小于15.0％。     

黄芩提取液紫外指纹图谱及定量检测的初步研究

结合中药加工的一般工艺,建立了黄芩的紫外指纹图谱。结果表明,黄芩饮片经水提醇沉及壳聚糖凝絮精制后,其紫外吸收光谱没有明显变化,在274nm处有最大吸收峰,可作为黄芩提取物定性鉴别的参考;固定吸收波长为274nm,黄芩提取液中所含生药浓度与光密度有良好的线性关系,可作为黄芩提取物定量检测的方法。     

毛泡桐皮黄酮提取物抗氧化作用研究

以毛泡桐皮为原料,通过乙醇提取,大孔吸附树脂纯化,分别得到毛泡桐皮黄酮的粗提物和纯化物。利用油脂酸败法,测定油脂的过氧化值(POV)和诱导期(IP),计算抗氧化系数(PF)。根据抗氧化系数的大小,确定毛泡桐皮黄酮提取物抗氧化能力的大小。试验结果表明:在相同浓度下,毛泡桐皮黄酮提取物抗氧化能力的大小为:毛泡桐皮黄酮纯化物>粗提物>原粉;并且随着浓度的增加抗氧化能力逐渐增大,其存在着剂量效应关系;0.1%毛泡桐皮黄酮纯化物的抗氧化系数大于2,具有较强的抗氧化能力;0.1%毛泡桐皮黄酮纯化物的抗氧化能力与0.02%BHT的抗氧化能力相当,0.06%毛泡桐皮黄酮纯化物的抗氧化能力与0.05%维生素C的抗氧化能力相当。     

高效液相色谱法测定牛奶中的氯霉素残留量

高效液相色谱法(HPLC)检测牛奶中氯霉素的残留量,采用乙酸乙酯提取牛奶中残留的氯霉素,用正己烷-氯仿(1+1,VI V)溶解残渣,以乙腈-0.005 mol/L磷酸氢二铵(18+82,VIV)作为流动相,用高效液相色谱仪紫外检测器在278nm检测.平均回收率94.8%,变异系数＜12.0%.该方法灵敏度高,操作简便,检测结果准确可靠.     

Structure of the foot-and-mouth disease virus. 2. Various physical and chemical properties of the 12S components]

The 12S units were purified by heat treatment and acidification of purified, highly-concentrated virus, with separation of viral RNA by gel filtration. The following physical parameters were obtained: - partial specific volume 0.737 +/- 0.020 g/cm3; diffusion soefficient D020,W = 3.96 +/- 0.24 F; sedimentation coefficient S020,W = 12.1 +/- 0.5S; molecular weight 283,00 +/- 30,000 Dalton; refraction increment (determined by ultracentrifugation) was dn/dc = 0.189 +/- 0.010 cm3/g for white light of the "HBO 200". Examination of the 12S component by analytical ultracentrifugation and in sucrose and CsCl gradients showed that the product was uniform; density determined in CsCl was 1.302 +/- 0,00 s g/cm3. The ultraviolet absorption spectrum was characteristic of proteins; extinction values at 278 nm in a layer 1 cm thick and 10 mg/ml at pH was 13.9 +/- 1.9, while the ratio E278 nm/E250 = 2.2. Electron microscopy showed that the diameter was 11.0 +/- 1.6 nm. Morphology of 12S unit was discussed.     

正交设计法优化蒲公英中黄酮提取工艺

在510 nm最大吸收光时检测正交提取蒲公英中的黄酮含量,建立正交提取工艺,对提取物进行HPLC检测,色谱柱为Eclipse×DB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇∶1%冰醋酸=60∶40(v/v),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量20μL,在此色谱条件下测定黄酮含量。结果表明,各因素影响力大小为:pH值>浸泡时间>料液比;用HPLC测定蒲公英中的黄酮含量为9.26%。     

Research on the Promotion of Qingwenbaidu Powder Quality Standard

To improve the quality standard of Qingwenbaidu powder, TLC was used to qualitative identity of Coptis, Radix Rehmanniae,Gardenia, Forsythia, Rhizoma Anemarrhena and Lophatherum gracile Brongn in Qingwenbaidu powder.The content of gardenin was determined by HPLC. Stationary phase were performed on ODS C18 column (4.6 mm ID×250 mm,5 μm) and the mobile phase was acetonitrile and water (13:87),the detection wavelength was 238 nm. The results showed that in the relative position of the chromatography of the control medicinal material, the chromatogram of the test sample showed the same color spots, and the negative sample had no interference. There was a good linear relationship (R²=0.9999) when the garden in range of 0.062 to 0.370 μg. Its regression equation was y=1 789.1x-14.296 and R²=0.99984. The average recovery was 99.60% and RSD was 0.76%. This method was simple, accurate and reproducible, which could better control the quality of the Qingwenbaidu powder, and could be used as the quality standard of Qingwenbaidu powder.     

清瘟败毒散的质量标准提升研究

为完善清瘟败毒散的质量标准,采用薄层色谱鉴别清瘟败毒散中的黄连、地黄、栀子、连翘、知母、淡竹叶;采用HPLC法测定清瘟败毒散中的栀子苷含量,色谱条件为：ODS C18色谱柱（4.6 mm ID×250 mm,5 μm）,乙腈-水（13：87）为流动相,检测波长为238 nm。研究结果表明,在建立的薄层色谱鉴别结果中,在与对照药材色谱相对应的位置上,供试品色谱显示相同颜色的斑点,且阴性样品无干扰;栀子苷在0.062~0.370 μg范围内具有良好的线性关系,其回归方程为y=1 789.1x-14.296,R²=0.99984,平均回收率为99.60%,RSD为0.76%。本方法简单、准确、重复性好,能更好地控制清瘟败毒散的质量,可作为清瘟败毒散的质量标准。     

丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖提取纯化及活性分析

为了提取、纯化天鹅源丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖（LPS）并检测其活性,试验通过热酚水法提取丙型副伤寒沙门氏菌LPS,采用DNaseⅠ、RNase A和蛋白酶K及醇沉法纯化LPS,测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量,鲎试剂检测凝集活性,显色基质法测定其活性。结果显示,纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS平均产率为1.48%,多糖含量为3.84%,蛋白含量为1.49%,核酸含量为 5.45%,且核酸片段低于100 bp,SDS-PAGE电泳和银染结果显示条带主要集中在10～15 ku范围内,与2 EU/mL鲎试剂的最小凝集浓度是10.99 ng/mL,显色基质法测定其活性为9.82×10⁵ EU/mg。该试验提取、纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS纯度较高,生物活性良好。