中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-1β、IL-8和TNF-α mRNA表达量的影响

探讨中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-1β、TNF-α、IL-8mRNA表达量的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC BLβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL中药复方多糖共培养24h,收集细胞,采用real-time PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达。结果显示,与对照组相比,不同剂量中药复方多糖均能提高不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量(P0.05)。中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量最高,中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量最高。中药复方多糖能不同程度的促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量略有不同。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中TLR4介导的MyD88依赖性途径的影响

试验旨在探讨不同剂量中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4及下游MyD88依赖性信号转导通路主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低剂量组和对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h收集细胞,应用实时荧光定量PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6mRNA的表达量(P0.05);中、低剂量组AA基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于高剂量组(培养16h时TLR4基因除外),高剂量组BB基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养32和48h时TLR4基因除外)),低剂量组BC基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养16h时TLR4基因除外)。结果表明,中药复方多糖发挥机体免疫调节作用的机制是通过与淋巴细胞表面TLR4结合,激活下游MyD88依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,且不同MH-C B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。     

中药复方多糖对不同MHC B-Lβ Ⅱ基因型鸡淋巴细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响

为探讨中药复方多糖(compound Chinese herbal medicine polysaccharides,cCHMPS)对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡免疫调节作用的影响,采用PCR-SSCP方法将200羽白羽肉鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终剂量为100、75、50、0μg/mL的cCHMPS,共培养24h,采用实时荧光定量PCR方法检测cCHMPS对鸡淋巴细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA表达量的影响。结果显示:与对照组相比,cCHMPS能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达量(P0.05)。并且同一基因型鸡中,当cCHMPS剂量为50μg/mL时,AB、AA基因型鸡淋巴细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA表达量显著高于其他剂量组(P0.05);AC基因型鸡淋巴细胞NF-κB、IL-6mRNA的表达量显著高于其他剂量组(P0.05);AC基因型鸡淋巴细胞TNF-αmRNA的表达量在cCHMPS为100μg/mL时显著高于其他剂量组(P0.05)。综上所述,cCHMPS能不同程度的促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。     

中药复方多糖对鸡淋巴细胞IL-6、TNF-α和NF-κB含量的影响

为探究中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的免疫调节作用,采用PCR-SSCP方法将黄麻肉鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组后于28日龄时各组随机取5只试验鸡,采集外周血,分离淋巴细胞,与终浓度为0.5、1、2μg/mL的TLR2抗体共培养1h后,分别加入终浓度为200、100、50、25、0μg/mL的中药复方多糖共培养24h,采用ELISA方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞培养上清液中IL-6、TNF-α和NF-κB的质量浓度。结果显示,加入TLR2抗体后,中药复方多糖促进淋巴细胞分泌IL-6、TNF-α和NF-κB的能力受到明显抑制,并且随着TLR2抗体浓度的增加,抑制作用增强。表明TLR2是中药复方多糖的免疫调节作用受体之一,中药复方多糖可能通过与淋巴细胞表面TLR2结合,经TLR2/NF-κB信号通路活化转录因子NF-κB,促进IL-6和TNF-α的分泌发挥其免疫调节作用。     

中药复方多糖对TLR4抗体阻断的不同MHCB-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中相关因子的影响

为探究中药复方多糖对不同MHC B-LβII基因型鸡的免疫调节作用受体的影响,采用PCR-SSCP方法将黄麻肉鸡按不同MHC B-LβII基因型分组,于28日龄在各组随机取5只试验鸡,采集外周血,分离淋巴细胞,与终浓度为0.5、1、2μg/m L的TLR4抗体共培养1 h后,分别加入终浓度为200、100、50、25、0μg/m L的中药复方多糖共培养24 h,采用ELISA法检测不同MHC B-LβII基因型鸡外周血淋巴细胞培养上清液中IL-6、TNF-α和NF-κB的质量浓度。结果表明:加入TLR4抗体后,中药复方多糖促进淋巴细胞分泌IL-6、TNF-α和NF-κB的能力受到抑制,并且随着TLR4抗体浓度的增加,抑制作用增强。试验表明TLR4是中药复方多糖的免疫调节作用受体之一,中药复方多糖可能通过与淋巴细胞表面TLR4结合,经TLR4/NF-κB信号通路活化转录因子NF-κB,促进IL-6和TNF-α的分泌发挥其免疫调节作用。     

山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞信号转导相关分子水平的影响

为探讨山豆根多糖(SSP)对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞信号分子的影响,采用终浓度为50、100、200、400μg/mL的山豆根多糖分4、8、12、24 h 4个时间段刺激培养鸡脾脏淋巴细胞,测定培养上清或细胞内环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)和一氧化氮(NO)信号转导分子水平。结果表明,山豆根多糖在终浓度为100μg/mL时与鸡脾脏淋巴细胞共同培养8 h后能显著升高cAMP(P0.01)、6-keto-PGF1α(P0.05)、TXB2(P0.01)水平,4种浓度的山豆根多糖对NO分子水平随时间的变化有不同程度的升高(P0.05),影响cAMP/cGMP和6-keto-PGF1α/TXB2信号体系。提示山豆根多糖可通过影响免疫细胞内的信号转导而影响机体的免疫功能。     

黄芪多糖对小鼠免疫细胞NO-cGMP信号系统的效应

试验观察了黄芪多糖对小鼠脾淋巴细胞内第二信使分子cAMP、cGMP及分泌NO的影响。结果发现,黄芪多糖以4种浓度(50、100、200及400μg/mL)均可使脾淋巴细胞NO产生增加,其中以200μg/mL作用最明显(P<0.01);黄芪多糖可抑制cAMP产生,促进cGMP生成,从而降低cAMP/cGMP比例。提示,黄芪多糖能显著影响脾淋巴细胞信息传递,其免疫作用可能是通过调节细胞内信号转导实现的。     

香菇多糖对肉鸡脾淋巴细胞转化及信息传导的影响

实验研究了香菇多糖对肉鸡脾淋巴细胞转化率及细胞内信息分子一氧化氮(NO)、Ca2 及cAMP、cGMP的影响。发现香菇多糖能剂量依赖性促进脾淋巴细胞转化率及细胞内NO、Ca2 浓度,当作用时间为20min时,能增加cAMP和cGMP浓度,而当作用时间为60min,对cAMP和cGMP浓度无显著影响。以上结果提示,香菇多糖能显著提高脾淋巴细胞免疫功能,其作用是通过改变细胞内信息传导实现的。     

复方中药多糖对体外脾淋巴细胞增殖、NO生成和蛋白激酶G的影响

将5种不同浓度复方中药多糖(CPPS)加入到小鼠脾淋巴细胞中培养48 h,观察CPPS对小鼠脾淋巴细胞增殖、对体外培养的脾淋巴细胞中NO的生成和蛋白激酶G(PKG)活性的影响。结果显示,CPPS能显著提高淋巴细胞增殖,显著升高细胞培养液中NO的生成,细胞内PKG活性明显提高,且CPPS、NO和PKG与淋巴细胞增殖有一定相关性。CPPS可能通过NO介导信号通路,引起第二信使环化鸟苷酸(cGMP)生成,从而提高PKG活性促进淋巴细胞的增殖,发挥其免疫调节作用。     

β-葡聚糖的免疫增强作用机理研究进展

β-葡聚糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗感染等多种生物活性和功能。β-葡聚糖作为非特异性的免疫调节剂，不仅能激活免疫细胞，还能促进细胞因子生成，激活补体系统，促进抗体产生，对免疫系统发挥多方面的调节作用。作者将对β-葡聚糖免疫增强的分子机理的研究进展作一概述。近年来从分子水平研究结果表明，多糖通过与巨噬细胞和嗜中性粒细胞、淋巴细胞表面多糖受体相结合，影响细胞的信息传递过程，从而影响这类细胞基因表达和淋巴细胞功能，调节机体免疫功能，淋巴细胞的多种功能均与细胞内cAMP和cGMP的含量及其比值变化有关。研究结果显示，β-葡聚糖具有调节细胞内cAMP和cGMP水平的功能。 另外，β-葡聚糖对免疫细胞NO生成具有明显的促进作用，并与干扰素具有协同促进作用，多糖可影响淋巴细胞前列腺素的分泌，调节免疫功能。阐明多糖的免疫学机理有助于开发新型免疫增强制剂。     

牛磺鹅去氧胆酸对小鼠机体cAMP和cGMP含量的影响

为了研究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠机体环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量的影响,试验用环孢菌素A诱导特异性免疫低下模型,按相应组别对应的剂量对小鼠灌胃给药7 d,获取血清;体外培养正常小鼠腹腔巨噬细胞,用MTT方法筛选TCDCA作用于腹腔巨噬细胞的最佳药物浓度;用最佳药物浓度作用于巨噬细胞后超声破碎,获取上清液;ELISA方法测定血清和上清液中cAMP和cGMP的含量。结果表明:在TCDCA高剂量(0.2 g/kg)组小鼠血清中,cAMP含量极显著高于环孢菌素A组(P<0.01);各组小鼠血清cGMP含量差异不显著(P>0.05);TCDCA促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖的体外浓度为1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL;1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL的TCDCA均能显著或极显著提高细胞内cAMP含量(P<0.05或P<0.01),对cGMP含量均没有显著影响。说明TC-DCA能够显著提高正常和免疫抑制小鼠血清中和正常腹腔巨噬细胞内cAMP含量。     

黄芪多糖能促进肉鸡脾淋巴细胞转化率

陈洪亮等研究发现,黄芪多糖能剂量依赖性促进脾淋巴细胞转化率及细胞内NO、Ca2 浓度;当作用时间为20min时,40μg/ml黄芪多糖能增加cAMP浓度,降低cGMP浓度(P<0.01);而当作用时间为60min,对cAMP浓度无显著影响。以上结果提示,黄芪多糖能显著提高脾淋巴细胞免疫功能,其作用是通过改变细胞内信息传导实现的。黄芪多糖能促进肉鸡脾淋巴细胞转化率     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇与玉米赤霉烯酮联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与玉米赤霉烯酮与(ZEA)联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响。分别以0.012 50μg/mL DON+0.006 25μg/mL ZEA、0.050μg/mL DON+0.025μg/mL ZEA、0.2μg/mL DON+0.1μg/mL ZEA、0.8μg/mL DON+0.4μg/mL ZEA对体外培养鸡脾脏淋巴细胞进行联合暴露培养,48 h后测定细胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATP酶、Na~+/K~+-ATP酶)活性以及细胞内pH、Ca~(2+)水平和钙调蛋白(CaM)的mRNA表达水平。同时设不添加毒素的空白对照组。结果表明:添加毒素的各试验组间,细胞内Ca~(2+)水平、CaM mRNA表达水平随毒素浓度的升高而增加,且添加毒素的各试验组均显著或极显著高于空白对照组(P0.05或P0.01)。细胞内pH以及细胞膜Ca~(2+)-ATP酶与Na~+/K~+-ATP酶活性均随毒素浓度的升高而降低,且添加毒素的各试验组均显著或极显著低于空白对照组(P0.05或P0.01)。由此得出,DON、ZEA联合暴露导致体外培养鸡脾脏淋巴细胞内酸化、离子平衡失调等一系列细胞内环境稳态失衡,且呈剂量依赖性。     

猪圆环病毒2型对仔猪淋巴细胞内cAMP和cGMP的影响

为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作用下淋巴细胞的免疫活性,本研究通过体外培养仔猪脾脏淋巴细胞及巨噬细胞(Mφ),分别以PCV2和PCV2+Mφ与淋巴细胞相互作用,同时设Mφ和空白对照组.培养0h、6h、12h、24 h后收取各组淋巴细胞,放射免疫法检测胞内cAMP和cGMP浓度.另外,选取15头PCV2阴性仔猪,每头滴鼻PCV2病毒悬液,分别于14d、21 d、35 d迫杀,每次5头,并设立阴性对照组4头.放射免疫法检测脾脏cAMP和cGMP浓度,并计算cAMP/cGMP比值.体外检测结果显示:PCV2对体外培养淋巴细胞内cAMP和cGMP浓度影响不大;而在Mφ存在时PCV2在6h时能显著降低cAMP和cGMP浓度和cAMP/cGMP比例(p＜0.05); 12 h时cGMP浓度下降(p＜0.05),cAMP和cGMP比例上升(p＜0.05); 24 h时cGMP浓度上升(p＜0.05),但cAMP/cGMP比例降低(p＜0.05).体内检测结果表明,PCV2能显著降低仔猪脾脏细胞内cAMP浓度(p＜0.05)及cAMP/cGMP比值(p＜0.05).该研究结果表明,在巨噬细胞存在时PCV2能够降低淋巴细胞内cAMP/cGMP的比值,从而影响淋巴细胞的功能.     

沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞的调节作用研究

试验研究沙葱多糖（Allium mongolicum regel polysaccharides）对绵羊外周血淋巴细胞增殖及一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。试验设置不同浓度（0~250μg/ml）的沙葱多糖和不同的作用时间（24、48、72 h），以MTT比色法检测淋巴细胞增殖；以培养24 h的绵羊外周血淋巴细胞为研究对象，以微板法、硝酸还原酶法分别测定NO及iNOS。结果表明，沙葱多糖浓度为50~100μg/ml时抑制淋巴细胞的增殖，当浓度为150~250μg/ml时促进淋巴细胞的增殖，且作用时间为24 h时增殖效果最强。较低浓度的沙葱多糖（50~100μg/ml）抑制淋巴细胞分泌NO，随着浓度的加大，NO分泌量增加。沙葱多糖对淋巴细胞内iNOS 活性没有显著影响（P>0.05）。因此，沙葱多糖能够影响淋巴细胞的增殖，释放 NO 及 iNOS，并且呈现量效和时效关系，说明沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞具有免疫调节作用。     

刺五加多糖对鸡淋巴细胞体外增殖及细胞因子mRNA表达水平的影响

研究刺五加多糖(ASPS)对鸡淋巴细胞体外增殖及细胞因子mRNA表达水平的影响。将不同浓度的ASPS添加到体外分离培养的血液淋巴细胞中，采用噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增殖变化，以实时荧光定量PCR方法检测淋巴细胞细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-αmRNA表达水平。结果显示，ASPS可以单独或协同植物血凝素(PHA)或脂多糖(LPS)促进淋巴细胞体外增殖，并且ASPS在质量浓度为200μg/mL时效果最佳。另外，ASPS能够促进淋巴细胞细胞因子mRNA的表达，当200μg/mL的ASPS与淋巴细胞体外共培养至24 h时，IFN-γ、IL-2、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α的mRNA表达量均最高，而IL-4和IL-10 mRNA的相对表达量则以ASPS质量浓度为400μg/mL和培养时间48 h条件下最高，说明IL-4和IL-10 mRNA的表达滞后，而且呈剂量依赖性。结果表明，ASPS能够提高鸡淋巴细胞的体外增殖功能，促进Th1和Th2细胞因子分泌，这为进一步揭示刺五加多糖的免疫调节机制奠定了基础。     

中药多糖的免疫调节作用及机制的研究进展

多糖是生物体内普遍存在的一类生物大分子,具有广泛的生理功能。对免疫系统,促进抗体的产生、多种细胞因子的生成及干扰素和白细胞介素等的生成;激活巨噬细胞、自然杀伤(NK)细胞和T、B淋巴细胞,激活补体系统;多糖通过与淋巴细胞表面CR3受体结合而发挥作用,影响细胞内[Ca2 ]i、cAMP、cGMP、NO和PGE2等第二信使的决定,并可促进细胞因子基因的表达,多糖的活性与单核组成、相对分子质量、高级结构及糖苷键类型等有关。     

OC-116基因表达载体构建及其对鸡子宫上皮细胞Ca~(2+)浓度和脂质指标的影响

本研究旨在探究OC-116基因过表达对长顺绿壳蛋鸡子宫上皮细胞Ca~(2+)浓度和脂质指标的影响。构建pcDNA3.1(+)+OC-116+Flag表达载体并转染至分离培养的鸡子宫上皮细胞中,通过Flag标签检测试剂盒检测OC-116基因的过表达量,用Fluo-3/AM钙离子荧光标记法检测Ca~(2+)浓度,用脂质指标试剂盒检测细胞内的脂质含量。结果显示:OC-116基因过表达量与Ca~(2+)呈显著正相关,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL)呈极显著正相关,与总胆固醇(TCHO)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL)呈显著负相关;Ca~(2+)与HDL呈极显著正相关,LDL与HDL呈极显著负相关。本研究结果揭示了OC-116基因能调控鸡子宫上皮细胞的Ca~(2+)浓度和脂质的代谢,为深入阐释鸡子宫上皮细胞中钙和脂质的分泌路径提供理论基础。     

胸腺素α_1对鸡脾脏淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响

为进一步阐明胸腺素α1(Tα1)的作用机制,采用MTT比色法、RT-PCR相对半定量法和RIA法研究了不同浓度的Tα1对离体培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖转化、IL-2基因表达及其分泌的影响。结果表明,10μg/mL和1μg/mL Tα1处理鸡脾脏淋巴细胞能显著提高由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化率(P<0.05),显著提高鸡脾脏淋巴细胞IL-2基因表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量(P<0.05),且以10μg/mL浓度的效果最佳。0.1μg/mL的Tα1对脾脏淋巴细胞增殖转化和IL-2基因表达与分泌无显著作用(P>0.05)。提示,Tα1对鸡免疫功能的调节同其剂量有关,并可能在基因转录水平上调节IL-2的分泌。     

鸡恒定链分子跨膜区2个氨基酸残基在形成MHCⅡ-Ii复合物中的作用

本研究旨在探明鸡恒定链跨膜区特定氨基酸在形成MHCⅡ-Ii复合物聚合中的作用特征.用大引物PCR定点突变法将鸡Ii链跨膜区2个氨基酸Gln47和Thr50分别突变为丙氨酸(Ala),再连接到pEGFP-C1载体中,构建含Ii-GFP融合基因的真核表达载体.同时还分别构建了含pDsRed2-N1-MHCⅡα、pDsRed2-N1-MHCⅡβ、pEG-FP-N1-MHCⅡa和pEGFP-N1-MHCⅡβ真核表达载体.用脂质体介导法将这些重组质粒单独或共转染至COS-7细胞,培养48 h后经荧光显微镜检测野生型Ii和突变型Ii与MHCⅡ类分子的细胞定位,并通过免疫共沉淀研究它们之间的相互关系.结果显示,野生型Ii链与MHCⅡα或MHCⅡβ之间存在细胞内的共定位,而突变型Ii与MHCⅡα或MHCⅡβ在细胞中共表达后未出现共定位现象.免疫共沉淀结果显示,在野生型Ii链与MHCⅡa或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均能检测到MHCⅡa-li、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物,而突变型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均检测不到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物.因此Ii链跨膜区Gln47和Thr50 2个氨基酸对于MHCⅡ-Ii复合体的形成是至关重要的.