旋毛虫排泄/分泌抗原研究进展

旋毛虫病由于其对人、畜危害严重历来被人们所重视 ,其免疫防制是当今国内外学者研究的重要方向。通过对旋毛虫几种抗原的对比研究 ,排泄 /分泌抗原效果最好 ,它具有双重的免疫学功能 ,成为众多学者研究的热点 ,人们对排泄 /分泌抗原成分进行了大量研究。作为蛋白质其主要成分是三种糖蛋白 (分子量分别为4.5万 ,4.9万 ,5.3万 ) ,他们可以发生免疫学交差反应。目前人们已经获得了编码这三种蛋白的基因序列 ,并通过分子生物学技术对其基因进行克隆和表达 ,将表达蛋白用于旋毛虫病的防制。本文介绍了旋毛虫排泄 /分泌抗原的组成成分与功能 ,以及检测抗原和免疫原方面研究状况。     

纯化猪的小肠AKP用于ELISA对猪旋毛虫病检测的研究

<正> 碱性磷酸酶(AKP)起初用于抗原定位,七十年代广泛用于免疫诊断技术。1976年,Rnitenberg 等用免疫酶标记间接法(ELISA)检测猪旋毛虫病,获得了满意的结果,随后设计了自动化测试装置,检出效率很高。国内外普遍使用辣根过氧化物酶(HRP)和 AKP 进行抗抗体标记,但由于辣根过氧化物酶其试剂有致癌因素,而     

旋毛虫病免疫学诊断技术的研究概况

<正> 旋毛虫病是一种严重的人畜共患寄生虫病。目前,用于猪旋毛虫病检验的方法主要有直接法(包括压片镜检法和消化法)和间接法(包括皮肤试验和各种血清学试验)。近年来,随着免疫学技术的迅速发展和日益广泛的应用,旋毛虫病免疫学诊断技术的研     

肠道病毒71型VP1酶标抗原的制备及应用

为了建立用于肠道病毒71型(EV71)感染早期诊断的检测方法,将重组质粒pET-32a(+)-VP1转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,对表达产物进行镍柱亲和层析纯化和复性,并对复性的VP1蛋白进行辣根过氧化物酶标记,作为酶标抗原建立捕获ELISA检测方法.结果表明,该方法μ链抗体包被浓度为1∶3 000,酶标抗原工作浓度为1∶20 000,且酶标抗原稳定性良好;检测临床血清样品阳性符合率为96.1％(49/51),阴性符合率为100％(65/65).     

猪瘟病毒表面抗原E2基因的克隆与原核表达

为获得可用于诊断的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白重组抗原,对CSFV-E2的多个B细胞抗原表位进行重构和表达。将人工合成的E2蛋白多抗原表位基因与p ET-28a(+)载体连接后,转化至宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析蛋白可溶性,His亲和层析柱纯化蛋白并进行抗原性检测。重构后的猪瘟病毒E2基因多抗原表位基因大小约500 bp,PCR、双酶切鉴定结果显示与预期相符;重组蛋白为可溶性表达,大小约23 k Da;Western blot结果显示,重组蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性,可作为诊断抗原用于猪瘟病毒感染动物的血清抗体检测。     

旋毛虫病诊断方法研究综述

旋毛虫病对畜牧业及人类健康造成了严重危害。本文对动物及人类旋毛虫病的诊断方法进行了综述,如病原学诊断方法(包括压片镜检法和集样消化法)、免疫学诊断方法(包括抗体检测、循环抗原检测和蛋白芯片技术)、分子生物学诊断方法(包括聚合酶链反应技术和环介导等温扩增技术)以及基因芯片技术,分析了现有研究方法的优点和不足,为后续寻找更快速、高效、便捷、准确的诊断方法提供理论参考。     

酶联免疫吸附试验诊断绵羊和黄牛棘球蚴病的研究

以兔抗正常绵羊血清的IgG与CNBr活化的Sepharose 4B交联作免疫吸附剂进行亲和层析,除去绵羊棘球蚴囊液(SHF)中的绵羊血清成分。用亲和层析纯化的SHF作抗原进行酶联免疫吸附试验(ELISA),对棘球蚴感染绵羊和黄牛的敏感性分别为92.16％和95.83％;健康绵羊和黄牛的特异性分别为95.63％和93.33％;细颈囊尾蚴感染绵羊有22.73％出现阳性反应。讨论了宿主抗原对ELISA结果的干扰,以及各种带科绦虫的中绦期幼虫之间的交叉反应问题。     

寄生虫病循环抗原的研究现状与展望

寄生虫病患者的循环抗原是虫体的分泌物和代谢物，其检出时机比抗体早，虫体死亡后会逐渐消失，其半衰期比抗体短。检测循环抗原不仅可以用于诊断，而且还可以用于疗效考核。循环抗原及检测方法的研究已成为近年来寄生虫病免疫学研究的热点。本文仅以对人畜危害严重的囊虫病和旋毛虫病为重点，阐明国内外在这方面的研究概况。     

旋毛虫ES抗原特异性成分的分离和鉴定

在旋毛虫病的免疫学诊断中,目前常用的抗原是虫体粗制抗原(CWE)、排泄—分泌抗原(ES)及其纯化物。研究表明,CWE易出现假阳性反应,其诊断准确率不高;而ES易出现假阳性反应较少,特异性较强,因此愈来愈受到国内外学者的重视。但在ES中究竟存在几种特异性蛋白成分?它们的分子     

牛副结核ELISA中两种亲和抗原的比较

我们曾在牛副结核ELISA中采用的亲和层析抗原,收到了较其它抗原更为满意的结果。该抗原的最大优点是特异性较好,但不足的是经盐酸-甘氨酸(pH2.8)解吸附后,其抗原性有所减弱,致使抗原的包被量反而大于过G200凝胶柱抗原,而且通过一次亲和层析柱收获的抗原量也是很有限的,给大批制备抗原带来一定困难。考虑到目前的牛副结核ELISA主要是排除牛草分枝杆菌以     

旋毛虫病免疫方法的研究进展

<正> 关于旋毛虫病的发现与研究已有一百多年的历史,但因旋毛虫具有独特的发育史及复杂的免疫机制,尽管许多学者曾对旋毛虫病的免疫机制和方法做了大量的探索性研究,并取得了少许突破性进展,但人们企图利用疫苗控制本病的愿望迄今未能实现。本文根据当前有关研究资料,作一简要的概述。1 兔疫原的种类及其制备用于免疫试验的抗原归纳起来有以下几类。1.1 辐射法致弱的肌幼虫抗原Cabrera等最早用辐射方法将旋毛虫肌幼虫致弱,然后免疫猪,可使试验猪获得不同程度的免疫力。但此抗原毕竟是活虫,对今后彻底消灭旋毛虫病可能会带来隐患,故现在很少有研究和使用。注:本文承蒙河南农业大学牧医系卢中华教授审阅,谨致谢忱。     

囊虫病特异诊断方法的研究

应用间接ELISA对囊虫粗抗原、B抗原、用等电聚焦技术分离的抗原组分及特异McAb亲和层析抗原的特异性作了评价,结果均不理想。用McAb分析查明,在某些囊虫抗原分子上既有特异性抗原决定簇,又有非特异性决定簇。应用特异McAb以R-PIⅡ和Ⅰ-ELISA检测囊虫病人和猪的血清抗体,结果完全消除了假阳性反应;用R-PIⅡ微量法和Ⅰ-ELISA检测,病人血清的阳性率为87.36%(76/87)和89.66%(78/87),病猪血清的阳性率为89.32%(92/103)和86.41%(89/103);用R-PHI玻片法检测,病猪血清的阳性率为87.32%(90/103)。     

旋毛虫肌幼虫ES Ag单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的获得能够用于制备旋毛虫病快速检测试纸条的EsAg的单克隆抗体。方法应用旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原（ESAg）免疫诱导Balb／c小鼠,使小鼠产生较强的免疫应答,将免疫小鼠的脾细胞与NS0瘤细胞融合,利用Es45、ES49抗原通过间接ELISA对大量杂交瘤细胞培养上清的筛选,筛选出分泌高亲和力单克隆抗体的4株杂交瘤细胞。结果ES45和ES49（分子质量分别为45ku,49ku）分别被Ts-2D4、Ts-4C5和Ts-4H6、Ts-2G8单克隆抗体识别,与猪肺丝虫（Metastrongylus pudendotectus．MP）、囊虫（Cysticercus cellulosae,CC）、细颈囊尾蚴（Cysticercus tenuicollis,CT）、蛔虫（Ascaris suum,AS）、弓形虫（Toxoplasma gondii,TG）、住肉孢子虫（Sarcocystis miescheriana,SM）抗原反应测试表明,4株单抗与参试抗原均无交叉反应,所有单抗上清ELISA平均效价为1：1120,腹水ELISA平均效价为1．1×10^6,亲和力常数的平均值为6．12×10^9 L／mol。以金标免疫吸附试纸条原理为基础,利用制备的单抗成功研制了旋毛虫病快速检测试纸务,操作快速、无需设备及试剂,可以作为旋毛虫病的实时监测工具。结论ESAg单抗用于制备旋毛虫病快速诊断试纸条是理想的试剂。     

两种纯化羊驼BVDV抗体血清的方法

为了纯化2种用于不同用途的羊驼牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体血清,笔者分别使用(A|")KTAavant纯化柱直接纯化和抗原偶联亲和层析纯化特异性BVDV抗体,用ELISA测定抗体效价,SDS-PAGE分析抗体纯度,Western blot分析抗体的特异性。结果表明,2种方法纯化的抗体特异性均较好,可根据后续具体试验选择纯化方法。     

PAPS免疫微球快速诊断猪旋毛虫病的研究

应用新型的聚醛化聚苯乙烯（ＰＡＰＳ）载体微球与最佳的旋毛虫抗原共价交联制备成特异性强、敏感性高、重复性好的快速诊断试剂,应用于猪旋毛虫病的生前诊断。我们对旋毛虫各个发育期的虫体和分泌排泄抗原进行了分析研究,并以同一蛋白质浓度（０．６ｍｇ／ｍＬ）的成虫,新生幼虫、肌幼虫、成虫ＥＳ、肌幼虫ＥＳ、肌幼虫Ａ峰、肌幼虫Ｂ峰等七种抗原分别与ＰＡＰＳ载体微球共价交联制成各种快诊试剂,然后进行效果比较试验,其结果     

抗旋毛虫P53ES蛋白单克隆抗体的制备

为制备抗旋毛虫的单克隆抗体(MAb),以旋毛虫P53ES基因的重组蛋白免疫BALB/c鼠,经ELISA筛选和有限稀释法克隆,得到2株能稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.亚类鉴定2株MAb均属IgM亚类,其轻链均为κ链;腹水效价均达到1:104以上;Western blot证实2株MAb均能与约53 ku处的ES抗原反应,出现特异性条带;杂交瘤细胞株连续传代,细胞生长良好,效价稳定;所得MAb与隐孢子虫、猪鞭虫、猪囊尾蚴囊液抗原、多头蚴囊液、日本血吸虫抗原均无交叉反应.抗旋毛虫P53ES蛋白的MAb的制备,为旋毛虫病的研究和研制旋毛虫病诊断试剂盒奠定了基础.     

肌旋毛虫免疫亲和层析抗原的制备及其特性

以Sepharose 4B为载体,兔抗旋毛虫多克隆抗体为配体,纯化了旋毛虫的S_3抗原,得到亲和层析抗原.本实验结果表明,存在于S_3抗原中的主要抗原成分,同样存在于亲和层析抗原中,亲和层析抗原的分子量范围在103000～40000 u之间,等电点范围在pH4.7～8.8之间.亲和层析抗原经转印后,在硝酸纤维素膜上至少有7条显色带,其中分子量为48000 u,50000u,58000u和87000u的4种蛋白的抗原性较强,而以分子量为48000u的蛋白抗原性最强.     

猪旋毛虫病快速检测试纸条的研制及特性测定

以旋毛虫重组分泌(excreting secretion．ES)抗原为基础,采用免疫金技术成功研制出旋毛虫病快速检测试纸条,试验结果显示试纸条与猪肺线虫、猪囊尾蚴、猪细颈囊尾蚴、猪米氏住肉孢子虫、猪蛔虫无交叉反应。证明旋毛虫病试纸条具有良好的特异性和敏感性,其敏感性与ELISA相当,与ELISA及消化法的检测结果符合率为100％。5min内肉眼观察获得结果,具有特异、敏感、快速、简单等特点,不需要任何专业技能和其他试剂。本方法的建立对猪旋毛虫病诊断和流行病学调查具有很大的应用价值。     

旋毛虫抗原研究的进展

<正> 自从发现旋毛虫[Trichinella spiralis Owen1885(Rai-liet 1895)]到现在,已有百余年的历史了。在这期间,对旋毛虫和旋毛虫病的诸方面进行了比较广泛的研究。作为旋毛虫病免疫学和诊断研究的重要组成部分的抗原也是一个热门研究课题。本文拟就这方面的研究概况做一简述。一、旋毛虫抗原的提纯和分析由于不同作者采用的提纯旋毛虫抗原的方法不同,因而得到的结果也各异。Strobel首先发现旋毛虫的提取物具有抗原性以免疫凝胶     

轮状病毒VP7基因与LTB基因融合表达及其免疫原性

根据GenBank已发表的牛轮状病毒VP7基因核苷酸序列(DQ195152),成功克隆了牛轮状病毒野毒株CHLY VP7基因的3个主要抗原簇并在大肠杆菌中进行了高效表达,然后与LTB(大肠杆菌不耐热性肠毒素)基因融合后再一次成功表达,表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,得到了高纯度的目的蛋白。动物试验表明,该抗原蛋白可在小鼠体内诱导产生一定水平的抗体。