猪场爆发猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断及实验检测

摘 要: 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖和呼吸道接触性传染病。临床特征为母猪流产、死胎和木乃伊胎增多,仔猪出现呼吸道症状和断奶前死亡率增高以及免疫抑制,严重危害种公猪和繁殖母猪及其仔猪。本文参考 GenBank上PRRSV LV和VR-2332毒株核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,以提取来自贵州某猪场猪繁殖与呼吸综合征疑似病料（包括血液、肝、肺、肾、淋巴结、心、脾组织）的总RNA为模版,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,经94℃ 预变性2 min;94℃变性45s,60℃退火 1min,72℃延伸1min进行35个循环;72℃ 再延伸10min进行扩增。扩增产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明所扩增的目的DNA条带大小约750bp,与预期大小相似。扩增产物经回收纯化后,应用pMD18－T 载体进行克隆后测序。测序结果表明,所扩增DNA片段大小为739bp,该核苷酸序列与湖南发现的PRRSV序列同源性为100%。本实验说明临床诊断及实验RT-PCR检测方法作为猪繁殖与呼吸综合征的诊断方法是快速有效的,可为猪繁殖与呼吸综合征诊断提供参考依据。     

抗体快速金标检测卡结合RT-PCR技术诊断猪繁殖与呼吸综合征

采用猪蓝耳病抗体快速金标检测卡对贵州省不同发病猪场进行血清学检测,其弱阳性检出率为54%。在此基础上参考GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)LV和PRRSV VR-2332毒株核苷酸序列,设计一对特异性引物,用提取上述检测的某猪场猪繁殖与呼吸综合征疑似病料(包括血液、肝、肺、肾、淋巴结、心、脾组织)总RNA为模版,应用RT-PCR方法扩增出目的条带,大小为739 bp,与预期的结果相同。分析表明:该核苷酸序列与已报道的Hunan-3株的同源性为100%,与国内最早PRRSV分离株CH-1 a同源性为95%,与北美代表株VR-2332和欧洲代表株LV的同源性分别为89.2%和29.2%。说明采用猪蓝耳病抗体快速金标检测卡结合RT-PCR方法作为猪繁殖与呼吸综合征的诊断方法是准确、可行的。     

猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的诊断

为摸清贵州省某猪场猪只发病死亡的原因,采用流行病学调查、临床症状观察、病理解剖诊断、猪繁殖与呼吸综合征抗体快速金标检测卡检测和RT-PCR检测核酸确诊等方法,对该猪场发病猪进行了诊断.试验诊断结果表明:通过流行病学调查、剖检病理和猪繁殖与呼吸综合征抗体快速金标检测卡检测初步诊断该猪场发病猪疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒感染,RT-PCR检测核酸确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒感染.     

高致病性猪蓝耳病的实验室诊断

采用猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因RT-PCR检测方法和猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株试剂盒检测方法,对六盘水市钟山区某猪场发生的一起疑似高致病性猪蓝耳病进行实验室诊断,确诊为由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株引起的高致病性猪蓝耳病。     

云南猪繁殖与呼吸综合征的诊断与Nsp2基因变异分析

对2019年5月份云南省出现的流产胎儿样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒核酸检测,2个猪场胎儿样品检测猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸均为阳性,其他病原均为阴性。对核酸阳性样品通过RT-PCR扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因,并对其进行测序。序列比对及系统发育分析结果表明:2019年云南2株猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因核苷酸序列同源性为97.5%;与VR2332、CH-1a、HUN4、JXA-1、JXAIP80、TJA-1毒株之间的核苷酸同源性为77.1%～98.3%,与JXAIP80毒株同源性最高为97.6%～98.3%,与经典北美毒株VR2332同源性最低为71.1%～71.2%,与经典毒株VR2332和CH-1a相比存在90 bp碱基缺失。     

甘肃省猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株ORF5基因的遗传变异分析

为了解甘肃省地方猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的感染情况，对2015-2020年采集的20个猪场332份疑似PRRSV感染猪的样品，首先进行血清学检测，然后通过RT-PCR方法开展病原检测，扩增PRRSV的ORF5基因；测序后利用DNA Star软件分析获得的ORF5基因及其编码的GP5氨基酸与国内外不同PRRSV毒株的遗传进化关系。血清学检测结果阳性率为93.07%,扩增获得的PRRSV ORF5基因，经核苷酸序列比对属于PRRSV美洲型，有NADC30-like毒株和NADC34 like毒株。结果表明，当前PRRSV不同流行毒株存在一定的遗传差异，为甘肃省PRRS防控提供了科学依据。     

一例猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与链球菌混合感染的实验室诊断

某规模化自繁自养猪场产房母猪出现流产,保育猪关节肿胀、倒地不起、大量死亡,为研究发病原因,采集流产胎儿、死亡仔猪的肺脏、脾脏、淋巴结和关节液,进行分子生物学检测,病毒和细菌分离鉴定,并检测不同胎龄母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体,结果显示猪繁殖与呼吸综合征病毒检测为阳性,使用PAM分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒,经序列鉴定为高致病性毒株;抗体结果表明四胎及以上母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率异常升高;病料分离的细菌经鉴定为猪链球菌,经实验室诊断确定猪场发病的原因为猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与猪链球菌混合感染。     

一例猪繁殖与呼吸综合征病的诊断

河南某地区一猪场肥猪群出现严重呼吸道症状,母猪出现流产现象,病理剖检显示猪肺门淋巴结肿大,猪肺脏呈现间质性肺炎病变,边缘出现实变,临床症状显示疑似猪繁殖与呼吸综合征病(PRRS)阳性。为了确诊,从肺脏病变部位采集病料,提取RNA进行RT-PCR扩增,最后进行序列的遗传进化分析,结果显示扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因(ZMD),进化分析显示扩增出的序列与NADC30和NADC30-like序列位于同一分支,序列比对显示ZMD与欧洲型LV的核苷酸同源性为61.4%;和美洲型VR-2332毒株的同源性为85.1%;与经典疫苗株CH-1a核苷酸同源性为87.1%;和致病性很高的毒株JXA1核苷酸同源性为85.6%;与NADC30毒株核苷酸同源性最高,为95.9%。这些试验结果表明引起猪只发病的病原为PRRSV,毒株类型为NADC30-like毒株。     

采用RT-PCR方法诊断猪繁殖与呼吸综合征

山东某猪场发生以猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)为主要特征的疾病。笔者对送检的病料进行了实验室诊断:剖检主要发现肺水肿,出血;组织病理学检测主要发现肺间质明显增宽,肾小管上皮肿胀;采用RT-PCR检测方法检测猪肺脏组织,结果被验样品在400bp扩增带为PRRSV阳性,阴性对照无扩增带出现。诊断结果表明:该猪场发生的病例为猪繁殖呼吸障碍综合征。     

蒙古绵羊肌内脂肪沉积相关基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

试验旨在建立一种适合于蒙古绵羊肌内脂肪沉积相关基因mRNA表达量的检测方法。根据GenBank中脂肪沉积相关基因的序列,分别设计1对特异性引物,然后通过克隆测序检测引物扩增片段的正确性,最后使用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术验证方法的可行性。结果显示,最佳的PCR反应参数为:94 ℃预变性4 min;94 ℃变性30 s,58 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min,40个循环;72 ℃延伸5 min。各目的基因的熔解曲线峰值单一,目的产物稳定。结果表明成功建立了一种快速检测蒙古绵羊肌内脂肪沉积基因的Real-time PCR方法,可用于绵羊肌内脂肪沉积基因的检测及定量分析。