用于免疫治疗朊病毒病的抗体片段的研究进展

朊病毒是一种感染性蛋白质,能引起一系列的被称为传染性海绵状脑病(TSEs)或朊病毒病的致命性神经变性型疾病。在哺乳动物中,朊病毒通过召募普通的细胞蛋白(PrPc)并诱导其转化为具有致病性的PrPsc而实现自我复制。最近的研究结果表明,抗朊病毒的抗体能永久性地治愈被朊病毒感染的细胞。但是,全长的抗体和蛋白质不能通过血脑屏障(BBB),这妨碍了将其用于TSEs的体内治疗。采用另一种方式,即通过腺联病毒(AAV)转导将有朊病毒特异性的scFv传递到大脑内,尽管这不能完全保护其不受感染,但能延迟受感染小鼠的发病时间。通过直接向细胞培养物中加入羊痒病病毒,或使用慢病毒和腺联病毒双转导载体使其感染,作者研究了重组的抗PrP(D18)单链可变片段(scFv)抗朊病毒的效果。结果表明,在感染细胞中重组的抗PrP scFv能够减少蛋白酶K的含量。另外,证实了与AAV相比,慢病毒能更有效的使抗PrP scFv基因转染并减少感染的神经元细胞中PrPsc的含量。最后,作者使用生物信息学的方法构建了D18scFv-PrP复合物的结构模型。有趣的是,根据反馈的结果,在D18scFv将PrPc锚定到抗体凹槽过程中,ArgPrP151(朊蛋...     

朊病毒研究进展

朊病毒是一种不含核酸的蛋白浸染子,主要引起人和动物的中枢神经疾病。目前,由其引起的朊病毒病在世界多国已有发生,危害严重,经济损失巨大,并对人类的健康构成很大威胁。该病毒蛋白是一种膜糖蛋白,至少有两种基本形式,即PrPc与PrPsc,PrPsc对紫外线及消毒剂有很强的抵抗力;朊蛋白基因是单拷贝基因,高度保守,但在物种间可能存在易感性相关基因。病毒的复制呈指数增长过程,需朊病毒结合因子参与。病毒的致病性在于正常的朊病毒蛋白PrPc转变为PrPsc,PrPsc是发病的直接原因。另外,对其检测和防治目前也有了新的方法及措施。文章就朊病毒概念、蛋白、基因、复制、致病机理及检测与防治作了综述。     

实时荧光定量PCR构建绵羊PrP基因标准品质粒和标准曲线

羊痒病是一种传染性的致死性神经退行性疾病,常引起绵羊和山羊发病,该病在欧洲流行了大约250年,但是它的流行病学和传播机制还不是很清楚.正常的朊蛋白（PrPc）不能引起神经退行性病变,虽然目前已经对许多组织的PrP mRNA进行了检测,但是对它的生物学功能还知之甚少,对PrP基因表达的机制尚不清楚.研究显示,不同组织来源的细胞中朊蛋白的表达程度差异很大,主要出现于神经细胞中.PrPc在细胞中的高水平表达可促使PrPc向PrPsc转变,目前的研究中,对绵羊PrP mRNA的转录机制尚未阐释清楚.因此,对绵羊外周和中枢系统PrP mRNA的表达进行定量,有助于探讨各组织器官中的PrP在羊痒病的发生过程中的作用.     

有望用于治疗朊病的新技术——RNA干扰

朊病也称传染性海绵状脑病,目前研究认为主要由3种原因引起:一是遗传性因素:由于编码PrPc的基因发生致病性突变所造成;二是后天获得性因素:由外源性的朊病毒感染引起;三是散发性因素:由不明原因造成.朊病是由朊病毒(即PrPSc)所引起,朊病毒能够自我复制,而且具有蛋白酶抗性,是目前惟一确定的病原因子.PrPSc的复制是通过正常细胞朊蛋白即PrPc转变而来.     

10种血清型腺相关病毒在哺乳动物子宫原代细胞中的转导

为探究10种血清型腺相关病毒(AVV)在哺乳动物子宫原代细胞中的转导情况并筛选出转导效率高的血清型，通过酶消化法获取哺乳动物子宫上皮和基质细胞、Real-Time PCR测定病毒滴度以及荧光显微镜观察和Western blot技术探究其转导效率。结果显示，10种血清型在小鼠子宫上皮细胞中，AAV-DJ可转导；在小鼠子宫基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV1、AAV2、AAV5>AAV9。在兔子宫上皮细胞中的转导效率为AAV5、AAV-DJ>AAV2>AAV9;在兔子宫基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV1、AAV2、AAV5>AAV9。在猪子宫上皮和基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV2、AAV5>AAV1。在人子宫基质细胞系中的转导效率为AAV-DJ>AAV2、AAV9>AAV1、AAV3>AAV8。综上所述，在转导哺乳动物子宫上皮细胞时，AAV-DJ、AAV5和AAV2效果较好；在转导哺乳动物子宫基质细胞时，AAV-DJ、AAV2、AAV9、AAV5、AAV1效果较好。     

免疫治疗朊病的前景

神经元的死亡被认为是朊病的特点，这是由于细胞表面的唾液酸糖蛋白由正常的含有大量α螺旋的结构变成了异常的β折叠丰富的、具有蛋白酶抗性的结构。最近的研究结果表明，朊病的复制可以被抗PrP的单克隆抗体所抑制，能延长朊病毒的潜伏期，这增加了人们用抗体来治疗朊病的信心。     

朊蛋白与金属离子之间作用的研究进展

朊病毒(PrP^Sc)是由动物体内正常朊蛋白PrP^c构象改变形成的,PrP^Sc与PrP^C在氨基酸序列上完全一致,PrP^C中α-螺旋丰富而PrP^Sc富含β-折叠。目前,科学家还未研究清楚PrP的生理机能。人们普遍认为:人和动物感染朊病毒病时除PrP外还存在一些重要的辅助因子影响着PrP^C变构、PrP^Sc传播、PrP^Sc引起神经细胞凋亡等病变过程,因此,研究朊蛋白的各种辅助因子将有助于阐明这方面的问题,这些辅助因子包括各种金属离子,如Ca²⁺、Cu²⁺、Fe²⁺、Mn²⁺。作者概述金属离子对朊蛋白结构和功能的影响,以及它们在朊病毒病的发病过程中可能起的作用。     

PrP106-126对大脑皮质神经元和星形胶质细胞朊蛋白基因表达的影响

采用实时荧光定量RT-PCR的方法,对PrP106-126处理的大脑皮质神经元和星形胶质细胞模型进行了朊蛋白基因表达相对定量的研究。大脑皮质神经元经PrP106-126处理后,与SCR处理组和对照组相比,基因表达量明显下降。PrP106-126处理的星形胶质细胞与对照组和SCR处理组相比,朊蛋白基因的表达量显著升高。该试验结果为深入了解TSEs的分子致病机制和正常朊蛋白的功能提供了基础数据。     

抗猪流感噬菌体单链抗体库的构建与筛选

利用噬菌体展示技术构建猪流感病毒噬菌体抗体库,并筛选出猪流感高特异性、高亲和力的单链抗体(scFv)。以猪流感病毒免疫BALB/c小鼠,提取脾细胞总RNA,反转录后以cDNA为模板扩增获得VH基因和VL基因,并采用重叠延伸PCR(SOE-PCR),用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)按VH-Linker-VL方式将VH基因和VL基因拼接成scFv基因片段。将scFv基因和pCANTAB5E载体分别双酶切(SfiⅠ/NotⅠ)后连接,转化宿主菌TG1,经过辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体单链抗体库。以猪流感病毒为抗原包被96孔酶标板,经过3轮的亲和富集筛选,用Phage-ELISA鉴定阳性重组抗体。本研究成功构建出库容约为4×106cfu/mL抗猪流感病毒的单链抗体库,并筛选出4株特异性抗猪流感病毒的scFv抗体,能够与鼠源阳性多抗进行竞争结合猪流感病毒,为抗猪流感病毒转基因猪的研究奠定基础。     

PrP蛋白与Shadoo蛋白研究进展

朊蛋白(PrP蛋白)在传染性海绵状脑病中具有重要作用,但其生物学功能至今没有明确。Shadoo蛋白是一种与朊蛋白在N端结构上极为相似的新蛋白,SPRN是Shadoo蛋白的结构基因。由于Shadoo蛋白与PrP蛋白具有相同的生物学性质,且它们在脑组织中重叠表达,因此也被认为是研究朊蛋白的关键因素。文章主要探讨PrP蛋白与Shadoo蛋白在基因结构、蛋白功能、朊病毒感染方面的关系。     

PrP106-126诱导的N2a细胞神经毒性中神经营养因子受体p75NTR的表达变化研究

神经元死亡是朊病毒病的主要病理学特征。朊蛋白多肽PrP106-126能够对神经细胞表现神经毒性,引起细胞凋亡。细胞表面蛋白神经营养因子受体p75^NTR的胞外区域可以与PrP106-126结合并产生促凋亡作用。作者以小鼠成神经瘤细胞N2a为细胞模型,应用荧光定量RT-PCR和Western Blot技术,以及DNA Ladder和AnnexinV-FITC/PI双重染色流式细胞凋亡检测技术对p75^NTR介导的PrP106-126神经毒性分子机制进行了研究。结果发现在PrP106-126诱导的N2a细胞凋亡过程中,p75^NTR的mRNA转录水平和蛋白表达水平均显著升高,以p75^NTR多克隆抗体sc-6189阻断PrP 106-126与p75^NTR的相互作用后,减弱了PrP106-126诱导的N2a细胞凋亡效果。该研究揭示了PrP106-126诱导的N2a细胞毒性中p75^NTR受体的表达变化,为解释朊病毒病的发病机制提供了重要数据。     

朊病毒检测方法综述

传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)是由朊病毒引起的人和多种哺乳动物以神经退行性变化为主要特征的一种慢性消耗性传染病,也称作朊病毒病;其是由体内正常细胞表面的PrP^C转变成PrP^Sc蛋白所导致。但PrP^Sc主要在脑内表达,在其他组织表达量很低,因此快捷准确的诊断方法对于该病有重要意义。作者重点介绍以朊病毒的致病特点为依据建立的检测方法,便于对该疾病的早期诊断、预防以及食品安全检测提供帮助,保障畜牧业的有序发展以及人类的健康。     

抗新城疫病毒HN蛋白单链抗体的原核表达及其功能鉴定

为制备抗鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)单链抗体(scFv)并鉴定其生物学功能,本研究提取抗NDV HN单克隆抗体杂交瘤细胞株总RNA,通过RT-PCR扩增抗HN蛋白抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)编码序列,将其插入含有Linker序列的载体pET-scIG中,构建抗HN的scFv(HN-scFv)原核表达重组质粒pET-HN-scFv并在大肠杆菌中诱导表达。结果显示HN-scFv主要以包涵体形式存在。将包涵体进行复性和Ni-NTA层析柱纯化后用于流式细胞仪检测,结果显示复性纯化后的HN-scFv能够识别表达于293T细胞表面的NDV HN蛋白。该scFv的制备为进一步对该抗体进行改造奠定了基础。     

朊病毒研究进展

朊病毒 (Prion)是一类能引起人和动物的亚急性海绵样脑病的病原因子 ,它的化学本质是一种蛋白质侵染颗粒 ,具有不同于病毒的生物学性质与理化性质。细胞型朊病毒蛋白 (PrPC)经过折叠可转变为致病型朊病毒蛋白 (PrPSC)。目前人和大多数动物的PrP基因序列已经被测定 ,这也为朊病毒的研究提供了重要的信息。酵母朊病毒的研究进一步证实了朊病毒仅由蛋白质组成的假说     

PrP106-126对星形胶质细胞层黏连蛋白和纤黏连蛋白表达的影响

星形胶质细胞增生是朊病毒病早期的主要病理学特征.PrP106-126 (prion protein peptide 106-126)具神经毒性,导致星形胶质细胞增生.层黏连蛋白(laminin,LN)和纤黏连蛋白(fibronectin,FN)是星形胶质细胞胞外基质的主要成分.利用PrP106-126和PrP106-126制备的小胶质条件培养基(condi-tioned medium from microglia,MiCM)分别作用于体外培养的星形胶质细胞,应用RT-PCR和Westernblot技术探讨PrP106-126对星形胶质细胞的增殖及其胞内LN、FN表达的影响.试验分为5个处理(空白对照、Scr对照、PrP106-126、MiCM、MiCMPrP106-126).结果表明,PrP106-126可促进星形胶质细胞增殖、LN和FN的表达,但促增殖和FN表达作用有赖于活化小胶质细胞细胞因子的共同参与.     

朊病毒及疯牛病

英国等国家疯牛病 (ＢＳＥ)的流行和Ｐｒｕｉｓｎｅｒ博士发现朊病毒 (Ｐｒｉｏｎ) ,使朊病毒及朊病毒病的研究受到各方面的高度重视。朊病毒是一种新型的蛋白感染因子 ,能引起人和动物的可转移性神经退化疾病 ,如ＢＳＥ、人的克亚氏病 (ＣＪＤ)等。1　朊病毒1 .1　肮病毒的发现早在 2 0 0多年以前 ,英国的牧人就注意到羊的一种致死性疾病 ,其症状主要表现为兴奋、瘙痒、共济失调、全身瘫痪直至死亡 ,即羊的痒病 (Ｓｃｒａｐｉｅ)。本世纪初 ,Ｍ .ｆａｄｙｉａｎ提出该病是由寄生虫引起的。1 936年Ｃｕｉｌｌｅ等发现瘙痒因子有传染性 ,用滤…     

痒病的防治措施与朊病毒

朊病毒是一种只有蛋白质而没有核酸的病毒,可以引起人类扣动物中枢神经系统退行性病变。朊病毒病与艾滋病并列成为21世纪危害人类健康的顽疾。作者分别从病毒特性、感染途径和致病机理等方面,阐述了朊病毒的研究进展,并着重介绍了由朊病毒引起的代表性疾病绵羊痒病的流行病学特点、临床特征、病理变化、临床诊断要点及其综合防治措施,供广大兽医工作者和养殖户参考。     

痒病的防治措施与朊病毒

朊病毒是一种只有蛋白质而没有核酸的病毒,可以引起人类和动物中枢神经系统退行性病变。朊病毒病与艾滋病并列成为21世纪危害人类健康的顽疾。作者分别从病毒特性、感染途径和致病机理等方面,阐述了朊病毒的研究进展,并着重介绍了由朊病毒引起的代表性疾病绵羊痒病的流行病学特点、临床特征、病理变化、临床诊断要点及其综合防治措施,供广大兽医工作者和养殖户参考。     

朊蛋白多肽PrP 106-126对N2a细胞活性及PrP mRNA表达的影响

朊病(prion disease)是由正常细胞朊蛋白PrPC错误折叠成异常朊蛋白(朊病毒)引起的.朊病毒的神经致病性在病理学上表现为神经元空泡化、神经元丧失和胶质增生等.     

抗非洲猪瘟病毒噬菌体展示单克隆抗体的筛选及表达

为构建抗非洲猪瘟病毒(ASFV)噬菌体单链抗体文库,并获得抗ASFV的单链抗体,本试验利用自然感染AS-FV猪的外周血淋巴细胞提取的mRNA,反转录获得cDNA后分别扩增出猪IgG抗体重链和轻链的可变区基因,构建scFv单链抗体后连接至pComb3XSS载体,构建噬菌体抗体展示文库,经过3轮"吸附、洗脱、富集"的筛淘过...