分光光度法与活菌计数法测定副鸡禽杆菌菌液浓度的相关性研究

为建立一种快速测定副鸡禽杆菌菌液浓度的方法,本研究选取副鸡禽杆菌血清A、B、C型代表性菌株（CVCC254株、CVCC257株和CVCC256株）,培养制备菌液,分别在450nm、540nm、600nm、650nm波长测定其吸光度值（OD值）,同时测定活菌计数值。回归分析两组数据,获取回归方程及标准曲线,分析回归方程的测定系数（R2）和标准曲线的点线离散度,确定最适测定波长。再选取不同培养时间点（10h、12h、14h、16h、18h、20h）的菌液,在最适波长下测定其OD值并代入回归方程获取活菌数,同时采用活菌计数法获取活菌计数值,将两组数据使用SPSS 17.0软件进行统计分析,进一步验证分光光度法与活菌计数法测定菌液浓度的相关性。结果显示,3株菌液在600nm波长测定的OD值与活菌计数值之间均呈最佳的线性关系,确定其菌液浓度最适测定波长均为600nm,其回归方程分别为y=14.302x－0.1441（R2=0.9962）、y=14.464x－0.2746（R2=0.995）和y=14.681x－0.01326（R2=0.9989）,y为活菌计数值（×108 CFU/mL）,x为OD600值。3株培养至衰退期前的菌液在600nm波长测定的OD值代入回归方程计算获得的活菌数值与其活菌计数值无显著差异（P＞0.05）。研究结果表明,衰退期前副鸡禽杆菌菌液的分光光度法与活菌计数法具有良好的相关性。因此,该分光光度法可用于快速测定衰退期前副鸡禽杆菌菌液浓度。     

1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究

为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生长特性及致病性,并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD₅₀),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况,试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01(CpA ZD-01)并配制种子液,采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线,并研究对数期菌液的OD₆₀₀值与稀释倍数和细菌数量的关系;测定其外毒素粗提取液OD₂₈₀值和OD₂₆₀值,计算出不同培养时间毒素蛋白含量;给小鼠腹腔注射菌液,根据小鼠死亡情况确定LD₀和LD₁₀₀,并计算LD₅₀,解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明：按照5%接种量接种菌株后,>2～10 h为对数期;菌液OD₆₀₀值(y)与稀释倍数(x)的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R²=0.990,P<0.05;菌液OD₆₀₀     

白头翁散对不同细菌的体外抑菌效果观察

为了探讨白头翁散对不同细菌的体外抑菌效果,本试验采用水提法分别提取白头翁散组方中4味中药白头翁、秦皮、黄柏、黄连的有效成分,通过试管二倍稀释法测定4味中药、自配白头翁散方剂及两种市售白头翁散水提物对7种不同细菌的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC)。结果表明,单味中药中黄连对大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽胞杆菌、无乳链球菌、副溶血弧菌、多杀性巴氏杆菌均呈现较好的抑菌效果和杀菌效果,MIC为1.563～50.000 mg/mL,MBC为6.25～400.00 mg/mL。自配白头翁散方剂抑菌和杀菌效果更好,MIC为0.781～25.000 mg/mL,市售白头翁散的抑菌效果和杀菌效果均不及自配白头翁散。     

白头翁汤含药血清抑菌作用观察

白头翁汤处方根据<中华人民共和国兽药典>(2005年版),由白头翁、黄连、黄柏、秦皮4味中药组成,具有清热燥湿、凉血止痢之功效,其主要成分为生物碱类、香豆素类、皂苷类和柠檬苦素类化合物[1],为湿热痢疾的首选方剂,关于白头翁汤的体外抑菌试验已有许多文献报道[2],但体外抑菌实验不能真实反映药物在体内抑菌的真实情况[3],为此,我们采用血清药理学实验方法,探讨白头翁汤对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、链球菌、李氏杆菌等5种细菌的抑菌作用和给药后含药血清的最佳采血时间.     

白头翁汤对肉鸡白痢的防治效果

用“白头翁汤”方剂对肉鸡白痢做治疗试验和体外抑菌试验。结果表明白头翁汤对肉鸡白痢的治愈率为 90 % ,总有效率为 95 % ;体外抑菌试验为高敏。     

禽多杀性巴氏杆菌不同培养方法制备的种子液对高密度发酵培养菌数的影响

本试验用扁瓶固体培养法、摇床液体培养法和10L发酵罐培养法制备禽多杀性巴氏杆菌种子液,采用细菌比浊法和活菌计数法,计算高密度发酵菌液浓度,比较3种方法制备的种子液对禽多杀性巴氏杆菌抗原生产的影响。经过3批次试验,扁瓶固体培养法制备的种子液经高密度发酵培养后测得的活菌数为1.56×1010~1.65×1010 CFU/mL,比浊计数为2.10×1010~2.59×1010 CFU/mL;而摇床液体培养法制备的种子液经高密度发酵培养后测得的活菌数为1.54×1010~1.74×1010 CFU/mL,比浊计数为2.10×1010~2.45×1010 CFU/mL。发酵罐培养制备的禽多杀性巴氏杆菌种子接种200L发酵罐进行高密度发酵培养后测得的活菌数可达1.85×1010~2.05×1010 CFU/mL,比浊计数为2.45×1010~2.80×1010 CFU/mL。结果表明,10L发酵罐培养制备的种子液优于扁瓶固体培养法和摇床液体培养法制备的种子液,而后两者无明显差别;从3批次平均值看,前者比后两者活菌计数结果提高约21.60%,比浊计数结果提高约15.52%。说明采用10L发酵罐培养制备的禽多杀性巴氏杆菌种子进行高密度发酵培养可显著提高菌液浓度,增加单位抗原含量(P0.01)。     

复方板黄口服液对畜禽常见病原菌的体外抑菌作用研究

为了研究板黄口服液对畜禽常见病原菌的体外抑菌作用,研究通过体外试验观察药物对禽巴氏杆菌、鸡葡萄球菌、鸡白痢沙门杆菌、肺炎克雷伯菌、牛巴氏杆菌、牛大肠杆菌的抑菌效果。结果表明:板黄口服液对鸡葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)为125 mg/m L,对牛巴氏杆菌、禽巴氏杆菌、鸡白痢沙门杆菌、肺炎克雷伯菌、牛大肠杆菌的MIC均为250 mg/m L。说明板黄口服液对禽巴氏杆菌、鸡葡萄球菌、鸡白痢沙门杆菌、肺炎克雷伯菌、牛巴氏杆菌、牛大肠杆菌有很好的抑制作用。     

副猪嗜血杆菌血清型4液体发酵培养试验研究

为了研究适合副猪嗜血杆菌血清型4的液体发酵培养使用条件,试验测定了副猪嗜血杆菌血清型4在不同发酵条件下的OD600值。结果表明:最适培养条件为TSB培养基、100 mL/250 mL的装液量和0.004%烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)浓度,培养24小时时菌体生长OD600值达到最大,同时产生大量的酸,pH值降至最低。当OD600值小于1时,测得的副猪嗜血杆菌活菌数和OD600值呈良好的线性关系;OD600值越大,偏离的趋势越明显。     

维氏气单胞菌菌影疫苗的构建及其溶菌动力学研究

细菌菌影(Bacterial ghosts)是通过诱导PhiX 174噬菌体中裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达所获得的无细胞内容物的空细菌体.它保持了与活菌相同的膜蛋白成分、天然结构、细胞表面抗原等特性,是一种新型的死菌疫苗.为优化维氏气单胞菌(A.veronii)菌影制备条件,本实验将带有庆大抗性的裂解基因E转入A.veroniiATCC35624株中,通过温度变化对其进行溶菌动力学试验,每隔30 min对菌液OD600nm及其活菌数进行测定,当OD600nm稳定不再下降时,通过扫描电镜观察裂解后菌体的形态变化.结果显示,在诱导30 min后OD600nm值开始持续下降,当其下降到最低值时,活菌检测结果表明几乎无活菌存在.本研究利用菌影形成机制构建A.veronii菌影,为新型疫苗的制备提供依据.     

A:L1型鸭源多杀性巴氏杆菌灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】制备鸭多杀性巴氏杆菌灭活疫苗,有效控制贵州省鸭多杀性巴氏杆菌发生和流行。【方法】以实验室分离保存的A：L1型多杀性巴氏杆菌地方流行株为菌种,通过涂板法测定该菌株生长曲线,并采用改良寇氏法计算该菌株对鸭的半数致死量（median lethal dose,LD₅₀）,将该菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后分别制备白油佐剂灭活疫苗和卡波姆佐剂灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行免疫雏鸭试验;通过攻毒保护试验评价比较两种疫苗的保护率,并对攻毒试验鸭肝脏、肺脏、脾脏进行病理组织学观察。【结果】A：L1型多杀性巴氏杆菌疫苗株培养至18 h到达峰值,活菌数可达1.0×10¹⁰ CFU/mL;LD₅₀为5 CFU;制备的两种疫苗安全性良好;攻毒保护试验结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗免疫保护率可达62.5%,高于白油佐剂灭活疫苗（50.0%）及商品灭活疫苗（50.0%）。二免后卡波姆佐剂灭活疫苗优势更为明显,免疫保护率可达87.5%,高于白油佐剂灭活疫苗（75.0%）及商品灭活疫苗（62.5%）。病理组织学结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗能对肺脏提供较好的保护效果,二免后在肝脏、肺脏和脾脏的保护效果上,卡波姆佐剂灭活疫苗组优势明显。【结论】利用贵州地区流行的A：L1型菌株所制备的卡波姆佐剂灭活疫苗免疫效果明显,能对贵州地区多杀性巴氏杆菌病的防控起到重要作用。     

应用紫外分光光度法进行禽多杀性巴氏杆菌(C_(48-1))细菌计数的研究

本试验通过对禽多杀性巴氏杆菌(C48-1) 菌液不同稀释度吸光度值的测定,与平板活菌计数结果相结合,建立吸光度-菌液浓度回归直线y = 14.757x + 0.2038(R2 = 0.9974).试验结果证明运用测定吸光度进行细菌计数的方法具有简单、迅速等优点,在兽用细菌灭活疫苗生产过程中,具有很高的参考价值.     

不同剂量白头翁汤微粉对大鼠内皮细胞NO分泌的影响

<正>白头翁汤是中医治疗出血性胃肠炎的经典方剂。前期研究表明,白头翁汤对小鼠内毒素症有很高的保护率,白头翁汤有效成分对内毒素引起的微血管内皮细胞NO分泌升高有明显下调作用。本试验利用中药(生物)细胞破壁技术加工白头翁汤微粉,研究了白头翁汤普粉和白头翁汤微粉对抗内毒素作用,以期为兽医临床应用中药微粉防治疾病提供理论依据。1材料与方法1.1主要试剂DMEM培养基、优级胎牛血清(购自Gibco公司);LPS(E.coli O55:B5,购自Sigma公司);     

中药复方消毒剂对鸡只常见菌的体外抑菌试验

为了解国内某厂家生产的植物源中药复方消毒剂的体外抑菌效果,试验采用了药敏打洞法和试管二倍稀释法,对临床常见的4种有害菌进行了体外抑菌试验。结果显示,该消毒剂对大肠杆菌高度敏感,对其他3种菌中度敏感;对禽巴氏杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度为62.5mg/ml,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为31.3mg/ml。结果表明,该厂家生产的中药消毒剂对鸡常见的4种有害菌有较好的体外抑菌效果。     

粪肠球菌生长曲线的测定及其对小鼠脑组织的影响

为测定致羔羊脑炎粪肠球菌（Enterococcus faecalis）的生长曲线，寻求一种快速而准确的方法测定不同生长时期粪肠球菌数量，并客观评价其毒性强弱及其对小鼠脑组织的影响，试验采用平板菌落计数法和OD-Monitor振荡比浊法（D_λ值法）测定粪肠球菌的生长曲线，探究该菌在合适时间段内的吸光值（D_{600 nm}）与平板菌落计数法测定的活菌数（CFU）的关系。用粪肠球菌感染小鼠，观察记录小鼠的死亡情况，最后采用Karber法计算粪肠球菌感染小鼠的半数致死量（LD₅₀）。用LD₅₀的剂量感染小鼠，及时采集死亡小鼠脑组织，未死亡的小鼠72 h后全部剖杀取脑组织，一部分做涂片染色，制作病理切片，观察病理变化；一部分进行培养，用于PCR方法进行细菌的回收鉴定。结果显示，用两种方法测定此株粪肠球菌的生长曲线基本一致，在2~8 h生长迅速，为对数生长期，8~14 h生长缓慢，为稳定期，14 h之后死亡数增加，进入衰亡期；对12 h粪肠球菌D_{600 nm}与CFU的关系进行探讨，成功建立回归方程：y=20.769x-1.3422，R²=0.997；其感染小鼠的LD₅₀为7.77×10¹¹个活菌。以此剂量感染小鼠，脑组织涂片染色和培养染色，均能看到革兰氏阳性球菌；PCR结果显示，均出现了大小为112 bp的条带。对脑组织进行病理学观察发现该菌可导致脑组织充血、出血、形成微血栓，脑膜充血。通过生长曲线和其D_{600 nm}与CFU关系的建立，可实时监测粪肠球菌数量，为后期更深入研究粪肠球菌穿越血脑屏障的机制奠定重要的理论基础。     

中药方剂对鸭疫里氏杆菌病的治疗效果研究

采用黄连浆膜汤以及白头翁汤治疗鸭疫里氏杆菌感染研究发现,白头翁汤能够显著改善感染鸭症状并且减少死亡率,体外抑菌试验表明白头翁汤最低抑菌浓度为0.125g/ml。对鸭群连用两天白头翁汤可以有效保护鸭免遭RAII型攻击。     

家兔大肠杆菌病中药疗法初探

为了解决家兔大肠杆菌病防治难、死亡率高及耐药性强的问题,试验采用"辨证论治"与"整体观念"的中兽医理论进行中药组方与筛选,以家兔为试验动物,按照0.1 m L/kg的剂量对家兔腹腔注射配制好的大肠杆菌耐热肠毒素菌液,并在给菌后2小时进行中药灌胃,中药的剂量是2 m L/kg,2次/d,连用3 d,观察治愈情况。结果表明:白头翁汤对该病的治愈率为63.3%,基本达到了满意的治疗效果。说明中药白头翁汤对家兔大肠杆菌病的治疗效果显著。     

用冻干菌液进行猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗效力检验的研究

在猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗的效力检验中,需要进行动物攻毒保护试验。传统方法使用的是2~8 ℃保存的新鲜菌液对试验动物进行攻毒。本研究中使用的是低温保存的冻干菌液,并对冻干保存的菌数进行了测定和优化。结果表明,冻干保存的菌液能达到新鲜菌液同等的检验结果。同时,对冻干菌液保存期进行试验验证,发现细菌存活状态稳定。因此,在猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗效力检验中,可将新鲜的攻毒菌液冻干保存,用于攻毒保护试验,以避免每次繁重的新鲜菌液前期准备工作,并克服活菌数衰减所造成的检验结果不准确等问题。     

白头翁汤抑制感染鸡胚死亡和防治肉鸡白痢的试验

由白头翁、黄柏、黄连、秦皮组成的中药方剂为古代药学名著<伤寒论>中的经典验方,被称为"白头翁汤",主要功能为清热解毒,凉血止痢.该方在人类疾病防治中被广泛应用,但是将整方用于畜禽疾病的治疗还未见报道,笔者在此方基础上,通过反复筛选开发出一个以白头翁为主药的兽用白头翁汤药方,并将其用于体外抑菌试验和肉鸡白痢防治试验,以探讨其在畜禽生产中应用的可行性.     

中草药复方制剂QWS抑菌作用试验研究

用固体培养基稀释法对８种细菌进行了中草药复方制剂ＱＷＳ的体外抑菌试验。结果表明，ＱＷＳ煎剂、浸剂经高压后对大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽霍乱巴氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌等具有抑菌作用，其抑菌药物最低浓度为１∶１６０。ＱＷＳ煎剂、浸剂、粉剂不经高压对大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽霍乱巴氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌具有很好的抑菌作用，其中以粉剂抑菌作用最好，对以上细菌，药物最低抑菌浓度在１∶６４０以上。而且粉剂对煎剂、浸剂（高压后和不高压）抑菌效果较差的金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、猪丹毒杆菌也有较好的抑菌作用，其药物最低抑菌浓度达１∶１６０。     

1株羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了确定和分析新疆某羊场患呼吸道疾病病例的细菌性病原，采集病死羊的肺脏、胸腔积液等样品进行细菌分离，通过生化试验、16S rRNA基因测序、特异性引物PCR鉴定、药物敏感性试验、毒力基因测定、对小鼠半数致死量(LD₅₀)测定等方法对分离株进行生物学特性研究。结果显示，从病羊胸腔积液中分离鉴定出一株荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌，将其命名为Pmh7。Pmh7对链霉素、头孢呋辛等10种抗菌药物敏感，对万古霉素、杆菌肽等5种抗菌药物耐药；携带6个毒力基因(fimA、nanB、ompH、sodC、Oma87、sodA),对小鼠的LD₅₀为2.3×10~6 CFU。结果表明，引发该羊场呼吸系统疾病的病原为荚膜D型多杀性巴氏杆菌，有较强的致病性。本研究结果可为防治羊巴氏杆菌病提供参考，为巴氏杆菌病的流行病学监测奠定基础。