密云地区犬狂犬病疫苗免疫情况调查分析

调查显示密云地区有犬5.2508万条,其中注册犬1.7193万条、非注册犬3.5315万条。2010年,在密云县发生了1起由1条疯狗先后咬伤了6名村民和11条狗的事件,在当地群众中引起极大的恐慌。针对该事件,密云县有关部门开展了狂犬病疫苗免疫情况的调查,通过使用狂犬病病毒抗体检测ELISA方法,随机检测注册犬328条,免疫抗体阳性率为77.4%;检测非注册犬199条,免疫抗体阳性率仅为15.6%。为了掌握狂犬病疫苗免疫后的效果,选择4个乡镇进行疫苗免疫抗体监测跟踪试验,检测结果表明,免疫抗体阳性率100%。从试验结果可看出,只要狂犬病疫苗免疫确实,就会产生良好的效果。因此,提醒广大市民做好狂犬病疫苗免疫注射是目前有效预防狂犬病发生的重要手段,即保护了犬的健康,又保护了人的生命安全。     

重庆市2009-2010年动物狂犬病检测及流行病学调查

用RT-PCR方法检测重庆地区2009—2010年发生的36份临床疑似狂犬病脑组织样品和969份临床健康犬唾液拭子样品,并利用流行病学调查方法对阳性样品进行疫情溯源。结果从20份临床疑似狂犬病样品中检测出狂犬病毒,流行病学调查显示未免疫的流浪犬是主要的传染源,而农民(55.95%)和儿童(30.95%)是最容易受到狂犬攻击的人群。从969份临床健康犬唾液拭子和犬脑组织样品中未检出阳性样品。因此重庆地区狂犬病防控应加强对犬的免疫及流浪犬的管理,实行强制性疫苗免疫,加强对儿童和农民的狂犬病知识宣传和安全防护工作。     

2012-2013年广西犬狂犬病监测及免疫效果分析

为了解当前广西家犬狂犬病流行情况,评价防控效果,采集免疫过狂犬病疫苗的犬血清2 325份进行抗体检测,抗体阳性的有1571份,阳性率为67.57%。另外,采集交易市场或屠宰场表观健康犬的脑组织样品1 012份,通过RT-PCR方法检测狂犬病病原,结果表观,健康犬1份样品呈阳性,阳性率为0.099%。结果表明,实施狂犬病疫苗免疫后,广西家犬总体免疫抗体水平良好,表观健康犬携带狂犬病病毒比率下降到极低水平。提示应继续加强农村犬只的免疫和管理,有效降低狂犬病的发生。     

玉林加强犬类管理和狂犬病防控工作

为切实加强全市的犬类管理和狂犬病防控工作,有效预防和控制狂犬病的发生和流行,保障人民群众身体健康和生命安全.近日,广西玉林市制定《玉林市进一步加强犬类管理和狂犬病防控工作方案》.要求达到三个主要指标:县(市)区以上城区以及曾发生过狂犬病疫情的乡(镇、街道办)、村的犬免疫率要达到100%;在犬类禁养区病犬、野犬、放养犬和违章犬捕杀率达95%以上;其余地区家犬的平均免疫率要达到80%以上.玉林市实行"分级负责、部门配合、社会参与"工作原则,各级政府负责本辖区内犬类管理和狂犬病预防控制工作,各有关部门各司其职、各负其责、共同配合,动员社会力量积极参与.为有效遏制狂犬病疫情上升趋势,该市通过采取以下六项有力措施进一步加强犬类的规范管理和狂犬病防控工作.     

西安市犬狂犬病免疫效果调查

目的：调查了解西安市推行狂犬病强制免疫以来受免犬只的免疫状况。方法：采集本市犬场、散养犬户的犬血清样品280份,用ELISA方法检测血清中的抗体阳性率。结果：被检的犬血清样品中抗体阳性率为74.64%,且进口疫苗与国产疫苗免疫后的抗体阳性率分别为75%与72.52%。结论：实行强制免疫后,犬只群体狂犬病免疫抗体水平较高,达到了农业部规定的70%的标准。     

湖南部分地区犬狂犬病病毒的监测研究

对湖南部分地域的8个县(市、区)的8个城区、乡镇和农村的健康犬抽样采集脑组织标本142份,应用RT-PCR和直接荧光抗体试验(FAT)检测,检测结果142份犬脑样中均不含狂犬病病毒。调查上述监测点及周边近三年狂犬病的免疫情况,免疫率均超过70%。表明湖南部分犬免疫工作较好的地区,通过加大群免疫密度,可以使犬狂犬病病毒携带率降低,这可能与形成免疫屏障有关。     

云南某犬场犬狂犬病灭活疫苗免疫抗体效价评估

采用直接免疫荧光病毒中和试验(FAVN),对云南某犬场狂犬病灭活疫苗免疫28 d后的犬群随机抽样44只(份),检测血清中狂犬病病毒抗体效价。结果显示,44只受试犬,14只阳性(≥0.50 IU/m L),阳性率31.82%(14/44);狂犬病灭活疫苗免疫1次的31只受试犬(幼犬14只、训练犬17只),3只阳性,阳性率9.68%(3/31);免疫2次及2次以上的13只受试犬(3只训练犬,10只种犬),11只阳性,阳性率84.62%(11/13)。调查显示,该犬场狂犬病灭活疫苗免疫覆盖率为100%。笔者建议:在犬12月龄前,应进行两次狂犬病灭活疫苗免疫;在幼犬3月龄后进行第1次免疫,间隔1个月后进行第二次狂犬病灭活疫苗加强免疫,消除狂犬病免疫空挡,以后每年进行1次免疫;对于监测过程中,出现血清中和抗体效价低于0.50 IU/m L的犬只,应及时加强免疫1次;并加强犬场周围流浪犬、流浪猫管理。     

兽用狂犬病疫苗不同免疫次数效果分析

为探索不同饲养管理条件下的规模养犬场和散养户狂犬病疫苗免疫程序,减少畜间狂犬病的发生,从源头上控制该病,选取2个规模养犬场和2个行政村散养户的90头幼犬,平均分为A、B、C 3组,每组30只。A组在3月龄免疫1次;B组在3月龄免疫1次,30 d后免疫第2次;C组不免疫作为对照。分别在注射疫苗前和注射疫苗后第30、60、120、240、360 d采集实验犬血样,用ELISA方法检测免疫抗体。结果:A组规模场犬免疫后30～60 d抗体阳性率为76.67%～80.00%,达到国家规定≥70%的要求,而散养户犬均未达到要求;B组规模场犬免疫后30～240 d抗体阳性率为73.33%～96.67%,散养户犬免疫后60～120 d抗体阳性率为83.33～90.00%,均达到规定的要求。结论:在饲养管理较好的条件下,幼犬在3月龄首次免疫狂犬病疫苗后30 d再免疫1次效果较好,基本可保证全年狂犬病抗体的免疫水平。散养户应加强犬的营养和饲养管理,以利于免疫抗体的产生和维持。     

兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的临床应用效果评价

为进一步评价兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的安全性和免疫效力,本研究通过受试犬免疫后的临床观察、荧光抗体病毒中和试验(FAVN)检测血清中和抗体(NA)及攻毒保护性试验等方法进行检测。结果表明:试验犬接种该疫苗中试产品后无严重不良反应;5个批次的中试疫苗产品免疫效果稳定;免后第7 d,抗体阳转率97.5%,90%的免疫犬抗体达到有效保护水平;免后第360 d试验组的群体有效保护率开始下降,为90.5%;免后第390 d仍有83%的试验犬达到有效保护水平;采用狂犬病病毒(RV)街毒CNX8511株攻击免后第390 d随机抽样的30条免疫犬,其保护率达100%。结果证明,唐山怡安生物工程有限公司生产的兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的临床免疫效力不低于同类进口疫苗,可以用于我国动物狂犬病的预防和控制。     

温州市犬狂犬病免疫情况调查

为了解浙江省温州市犬狂犬病免疫情况,采用酶联免疫吸附试验,检测351份血浆样本中的狂犬病病毒IgG抗体。结果显示,该地区犬狂犬病病毒IgG抗体阳性率为46.44%(163/351);雄犬抗体阳性率略高于雌犬(P0.05),已进行绝育/去势术的犬阳性率极显著高于未进行绝育/去势术的犬(P0.01);成年犬的抗体阳性率极显著高于幼年犬(P0.01)和老年犬(P0.01);家养宠物犬的抗体阳性率极显著高于训导场内的犬(P0.01)和流浪犬(P0.01)。综上提示,温州地区犬狂犬病病毒IgG抗体阳性率相对处于中等水平,应进一步加强对流浪犬和训导场内犬的管理,扩大犬的免疫覆盖率,以控制该地区狂犬病的传播。     

两株H1N1亚型重组流感病毒的猪致病性研究

选取2种不同宿主来源的新型甲型重组H1N1亚型流感病毒(犬流感病毒(A/canine/Guangxi/QZ5/2013)(简称CIV-QZ5)和猪流感病毒(A/swine/Guangxi/QZ5/2014)(简称SIV-QZ5),以猪为动物模型,分别以106 PFU/mL病毒剂量和气管攻毒的方式感染3周龄仔猪,从而探究新型甲型重组犬流感病毒对猪的致病性。试验发现CIV-QZ5及SIV-QZ5均能有效感染仔猪,攻毒仔猪均出现发热(≥39.5℃)、流鼻涕、食欲减退、活动减少等流感症状,其中CIV组出现1头仔猪(A3)死亡。通过对肺脏灌洗液进行病毒滴定,发现CIV组在攻毒后3d和5d在肺脏的复制能力较SIV组强,最高达到3.12log10PFU/mL。病理剖检发现,肺脏出现不同程度的实变。肺脏病理切片发现两组均出现不同病变,其中以死亡仔猪(A3)最为明显,主要以支气管上皮细胞坏死脱落,肺泡壁增厚,肺泡腔以及支气管内有大量的弥漫性浸润的单核细胞为主要特征。结果表明,猪源甲型重组CIV不仅能引发猪出现明显流感症状,而且能有效地在肺脏复制,为了解潜在的猪-犬跨宿主传播机制奠定了基础。     

2016—2018年广西病死番鸭细小病毒感染检测

为了解番鸭细小病毒(MDPV)在广西病死番鸭中的感染情况,通过PCR方法,对2016—2018年广西地区送检的362份病死番鸭样品进行MDPV检测,并进行群间和时间分布以及混合感染分析。结果显示:2016—2018年广西病死番鸭平均MDPV样品检出率为10.22%(37/362),其中未免疫MDPV疫苗的样品检出率(16.36%)高于已免疫的(1.35%),20日龄以内的(19.51%)高于21日龄以上的(2.53%),2018年的(12.84%)高于2017年(8.62%)和2016年的(8.16%),3—5月(15.46%)和9—11月(11.49%)的高于1—2月(9.68%)和6—8月(3.53%)的;群阳性检出率在10.20%~21.62%之间,分布特点同样品检出率基本相同。送检的MDPV阳性和阴性样品中,均检出鸭黄病毒、鸭圆环病毒、鸭I型肝炎病毒以及禽多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌等5种病原菌。结果表明:广西地区存在一定程度的MDPV流行且有加重趋势;MDPV在春、秋季流行较为严重,主要侵害20日龄以内幼鸭;免疫对于控制MDPV感染具有较好效果,病死番鸭中多种病毒和细菌的混合感染现象较为普遍。结果提示,要加强春、秋季节的MDPV疫苗免疫,尤其是对20日龄以内的幼鸭,同时要采取综合措施,控制病原的混合感染。     

基于Cap蛋白研制的猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)是危害世界养猪业的主要疫病之一,主要由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起。该病毒可引起感染猪免疫系统的破坏,造成严重的免疫抑制,继而引发多种病毒/细菌的混合感染与继发感染,给世界养猪业造成了巨大经济损失。近年来疫苗免疫接种是防控PCVAD的有效手段,由于衣壳蛋白(capside,Cap)是PCV-2的主要免疫保护性抗原,因此常被用作研制PCV-2基因工程疫苗的理想靶抗原。论文就PCV-2Cap蛋白基因工程疫苗的研究进展进行综述,以期为今后PCV-2新型疫苗的研究提供参考。     

猪热休克蛋白40(Hsp40)的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

克隆猪热休克蛋白40 (heat shock protein 40,Hsp40)基因并构建其原核表达载体,以纯化的猪Hsp40蛋白为抗原免疫兔制备抗猪Hsp40多克隆抗体。参照GenBank收录的猪Hsp40全基因序列,设计1对特异性扩增其CDS区全序列的引物,利用RT-PCR方法扩增猪Hsp40基因;扩增产物经双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1-His,测序无误后转化Arctic Express (DE3) RP感受态高效表达宿主菌,优化其表达条件(时间、IPTG浓度、温度)后,将可溶性的猪Hsp40重组蛋白用His-Band Ni^+层析柱进行纯化,用纯化的His-Hsp40重组蛋白免疫兔以制备多克隆抗体。采用抗原亲和纯化法对制备的多抗进行纯化,并采用间接ELISA法检测抗体效价。利用Western blot检测重组蛋白的免疫原性和反应原性,以及抗体的特异性。结果显示,克隆得到的猪Hsp40基因片段长度为1 485 bp,表达出的可溶性His-Hsp40重组蛋白相对分子质量约为57 800,制备出的猪Hsp40蛋白多克隆抗体效价为1∶512 000,且该多抗能够特异性识别His-Hsp40重组蛋白和猪肺泡巨噬细胞中的Hsp40蛋白。结果表明,成功克隆了猪Hsp40基因,表达并纯化了猪Hsp40蛋白,制备的兔抗猪Hsp40蛋白多克隆抗体能够有效地应用于猪Hsp40蛋白抗原的检测。     

刺五加提取物对断奶仔猪生长性能、免疫功能和肠道菌群的影响

文章旨在研究刺五加提取物对断奶仔猪生长性能、免疫功能和肠道菌群的影响,并探讨其替代抗生素的效果。试验选取150头健康、体重相近的21日龄杜×长×大断奶仔猪,随机分为3组,每组5个重复,每个重复单独一栏饲养,每栏10头仔猪。3个处理组分别为:只饲喂基础日粮的对照组,在基础日粮中添加20 mg/kg硫酸粘杆菌素的抗生素组,以及在基础日粮中添加0.1%刺五加提取物的刺五加组。试验开始前预饲3 d,正式试验28 d。结果表明:与饲喂基础日粮相比,日粮添加抗生素和刺五加提取物显著提高了断奶仔猪的平均日增重(P <0.05),降低了料重比和腹泻率(P <0.05),且日粮添加刺五加提取物的效果优于添加硫酸粘杆菌素;与对照组相比,抗生素组和刺五加组均显著提高了断奶仔猪血清中IgG和IgM水平(P <0.05),且日粮添加抗生素有提高血清中IgA水平的趋势,但差异不显著(P> 0.05);此外,抗生素和刺五加提取物的添加还显著降低了断奶仔猪盲肠中大肠杆菌和沙门氏菌的数量(P <0.05),添加抗生素显著降低了盲肠中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量(P <0.05),添加刺五加提取物反而显著提高了盲肠中双歧杆菌的数量(P <0.05)。综上所述,刺五加提取物在提高断奶仔猪生长性能、免疫功能和调节肠道菌群方面均具有一定的优势,是一类潜力较大的抗生素替代品。     

鲤浮肿病毒荧光RAA快速检测方法的建立

为建立一种简单、快速的鲤浮肿病毒(CEV)重组酶介导的链替换扩增(RAA)检测方法,本研究通过比较分析CEVP4a基因序列,设计引物与探针,经过筛选优化,建立了实时荧光RAA检测方法。结果显示,该方法在39℃恒温反应20min即可快速、特异性地检测出CEV,与常见的鱼类病毒不发生交叉反应,其对质粒标准品的检测下限为2.8×10^1拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于5%。利用本研究建立的方法对35份临床鲤科鱼类样品进行检测,检测结果与荧光定量PCR方法结果一致。本研究建立的检测方法操作简单,特异性强、敏感性高,结果可靠,不依赖于复杂的仪器,适用于现场对CEV的快速检测。     

蜜蜂幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR检测方法的建立

为建立新型高灵敏度的幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR (droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,针对幼虫芽孢杆菌16S rRNA基因设计特异性引物和探针。通过对反应体系优化,建立幼虫芽孢杆菌ddPCR检测方法,并对方法的灵敏度、线性关系、特异性及重复性进行评估。结果:建立的方法与其他6株非幼虫芽孢杆菌无交叉反应,具有良好的特异性;线性关系良好(R^2=0. 991 4);灵敏度为2. 9 copies/μL; ddPCR检测的相对标准偏差(RSD)在0. 93%～5. 27%,重复性好。试验表明本研究建立的ddPCR方法可以对幼虫芽孢杆菌进行绝对定量检测。     

延安市鸡新城疫免疫抗体水平测定与分析

为了解延安市各县(区)鸡新城疫的免疫情况和疫苗免疫效果,于2017年春季和秋季分别对延安市甘泉、志丹、吴起、宝塔等13个县(区)的鸡新城疫疫苗免疫鸡进行了新城疫免疫抗体水平检测,并对测定结果进行分析,做出相应的评价,同时在各县(区)进行了调查。结果表明,采集的1 573份新城疫疫苗免疫鸡血清新城疫抗体总体合格率为83.73%,说明延安市13县(区)新城疫免疫抗体合格率较高;但活禽交易市场所采集鸡血清和雏鸡血清鸡新城疫免疫抗体合格率分别为68.93%和75.26%,抗体合格率相对较低,且抗体水平也较低,存在潜在的风险,应该引起足够的重视。经过二免和三免后鸡新城疫免疫抗体水平较高,说明生产中进行二免和三免的免疫操作程序是有必要的和值得推广的。     

牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)方法,本研究采用文献报道的引物和探针,通过优化反应体系,首次建立了检测IBRV核酸的iiPCR方法。结果显示该方法仅特异性检测出IBRV,而对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛腺病毒3型、牛冠状病毒、牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌等病原则不能检出。该方法的检测下限为2.4拷贝/μL质粒标准品,并具有良好的重复性。对临床样品的检测结果与OIE推荐的荧光定量PCR方法的检测结果一致;该方法配合PetNAD核酸萃取试剂盒,从核酸提取到报告检测结果仅需1h,具有操作简便、快速、可现地化的特点。对9个省29份商品化冻精检测结果显示,IBRV阳性率为24%(7/29),表明我国流通的商品化冻精携带IBRV情况普遍。本研究为IBRV的现地检测提供了一个可靠的方法。     

猪猝死症4种重要病原多重连接探针扩增鉴别检测技术的建立与应用

为了快速检测引起猪猝死的病原,本研究针对临床引起猪猝死症的4种疾病病原(猪尼帕病毒、非洲猪瘟病毒、猪产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌)分别设计特异性探针,建立了同时检测这4种病原的多重连接探针扩增技术(MLPA)。对扩增产物进行毛细管电泳分析,结果显示该方法,探针之间没有交叉反应,特异性强。对不同病原核酸的最低检测限可以达到140拷贝μ/L～370拷贝μ/L,敏感性较高。应用该MLPA方法对129份临床样品进行检测,并与国家相关标准进行比较。结果显示,两种方法的符合率为100%,且该方法检测猪产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的特异性和敏感性均达到100%,Kappa值均为1。该方法的检测结果与国家或行业标准PCR的检测结果一致性较高,且克服了后者无法同时进行多重检测的缺点,最多可以同时检测45种病原,对于复杂症候群的快速和高通量检测具有重要临床意义。该方法可推广到其它多重病原体的检测中,显示出广阔的应用前景。