粪肠球菌生长曲线的测定及其对小鼠脑组织的影响

为测定致羔羊脑炎粪肠球菌（Enterococcus faecalis）的生长曲线，寻求一种快速而准确的方法测定不同生长时期粪肠球菌数量，并客观评价其毒性强弱及其对小鼠脑组织的影响，试验采用平板菌落计数法和OD-Monitor振荡比浊法（D_λ值法）测定粪肠球菌的生长曲线，探究该菌在合适时间段内的吸光值（D_{600 nm}）与平板菌落计数法测定的活菌数（CFU）的关系。用粪肠球菌感染小鼠，观察记录小鼠的死亡情况，最后采用Karber法计算粪肠球菌感染小鼠的半数致死量（LD₅₀）。用LD₅₀的剂量感染小鼠，及时采集死亡小鼠脑组织，未死亡的小鼠72 h后全部剖杀取脑组织，一部分做涂片染色，制作病理切片，观察病理变化；一部分进行培养，用于PCR方法进行细菌的回收鉴定。结果显示，用两种方法测定此株粪肠球菌的生长曲线基本一致，在2~8 h生长迅速，为对数生长期，8~14 h生长缓慢，为稳定期，14 h之后死亡数增加，进入衰亡期；对12 h粪肠球菌D_{600 nm}与CFU的关系进行探讨，成功建立回归方程：y=20.769x-1.3422，R²=0.997；其感染小鼠的LD₅₀为7.77×10¹¹个活菌。以此剂量感染小鼠，脑组织涂片染色和培养染色，均能看到革兰氏阳性球菌；PCR结果显示，均出现了大小为112 bp的条带。对脑组织进行病理学观察发现该菌可导致脑组织充血、出血、形成微血栓，脑膜充血。通过生长曲线和其D_{600 nm}与CFU关系的建立，可实时监测粪肠球菌数量，为后期更深入研究粪肠球菌穿越血脑屏障的机制奠定重要的理论基础。     

寒冷环境下阿勒泰羊血常规指标检测

为了探讨寒冷环境下对阿勒泰羊血常规指标的影响,本试验于冬季采集30只阿勒泰羊颈静脉血进行血常规检测。结果表明,阿勒泰羊在寒冷环境下白细胞、中间细胞、粒细胞数目上升;红细胞总数、血红蛋白含量有所下降。此结果说明寒冷环境会导致阿勒泰羊体内有炎症发生,还会导致阿勒泰羊出现贫血的情况,为冬季饲养阿勒泰羊提供技术支持.     

慢性冷应激对断尾阿勒泰羔羊脂肪代谢相关基因mRNA表达量的影响

为了探讨冷应激对断尾阿勒泰羔羊FAS、LPL、SCD和PPARγmRNA表达量的影响。设置常温对照组(10～20℃),温度Ⅰ(-20～-10℃)和温度Ⅱ(-30～-20℃),每组3只羔羊,分别在4、12、24 d后采取不同部位脂肪组织。用荧光定量PCR技术对FAS、LPL、SCD和PPARγmRNA含量变化情况进行检测;用ELISA法测定部分血脂指标及部分血液激素指标。试验结果表明,冷应激后FAS、LPL mRNA的表达量在腹股沟脂肪中上升,在温度Ⅱ的肩胛间脂肪中上升,温度Ⅰ中下降。SCD mRNA的表达量在颈部脂肪中下降,肩胛间和腹股沟脂肪中上升。PPARγmRNA的表达量在颈部脂肪和腹股沟脂肪中上升,肩胛间脂肪中下降;血液中TG、T-CHO、LDL-C和HDL-C大体呈先上升后下降趋势,GC、LEP大体呈先下降后上升趋势,INS在不同温度下变化趋势不相同。说明了羔羊在寒冷环境下,需要消耗部分脂肪组织来维持机体的正常生理功能,而在不同温度下不同部位脂肪消耗速率有所差异。     

慢性冷应激对断尾阿勒泰羔羊细胞因子mRNA表达量的影响

为了研究慢性冷应激对断尾阿勒泰羔羊IL-1(白细胞介素1)、IL-6(白细胞介素6)、IL-12(白细胞介素12)和IFNγ(γ-干扰素)mRNA表达量的影响。试验设置常温对照组(10～20℃)、温度一(-20～-10℃)和温度二(-30～-20℃),每组3只羔羊,分别在4、12、24 d后采集外周血液白细胞和脾脏组织。用荧光定量PCR技术对IL-1、IL-6、IL-12和IFNγmRNA含量变化情况进行检测。结果表明:冷应激后IL-6、IL-12 mRNA的表达量在外周血液白细胞和脾脏中上升。IL-1、IFNγm RNA的表达量在脾脏中上升,在-30～-20℃下外周血液白细胞中上升。说明断尾阿勒泰羔羊在寒冷环境下,体内细胞因子含量总体出现上升趋势,冷应激会造成断尾阿勒泰羔羊机体内出现炎症等损伤。     

北疆地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

为科学防控新疆北疆地区3个规模化猪场副猪嗜血杆菌病,本试验采集表现出HPS病典型症状的病死猪肺脏、淋巴结和胸腹腔渗出液等病料,选择TSA培养基进行致病菌的分离,采用生理生化特性及基于PCR的分子特性对病原菌进行鉴定,同时对其药物敏感性进行检测。结果表明,从病料中共分离出5株副猪嗜血杆菌,分别编号为XJS1-2、XJS3-6、XJS3-9、XJS7-W、XJS7-7,药敏试验结果表明,不同来源的分离株对不同药物的敏感程度不同,5株分离株均对环丙沙星、诺氟沙星和新霉高敏,对氨苄西林较为中敏,对利福平和头孢类药物耐药。研究结果对该地区规模化猪场的副猪嗜血杆菌病防治提供临床防控参考。     

强冷应激对阿勒泰及杂交种羔羊脂质代谢相关基因mRNA表达量及脂肪沉积的影响

为探讨强冷应激对阿勒泰羊、阿勒泰和萨福克杂交羊、阿勒泰断尾羊脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)和脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)基因mRNA表达量、屠宰性能及血脂指标的影响,本实验设置常温组(15~20℃)与冷应激组(-25^-30℃),每组每个品种3只,选择体况相近、体重(34±4)kg的6月龄羔羊,12 d后采取血液及不同部位脂肪组织。使用荧光定量PCR技术检测FAS和LPL基因mRNA含量变化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检查羔羊血脂指标,同时测定其屠宰性能。结果表明:相较于常温组,冷应激后LPL mRNA在阿勒泰羔羊与杂交种羔羊胸部脂肪中的表达量均增高,而在断尾羊中呈下降趋势;肩胛间脂肪和腹股沟脂肪中3种羔羊的LPL mRNA的表达量都呈升高趋势。冷应激后阿勒泰羊与杂交羊胸部脂肪FAS含量升高,而断尾羊的表达下降;3种羊冷应激后肩胛间脂肪和腹股沟脂肪中FAS mRNA的表达都呈升高趋势。冷应激前后肩胛间脂肪和腹股沟脂肪中LPL表达量高于FAS。冷应激后阿勒泰羊与杂交羊总胆固醇含量显著增高,断尾羊则显著降低,冷应激后阿勒泰羊与断尾羊甘油三酯含量升高,杂交羊降低,3种羊高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量均升高。3种羊冷应激后宰前活重、胴体重、脂肪重、肌肉重、骨重、肉骨比、屠宰率、净肉率、背膘厚、GR值、眼肌面积均有所下降,皮重增高,脏器变化不明显。此结果表明寒冷环境下,机体为了抵御寒冷,需要动员更多的脂肪组织来维持机体的正常生理功能,冷应激对3种绵羊不同部位脂肪沉积与代谢有一定影响,且不同品系之间具有一定差异性。     

粪肠球菌生长曲线的测定及其对小鼠脑组织的影响

为测定致羔羊脑炎粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的生长曲线,寻求一种快速而准确的方法测定不同生长时期粪肠球菌数量,并客观评价其毒性强弱及其对小鼠脑组织的影响,试验采用平板菌落计数法和OD-Monitor振荡比浊法(Dλ值法)测定粪肠球菌的生长曲线,探究该菌在合适时间段内的吸光值(D600nm)与平板菌落计数法测定的活菌数(CFU)的关系。用粪肠球菌感染小鼠,观察记录小鼠的死亡情况,最后采用Karber法计算粪肠球菌感染小鼠的半数致死量(LD50)。用LD50的剂量感染小鼠,及时采集死亡小鼠脑组织,未死亡的小鼠72h后全部剖杀取脑组织,一部分做涂片染色,制作病理切片,观察病理变化;一部分进行培养,用于PCR方法进行细菌的回收鉴定。结果显示,用两种方法测定此株粪肠球菌的生长曲线基本一致,在2~8h生长迅速,为对数生长期,8~14h生长缓慢,为稳定期,14h之后死亡数增加,进入衰亡期;对12h粪肠球菌D600nm与CFU的关系进行探讨,成功建立回归方程:y=20.769x-1.3422,R2=0.997;其感染小鼠的LD50为7.77×1011个活菌。以此剂量感染小鼠,脑组织涂片染色和培养染色,均能看到革兰氏阳性球菌;PCR结果显示,均出现了大小为112bp的条带。对脑组织进行病理学观察发现该菌可导致脑组织充血、出血、形成微血栓,脑膜充血。通过生长曲线和其D600nm与CFU关系的建立,可实时监测粪肠球菌数量,为后期更深入研究粪肠球菌穿越血脑屏障的机制奠定重要的理论基础。     

急性冷应激对阿勒泰羊HSP60、HSP70和HSP90基因mRNA表达的影响

为研究急性冷应激通过影响热休克蛋白含量的变化对阿勒泰羊抗寒性能、生产性能及抗病性能等的影响,试验设置常温组（15 ℃±2 ℃）与冷应激组（-25 ℃±2 ℃）,每组各5只羊,屠宰后分别采集急性冷应激组（冷应激24 h后）和常温组的心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织。采用实时荧光定量PCR技术对HSP60、HSP70和HSP90 mRNA含量变化进行检测,并对HSP60、HSP70和HSP90基因进行同源性分析。结果显示,HSP70和HSP90基因与已有绵羊序列同源性高于99%,而HSP60基因与已有波斯金牛序列同源性高于99%;冷刺激后HSP60基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肾脏中的表达量差异极显著（P<0.01）;冷刺激后HSP70基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏和肾脏组织中的表达量差异极显著（P<0.01）;冷刺激后HSP90基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏组织中表达量差异显著（P<0.05）,而在脾脏和肾脏组织中的表达量差异极显著（P<0.01）。表明急性冷应激极大程度地刺激了机体的产热机能,通过通路中的产热相关基因的相互调节使其能量代谢发生改变,从而提高细胞生存率,增强机体对环境胁迫的耐受力,能更好地适应环境温度的变化。试验结果为进一步深入研究急性冷应激对阿勒泰羊机体的影响提供一定理论依据。