检测伊氏锥虫循环抗原的McAb-RPHA试验

用一株抗伊氏锥虫、马媾疫锥虫和布氏锥虫共同抗原(与泰氏锥虫等抗原无交叉反应)的单克隆抗体建立了检测伊氏锥虫循环抗原(TcA)的反向间接血凝试验。用以检测人工感染兔,于感染后8～10天TcA转阴;如不治疗直至观察期结束持续阳性;治疗后一周即转阴。用以检测疫区36份虫血症阳性水牛血清,25份阳性(69.44％);16份虫血症阴性、IHA阳性水牛血清,3份阳性;25份虫血症和IHA阴性水牛血清,全部阴性。     

牛环形泰勒虫ELISA裂殖体抗原制备和应用研究

本文报道了牛环形泰勒虫(Theileria annulata(简称环泰虫)裂殖体抗原的制备和ELISA在诊断环泰虫病、检测免疫牛抗体水平和确定虫种间血清学关系等方面的应用。应用冻融研磨法制备的抗原进行ELISA,检测25头份带虫牛血清,阳性符合率为96％,检测30头份阴性牛血清,阴性符合率为100％;一个样本重复性试验的变异系数为9.52％,多个样本重复试验的结果基本一致。表明ELISA具有较高的特异性和重复性,ELISA检测环泰虫疫区牛,阳性检出率为61.02％(镜检法为38.98％)。ELISA值的高低,与环泰虫带虫牛的红细胞染虫率呈正相关。检测49头份非疫区牛血清,结果均为阴性。用作检测免疫牛抗体水平,32头份重环泰虫裂殖体细胞胶冻苗免疫的牛血清,7个月后ELISA值仍明显高于健牛(未免疫),有62.5％在阳性范围内。检测其他种属虫体血消.不与伊氏锥虫、贝氏贝诺孢子虫和牛肉孢子虫血清发生交叉反应。检测瑟氏泰勒虫血清,有11/12的阳性反应率,初步证实环泰虫与瑟氏泰勒虫有密切的血清学关系。     

PAPS免疫微球快速诊断伊氏锥虫病的研究

本文介绍一种新型的PAPS锥虫快速诊断试剂。PAPS是我组研制成功的一种新型的载体微球,它与伊氏锥虫抗原交联所制备的锥虫快速诊断液具有特异性强、敏感性高、重复性好、快速、简便的特点。我们应用锥虫快诊液检测212头锥虫阳性病牛(见虫),阳性检出率为98.6％。对275头非疫区阴性牛进行检测,阴性符合率为99.6％。PAPS试验与血凝试验的符合率为93.2％。对142头血清和血纸两种血样本进行PAPS试验的阳性结果和反应强度完全吻合,无明显差异。     

泰氏锥虫抗原制备及实验室诊断研究

应用体外培养的泰氏锥虫制备可溶性抗原Ⅰ、抗原Ⅱ和代谢抗原.经测定,其蛋白含量每毫升分别为6.5mg、7.4mg和7.1mg.薄层等电聚焦电泳测定结果表明,抗原Ⅰ出现22条区带,抗原Ⅱ21条区带,代谢抗原28条区带,对照的伊氏锥虫琼脂免疫扩散抗原14条区带.经分析,泰氏锥虫抗原和伊氏锥虫抗原有4条区带在同一迁移率上.琼脂免疫扩散反应中,3种泰氏锥虫抗原均与相应免疫兔血清发生沉淀反应,抗原Ⅰ出现1条致密沉淀线,抗原Ⅱ和代谢抗原出现2～3条沉淀线,抗原效价为1:4～16.免疫电泳显示了类似的结果,抗原Ⅰ与免疫兔血清出现1条弧形沉淀线,抗原Ⅱ和代谢抗原与免疫兔血清出现了3条弧形沉淀线.间接血凝试验结果表明,泰氏锥虫自然感染牛血清效价为1:20～40,免疫兔血清为1:1280～5120.所制泰氏锥虫抗原对伊氏锥虫和媾疫锥虫血清也能很好地发生交叉反应,3份伊氏锥虫病马血清和3份伊氏锥虫人工感染兔血清血凝效价分别为1:10～40和1:8～1024;5份媾疫马血清有4份血凝效价为1:20～320.4份环形泰勒虫病牛血清均为阴性.     

应用酶联免疫吸附试验检测伊氏锥虫循环抗原的实验研究

本文介绍一种检测伊氏锥虫循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验。这种试验敏感性和特异性高,检查实验室制备的伊氏锥虫可溶性抗原,可检出的阈值为0.049—0.195微克蛋白/毫升(0.122±0.066微克蛋白/毫升);检查泰氏锥虫和龚地弓形体抗原,即使抗原浓度分别高达180微克蛋白/毫升和200微克蛋白/毫升,亦为阴性。用此法观察了7只实验感染家兔血清中伊氏锥虫循环抗原的动态,实验兔于感染后4—8天首次呈现抗原血症,滴度于感染后8—10天达高峰,持续仅4—12天,于感染后14—28天转为阴性,而实验感染前和用拜耳205治疗后的血清则全部阴性。将治疗前已转阴的15份血清和治疗后的28份血清标本按Bout等介绍的方法解离免疫复合物再检循环抗原,前者10份阳性,后者全部阴性.此结果证明,实验感染兔于感染后2—4周血清中出现伊氏锥虫抗原-抗体免疫复合物,复合物的产生影响循环抗原的检出。     

应用斑点酶联免疫吸附试验检测水牛伊氏锥虫抗体

应用斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)检测水牛伊氏锥虫IgG抗体,并与间接血凝试验(IHA)进行了比较。检测160份伊氏锥虫疫区水牛血清160份,Dot—ELISA和IHA的阳性率分别为55.63％和53.75％;其中42份虫检阳性血清的阳性率分别为100％和92.86％,两种试验的一致率为95.63％。两种试验的滴度呈显著正相关(r=0.8842)。10份非疫区健康水牛血清两种试验均为阴性。     

中西结合治疗兔注牛血液诊断牛锥虫病

锥虫病俗称肿脚病、耳尾焦,因牛感染伊氏锥虫所引起。1983年,福鼎市曾大面积流行此病,笔者采用兔大剂量注射待检牛血液诊断牛伊氏锥虫病,锥虫检出率高,并自1998年以血虫净和中药防己黄芪汤加减治疗牛锥虫病17例,治愈率100％。现介绍如下,供同行参考。     

应用间接血凝试验检测伊氏锥虫循环抗原

利用间接血凝试验,对人工感染伊氏锥虫的马、豚鼠,家兔的循环抗原(CA)及其出现规律进行了实验检测。结果,感染动物47/57 CA阳性,15分份锥虫培养液CA全为阳性,而健康动物及空白培养液均为CA阴性。伊氏锥虫CA与锥虫属以外的驽巴贝西虫,传贫、鼻疽等血清不交叉,而与锥属的牛泰氏锥虫、路氏锥虫、马媾疫锥虫的血清有不同程度的交叉反应。CA比抗体出现早;感染动物完全治愈后,CA消失,而未彻底治愈者,CA仅暂时消失,但不久又出现,直到动物病死,由此认为,CA的检测可作为早期诊断、疗效判定和预后判定的依据之一。     

约旦家畜寄生性血液病“蜱热”的调查

对正在爆发血液原虫病的146只绵羊,30头牛与21峰驼骆进行了调查研究,从感染绵羊的血片中检出1羊弗朗斯焦虫(Francaiella Vis,)43％、羊巴贝斯焦虫(Babesia ovis,)13％、羊边虫(Anaplasma ovis,)9％、羊泰勃焦虫(Theileria ovis,)8％,羊焦虫(Piroplasma ovis,2％)。在牛中的感染率:环形泰勒焦虫(T Jamulata)6％,小泰勒焦虫(T.parva)4.5％,牛边缘边虫(A.marginale)2.5与双芽巴贝氏焦虫(B.bigimina)2％。在骆驼中的感染率:伊氏锥虫(Trypanoosma     

新疆和静县和吐鲁番地区牛感染巴贝斯虫病的血清学调查

为了解双芽巴贝斯虫和牛巴贝斯虫在新疆疫区牛感染的状况,从吐鲁番市周边散养户、和静县部分散养户采集了273份牛(牦牛)血清。采用间接ELISA方法对血清样本进行牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫抗体检测。结果显示:和静县部分散养户被检牦牛血清抗牛巴贝斯虫(B.bovis)抗体阳性率为18.68%(17/91);被检牦牛血清抗双芽巴贝斯虫(B.bigemina)抗体阳性率为9.89%(9/91)。吐鲁番市周边散养户被检奶牛血清抗牛巴贝斯虫(B.bovis)抗体阳性率为15.38%(28/182);被检奶牛血清抗双芽巴贝斯虫(B.bigemina)抗体阳性率为9.34%(17/182)。通过调查发现牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫均有混合感染的现象,其中和静牦牛混合感染率为6.59%(6/91);吐鲁番奶牛混合感染率为8.24%(15/182);不同品种牛均可感染牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫,其感染程度及感染率具有一定的差异。本次试验结果可为有效防治新疆疫区牛梨形虫病提供重要依据。     

兔注牛血诊断牛锥虫病和中西结合治疗

锥虫病俗称肿脚病、耳尾焦，由牛感染伊氏锥虫所引起。我市1983年曾大面积流行此病，笔者自创“兔大剂量注射待检牛血诊断牛伊氏锥虫病”，锥虫检出率高，以血虫净和中药防已黄芪汤加减治疗，自1998年以来治疗牛17头，治愈率100％。现介绍如下，供同行参考。     

用微量间接血凝法诊断牛贝诺孢子虫病的研究

本试验是在1983年研制成功牛贝诺孢子虫抗原及初步应用于临床的基础上,进一步用-20℃条件下保存30个月的病牛皮肤制备牛贝诺孢子虫抗原,对应用微量间接血凝试验诊断牛贝诺孢子虫病进行了扩大复试。结果表明,15份健康牛血清全部为阴性;140头(份)带虫牛血清有133头(份)呈阳性反应,阳性符合率达95.0％;49头类症病牛血清,除1份肉孢子虫血清效价为1:40外,其余均为阴性;对疫区的496头被检牛,通过临床、组织学以及眼巩膜包囊等检查,检出阳性牛33头,检出率为6.65％,通过间接血凝试验检出阳性牛84头,检出率达16.94％,后者检出率明显高于前者。由此认为,间接血凝试验对牛贝诺孢子虫病有很高的检出率和特异性,可用于临床诊断和疫区普查。     

ESAT-6及PPD ELISA检测疫区和非疫区牛结核病的比较研究

本实验克隆、表达了牛结核早期分泌靶抗原蛋白6（ESAT-61抗原,建立了ESAT-6酶联免疫吸附检测方法（ELISA）。同时应用牛结核提纯菌素（PPD）ELISA和ESAT-6-ELISA对采自疫区的641头牛和非疫区的324头牛进行检测,其中PPD-ELISA检测中,疫区有581头阳性牛,阳性率为90．64％,非疫区有2头阳性牛,阳性率为0、62％;ESAT-6-ELISA检测中,疫区有567头阳性牛,阳性率为88．45％,非疫区没有阳性牛。对采自疫区的23例变态反应阳性牛和非疫区的7例变态反应阳性牛进行检测,其中PPD-ELISA检测中,疫区有20头为阳性。与变态反应的符合率为86．90％,非疫区有1头为阳性,与变态反应的符合率为14％;在ESAT-6-ELISA检测中,疫区有18头为阳性,与变态反应的符合率为78．30％,非疫区没有阳性。这些结果表明：ESAT-6-ELISA的敏感性要低于PPD-ELISA;牛结核ELISA在非疫区应用效果较差,在疫区更具有应用价值。     

家兔实验感染伊氏锥虫的免疫反应和病理变化

伊氏锥虫病在世界范围内流行，侵袭牛、马、骆驼等家畜，对畜牧业危害严重。动物感染伊氏锥虫后，机体能产生强烈的兔疫应答，但由于锥虫不断改变其表而糖蛋白结构，产生免疫逃避，因而机体不能最终清除锥虫的感染[1]。机体的免疫反应具有免疫保护和免疫病理两种作用，国内这方面的研究尚不多见。我们实验感染家兔，同时检测家兔的免疫反应和观察家兔的病理变化，旨在初步探讨兔疫反应在锥虫感染中的作用以及锥虫病的致病机理，为伊氏锥虫病的免疫学和病理学提供资料。1材料和方法1．1实验动物：小鼠，雄性家兔。购于解放军农牧大学实验动物…     

间接酶联免疫吸附试验诊断牛贝诺孢子虫病的试验研究

由贝诺孢子虫病牛皮肤组织包囊内分离滋养体制备抗原。然后,通过正交试验筛选影响ELISA敏感性的几种主要因素,建立了诊断牛贝诺孢子虫病的问接酶联免疫吸附试验方法。对已知阳性和阴性血清各30头份进行检测,其符合率均为100％;对疫区244头份血清进行检测,其阳性检出率为34.8％,面临床通过巩膜险查的阳性检出率仅为4.5％;对巴贝贝西虫、双芽巴西虫、瑟氏泰勒虫、环形泰勒虫、伊氏锥虫、肉孢子虫等感染牛血清68头份进行检测,除22头份肉孢子虫惑染牛血清中有5头份判为阳性外,其余均为阴性。初步尝试可以全血于纸片代替血清进行检测,其检测结果与血清一致。对ELISA检测结果以肉眼判定,与OD值测定结果间的误差不超过3.?％。     

应用酶联免疫吸附试验诊断牛肝片吸虫感染的研究

用肝片吸虫成虫制备部分纯化抗原,以10μg/ml浓度包被微量反应板,对疫区106份肝片吸虫感染牛血清、I7份正常牛血清及10份非疫区正常牛血清(1:200稀释)进行ELISA检测,以OD_(492)值大于非疫区正常牛血清OD_(492)值2倍为阳性标准(即>0.54)。结果表明,肝片吸虫感染牛血清的阳性检出率为81.1％,显著高于粪检虫卵的检出率42.4％(P<0.001)和琼脂凝胶双扩散试验的检出率65.1％(P<0.01)。疫区和非疫区正常牛血清的阴性符合率为100％、血清抗体的出现比虫卵的检出早2个月左右。据此认为,本法可用于本病的早期诊断和血清流行病学调查。     

水牛伊氏锥虫人工感染抗体规律及其广西地区自然感染状况的初步调查

通过实验感染,研究伊氏锥虫在水牛体内抗体及虫体消长的规律.ELISA检测结果表明,水牛感染伊氏锥虫后第6 d检出抗体,而且在2个多月的监测时间里,抗体都维持在较高水平(OD450nm>0.3),因此可利用ELISA方法对水牛感染伊氏锥虫进行早期诊断和监测;水牛感染伊氏锥虫后,即出现一个2～3周左右的虫血症峰期,然后虫血症峰期迅速下降,在虫血症峰期下降后1个多月的监测时间里,虫血症维持在一个很低的水平(≤1条虫体/视野),水牛感染伊氏锥虫后这种峰期短无明显症状、虫血症水平低的现象,给临床诊断和血液镜检虫体造成了一定的困难.对广西部分地区79份血清样品水牛检测的结果表明,伊氏锥虫抗体阳性率达到29.1%,说明广西各地水牛感染伊氏锥虫的现象普遍存在,而且感染率比较高,为了保证本地区水牛产业的健康发展,有必要对水牛伊氏锥虫感染进行有效的监测.     

新疆牛双芽巴贝斯虫病的流行病学调查

本研究使用牛双芽巴贝斯虫HSP20（exon）-iELISA检测方法,对2006-2008年新疆14个地州市的牛双芽巴贝斯虫病流行病学进行了调查。结果显示：（1）新疆存在着牛双芽巴贝斯虫病,且比牛巴贝斯虫病严重。在2006年采集的278份牛血清样品中,阳性血清11份,感染率为5.40%。2007年的532份牛血清样品中检出阳性血清25份,感染率为4.70%。在2008年的530份牛血清中检出阳性血清53份,感染率为7.17%;（2）2008年,发病疫区内牛双芽巴贝斯虫感染率高达30%;（3）牛双芽巴贝斯虫感染的地州市由2006年的8个扩大到2008年的13个;（4）新疆牛双芽巴贝斯虫病的感染率逐年上升,疫区面积不断扩大,流行区内感染率激增。这是新疆首次利用血清学方法对全疆范围内牛双芽巴贝斯虫病进行大规模的流行病学调查。     

猪牛弓形虫病的血清学调查

弓形虫病是由刚第弓浆虫引起的一种人畜共患寄生虫病。为了解楚雄州猪、牛弓形虫病的感染情况 ,作者对 4个县的 40 5头猪、2 2 8头牛进行了血清学调查 ,现报告如下 :1　材料和方法1 .1　弓形虫病间接血凝 (ＩＨＡ)抗原、标准阳性和阴性血清 ,由兰州兽医研究所提供。1 .2　被检血清采自楚雄、双柏、姚安、元谋 4个县农户饲养的猪。1 .3　检验操作方法按说明书进行。2　结果2 .1　猪的检验结果　阳性检出率为 1 9.2 6%( 78/40 5)。各县阳性率从高至低依次为 :双柏2 5%( 2 5/1 0 0 )、楚雄 1 9%( 1 9/1 0 0 )、元谋 1 8.1 0 %( 1 9/1 0 5)、姚…     

ELISA最适稀释度诊断牛锥虫病的效果观察

ELISA(酶联免疫吸附试验 )是一种适用于农村大规模血清学诊断的免疫新技术。我们在普查牛锥虫病中 ,初步探讨出实验材料最适稀释浓度 ,即抗原为 1 0～ 2 0 μg/ml,血清抗体为 1∶ 1 0 0～ 50 0之间 ,酶标记物为 1∶ 460。在加被检血清之前 ,先加 0 .5%牛血清白蛋白 (BSA) 0 .4ml孵育、洗涤可阻止非特异性蛋白质的竞争性吸附 ,在现场试用可达到满意的检出效果。现将报告如下。1　材料与方法1 .1　锥虫抗原1 .1 .1　鲜虫抗原　从摘脾感染锥虫的犬血中分离获得纯净的虫体。用 p H 7.2、0 .0 6M的 PBS按 1∶9稀释后 ,于液氮 (- 1 96℃ )反…