四株新城疫病毒流行株F基因的遗传变异分析

设计并合成了两对寡核苷酸引物，P1和P2用于扩增新城疫病毒（NDV）全长F基因，P3和P4用于扩增NDV部分F基因。通过RT-PCR一次性扩增了NDV四平株和长春株的全长F基因和青岛株、昌黎株的部分F基因。将这些基因分别克隆后，进行了序列测定和同源率、致病性、疏水性、抗原性和系统发育等比较分析。结果表明，四平株和长春株F基因同为1762bp,编码553个氨基酸。两种F基因推导的氨基酸序列的疏水性相似，都具有3个强疏水区，但亲水性有差异，抗原表位也有明显的不同，说明四平株和长春株F蛋白的抗原性不同。4株NDV F基因序列（1-813bp)和推导的氨基酸序列（261aa)与我国台湾和国外有代表性的NDV F基因相同区域进行了比较和系统发育分析。总体上，核苷酸序列同源率在82.9%-97.5%之间，推导的氨基酸序列同源率在85.8%-97.7%之间，长春株与La Sota、Texas GB、Beaudette在同一亚群，四平株、昌黎株在同一亚群，青岛株为另一亚群。四平株、青岛株和昌黎株F蛋白裂解位点区（112-117aa)的氨基酸序列与强毒株在这一区域的序列相符，证明这3个NDV毒株是强毒株，长春株F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与弱毒株的序列相符，证明是弱毒株。     

伪狂犬病毒SN株、SL株的分离鉴定

对琼扩试验检测为伪狂犬病毒 (PRV )阳性的病料 ,采用MDBK细胞进行病毒分离培养 ,获得了两株PRV ,进而经家兔接种和核酸杂交鉴定为PRV阳性 ,将其分别命名为PRVSN株、SL株。     

鸡传染性支气管炎H株和D株疫苗比较研究

鸡传染性支气管炎是严重危害养鸡业的疾病之一，在广东对本病的主要兽医防疫措施是接种H株或D株疫苗。本文对这两株疫苗及其应用效果进行比较，现将结果报告如下。1试验材料1．1鸡传染性支气管炎疫苗病毒（IBV）H120株（自中国兽药监察所）、D41株（自广东兽医研究所）和B1系新城疫毒（自南京药械厂），种毒原液均10倍稀释后经尿囊腔接种SPF鸡胚0．2ml／只，37℃培养36小时，收取尿囊液备用。1．2鸡胚蛋购自中国兽药监察所（SPF蛋）和仲凯农技学院（非免疫蛋）。1．3试验小鸡为非免疫1日龄石歧杂黄鸡，购自广州市郊。2方法和结果2．1…     

全株甘蔗＋全株大麦混合青贮技术研究

为探讨全株甘蔗＋全株大麦青贮技术,将由于旱灾不能成熟作为榨糖原料的全株甘蔗和全株大麦铡细混合青贮后饲喂肉牛,青贮成熟45 d后取样分析养分。结果表明：①全株甘蔗＋全株大麦铡细混合青贮制成率67.58%（393.3/582）,制成可饲用率99.69%;②全株玉米青贮的DM 95.27%、CP 4.42%、EE 1.74%、Ash 4.73%、Ca 0.060%、P 0.050%、NDF 55.77%和ADF 32.96%,而全株甘蔗＋全株大麦青贮后的各营养成分分别为94.16%、9.37%、2.82%、6.98%、0.289%、0.166%、34.62%和24.14%;③2012年榨季不能达标榨糖的全株甘蔗收购价250元/t,按照平均产量60 t/hm^2,产值达15 000元/hm^2。全株甘蔗＋全株大麦青贮技术获得成功,为今后甘蔗及其副产物利用提供了技术参考。     

IBD病毒古典株和变异株之间抗原相关性的研究

传染性法氏囊病毒(IBDV)属于双股RNA病毒科,其基因组由两个片断的双链RNA组成.目前公认IBDV含有4种蛋白质:VP_1(90KDa)、VP_2(40KDa)、VP_3(32KDa)和VP_4(28KDa).另外还有一种附加蛋白质VP_x(48KDa),被认为是VP_2的前体.VP_2是重要的宿主保护性抗原,带有诱发中和抗体的抗原决定基.该中和抗体可区别两种血清型以及血清Ⅰ型中各毒株.VP_3是群特异性抗原.美国和欧洲已发现两种抗原性不同的血清型.大量的交叉中和试验表明,血清Ⅰ型各毒株间存在明显的抗原性差异.Jackwood等在参试的13个血清Ⅰ型毒株中鉴别出6个亚型.近来单抗的应用使人们已能分析IBDV血清Ⅰ型古典株和变异株之间的抗原性差异.Snyder等报道,从美国分离的新毒株发生了抗原漂移,从而导致了血清Ⅰ型古典株病毒两个中和位点中的一个发生缺失或移位.     

伪狂犬病病毒鄂A株gG^—／LacZ^＋突变株的构建

以从湖北某猪场分离鉴定的鄂A株为亲本，提取其基因组DNA，克隆含gG基因的SphI/KpnI片段，然后将LacZ基因融合到gG启动子下游，得到重组质粒pUSKZ,将重组质粒与鄂A株基因组共转染PK－15细胞，待细胞完全病变后，在X－gal存在下，作蓝斑筛选纯化。经斑点杂交和PCR扩增证实得到的是基因型为gG^-/LacZ^ 的重组伪狂犬病病毒。     

全株优质株青贮玉米生产技术

现代青贮户玉米青贮的概念,是选择适合通辽地区种植的生物产量高,籽实产量在5千kg／hm^2以上的全株青贮玉米种子,科学的栽培管理,以获得高产,优质的青贮原料。利用科学合理的青贮技术提高全株青贮玉米的饲料价值。     

新城疫CHR株与La Sota株2种疫苗近期免疫效力比较试验

鸡新城疫CHR 株冻干疫苗中试产品3 批以及La Sota 株冻干疫苗( 符合质量要求) , 以5 种免疫途径: 肌注、滴鼻、喷雾、饮水、拌料分别接种11 日龄雏鸡。每批疫苗每种途径接种1 组, 20 只/ 组, 共20 组。雏鸡群免疫前血凝抑制抗体(HI) 效价为1∶2-13 , 于14 d 、28 d 后再测HI抗体水平, 并分别用10 000 鸡胚半数致死量(ELD50) 新城疫标准强毒北京株攻击。从而检测2 种疫苗用5 种免疫途径免疫后在不同时间的近期免疫效力。结果表明, 近期内CHR 株疫苗HI抗体呈上升趋势, 而La Sota 株疫苗HI抗体先升高后下降; CHR 株疫苗以饮水和拌料途径效果较好, 其它3 种途径效果相似。接种后14 d 攻毒, 2 种疫苗均能较好保护强毒攻击; 28 d 后, CHR 株保护率高于La Sota 株。     

伪狂犬病病毒鄂A株TK—／LacZ＋突变株的构建

本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI/KpnI片段为探针，通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约5．9kb的KpnI片段中含有TK基因，回收该片段并克隆于PUC18铁KpnI位点，然后进一步克隆其中含TK基因的PstI/KpnI片段，并将LacZ表达盒插入到该片段中的BamHi位点，构建转移质粒pUEKPZ，该将质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK－15细胞，待完全病变后在X－gal存在下筛选蓝斑，蓝斑纯化3次后，经PCR扩增，Southern杂交证实获得的病毒为伪狂犬病病毒鄂A株TK－／LacZ 突变株。     

青贮全株玉米与全株甜高粱饲喂肉羊效果对比

为了研究青贮全株玉米与青贮全株甜高粱饲喂肉羊效果,本试验将40只小尾寒羊羔羊随机分为2组,试验Ⅰ组为青贮玉米组,试验Ⅱ组为青贮甜高粱组。结果表明:饲喂青贮甜高粱组羊只的采食量比青贮玉米组提高了13.25%,平均体重稍高于青贮全株玉米组羊只(P>0.05);饲喂青贮甜高梁组羊只的总增重和日增重均显著高于饲喂青贮全株玉米组羊只(P<0.05),且试验Ⅱ组比试验Ⅰ组日增重提高了13.9%,增重明显,效果良好。     

高致病性PRRSV变异株与经典株混合感染的研究

应用RT-PCR技术对来自广东省某猪场患有明显呼吸道临床症状和高热死亡的仔猪肺脏组织进行检测,结果初步鉴定为PRRSV高致病性变异株(YGhp株)与经典株(YGcl株)混合感染.进一步对2个毒株的NSP2基因进行序列分析,结果发现YGhp株与VR-2332、JXA1和Lelystad株的核苷酸同源性分别为75.1%、99%和35%,而YGcl株与上述毒株的同源性分别为99%、77.7%和34.5%,表明YGhp株为高致病性变异株,YGcl株为经典株,均属美洲型. 高致病性PRRSV变异株与经典株混合感染属非常罕见.     

柔嫩艾美耳球虫杂交株对亲本株的免疫保护性研究

为探讨柔嫩艾美耳球虫杂交株对亲本株的免疫保护性,本研究用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)杂交株及其亲本广州株、长春株、黑龙江株分别对AA肉鸡进行免疫和攻虫,通过OPG计数、粪便计分、盲肠病变计分、增重测定和保护率等指标评价免疫保护效果。结果表明E.tenella杂交株对其亲本广州株、长春株、黑龙江株的感染具有较强的免疫保护效果,保护率分别为83.9%、79.1%和81.2%;杂交株免疫肉鸡的盲肠病变计分和粪便计分显著低于广州株、长春株和黑龙江株(p0.05)。杂交株免疫后的肉鸡再用亲本株攻虫,采血进行CD4+T、CD8+T细胞检测,结果杂交株能引起两种T细胞数量增加,表明CD4+T、CD8+T细胞在球虫免疫中起着重要作用。     

猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究

从全国7个省市1200多份可疑猪瘟病料中分离出9个猪瘟病毒（HCV）野毒株，编号分别为HCV－01－09。将9株野毒分别通过PK15细胞分别通过PK15细胞传6代，测其毒价，并提纯做电镜观察，结果表明：毒价范围在10^2-10^7TCID50，电镜观察均可清晰地见到直径为25－70nm，略呈圆形的病毒颗粒，具有较完整的囊膜和纤突结构。从9株野毒中选取5株经猪瘟阴性猪各传3－4代，测其毒力、病原性、致死性，结果表明：各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这5株野毒做免疫保护相关性试验，结果证明：攻毒后的疫苗接种猪100％保护，而攻毒对照猪100％死亡，且对照猪在攻毒1周后便出现猪瘟野毒感染，而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒，表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及1982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究，结果表明：猪瘟病毒可分2个基因组6个基因亚组，HCV－02、03、06、07等4个野毒株与国内的C株、石门强毒株、国外的C株、日本GPE株、ALD株、意大利Brescia株均属同一基困组，而HCV－08株及郑州株等2个野毒与法国的Alfor株同属另一个基因组。     

全株甘蔗与全株大麦混合青贮试验

将由于旱灾未能成熟的全株甘蔗与全株大麦铡细,按照1：1的比例混合青贮,并以全株玉米青贮作为对照,待青贮原料封严后45d取样分析营养成分,并饲喂牛只研究其饲用价值。结果发现：全株甘蔗与全株大麦混合青贮制成率为67．58％,制成可饲用率为99．69％,与全株玉米青贮相近;全株甘蔗与全株大麦混合青贮的DM、CP、EE、Ash、CF、Ca、P、NDF和ADF分别为94．16％、9．37％、2．82％、6．98％、19．75％、0．29％、0．17％、34．62％和24．14％,全株玉米青贮则分别为95．27％、4．42％、1．74％、18．22％、4．37％、0．06％、0．05％、55．77％和32．96％;将不能作为榨糖原料的全株甘蔗与全株大麦混合青贮,实现甘蔗产值15000元／hm2。试验表明,全株甘蔗与全株大麦混合青贮技术研究获得成功,为今后甘蔗及其副产物利用提供了技术参考。     

急、慢性猪瘟病毒分离株和疫苗株E2基因的序列分析

利用反转录（RT）及套式PCR（N-PCR）扩增并测定了6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C-株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明，6株流行野毒与C-株疫苗毒的核苷酸同源性为82%-84%，流行野毒之间的核苷酸同源性在89%-99%之间，并且明显可分为二个组群，病毒株所属组群与其临床症状有一定的相关性。流行野毒与C-株毒在中和抗原决定簇上有部分氨基酸存在性质差异，可能影响C-株毒对流行野毒的中和滴度。     

伊氏锥虫动基体株与无动基体株致病力比较研究

以大家畜和小鼠感染试验比较了我国南、北两大疫区伊氏锥虫株及南方疫区动基体株和无动基体株的致病力。结果显示，感染南方疫区动基体株和无动基体株的马属动物和牛的临床及血检变化极为相似，感染后者的小鼠平均存活时间比感染前者的长１６ｈ，但两虫株致病力无明显统计学差异。感染北方疫区动基体株小鼠的平均存活时间比感染南方株的长，与感染南方疫区动基体株组间差异显著（Ｐ＜０．０５），与无动基体株组间差异极显著（Ｐ＜０．０１）。提示北方疫区虫株致病力弱于南方疫区虫株。     

一株鸭肝炎病毒ZY株的分离鉴定

从本试验是对山东招远地区采集疑似鸭肝炎的发病濒死鸭肝组织进行病原分离,通过鸡胚尿囊腔接种传代方法分离到一株病毒,对该病毒进行了特异性检验、PCR检测、理化特性试验和动物回归试验等,鉴定结果表明分离到的病毒是血清I型鸭肝炎病毒,我们将这株病毒命名为DHV—ZY株。