马传贫弱毒继代细胞疫苗的研究——Ⅰ.马传贫弱毒对三株继代细胞的感染、增殖和免疫试验

将马传贫弱毒在LP、LL和LX继代细胞上培养传代,获得三株传代毒——LPV、LLV和LXV。传代毒对继代细胞能有规律地引起细胞病变;在电镜下,可见大量的典型马传贫病毒粒子以出芽方式成熟;经用补体结合(CF)反应、免疫扩散(ID)反应、免疫荧光(IF)抗体及ELISA等方法检测,传代毒随传代次数的增加,其对细胞的感染性也规律的增强;第5代和第10代传代毒对驴白细胞的TCID_(60)分别为5.5和6.5。将LPV、LLV和LXV传代毒接种健康马,临床观察293天,未见异常;接种后21天,感染马100％出现CF和ID抗体;攻击马传贫强毒后,分别保护4/4、3/4和2/4。     

鸡马立克氏病血清2型毒株Z_4的纯净性检验

将马立克病病毒(MDV)Z_4毒种感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)悬液(7×10~5PFU/ml)接种到支原体培养基中作盲传培养,连传3代,未见有支原体生长。经鸡胚接种试验,细胞培养试验和血清学试验证明,Z_4毒种没有受到所试12种外源病毒的污染。利用电镜技术检查Z_4感染的CEF超薄切片,除在细胞核中见到较多典型MDV病毒粒子外,在细胞核、细胞浆及细胞间隙均未发现有支原体和其它非目的病毒粒子。     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒和驴强毒全基因核苷酸序列测定

本项研究以马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒感染细胞总ＤＮＡ和驴强毒感染驴外周血病毒ＲＮＡ为起始材料,应用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ的方法,分段扩增出马传贫弱毒疫苗毒前病毒和驴强毒各基因,并将各基因克隆后进行测序。根据与国外发表的马传贫病毒核苷酸序列比较,推导出马传贫疫苗毒和马传贫驴强毒全基因组核苷酸序列。     

马传贫云南强毒及其攻击弱毒苗接种马的形态学观察

本试验观察了4匹马传贫云南强毒接种马和13匹用云南强毒攻击的弱毒苗接种马的形态学改变。4匹强毒马均出现急性型马传贫病理变化,但免疫器官中免疫活性细胞的坏死程度远不及我国辽毒急性型传贫马那样严重。甚至较美同Wyoming株毒也差。13匹接种弱毒苗的攻毒马形态学有三种类型变化。第一类型具有铁逆转,组织球,淋巴样细胞反应和网内系增生等较典型的马传贫病理变化,免疫活性细胞少,且变性,坏死。第二种类型无马传贫规律性病变,免疫活性细胞活化,增殖。但肝铁反应增强,脾铁反应明显增生。第三种类型无马传贫病理性损伤,免疫系统明显活化,增殖。依此衡量,10~(-3)lml攻毒试验马中出现Ⅰ型变化的占4/7,显然弱毒苗保护效果不够理想。10~(-4)2ml攻毒马Ⅰ、Ⅱ型变化的占5/6,表明我国研制的弱毒苗对云南毒有预防作用,可用于云南马传贫防制工作。但其中Ⅱ型变化的占3/5,Ⅲ型变化在各弱毒接种马中仅占1/3,比辽毒和Wyoming株毒攻击的弱毒接种马出现Ⅲ型反应的比数均低,结果很不一致。显然云南分离到的马传贫强毒接种马的病理变化及再攻毒马形态学改变与辽寝和Wyoming株毒有差异。本试验对这种差异进行了讨论,认为云南马传贫毒可能是又一个毒株。     

绵羊进行性肺炎病对山羊的感染试验

绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）感染山羊可生产琼扩抗体，用ＯＰＰ抗体阳性山羊的肺脏、肝脏分离物在绵羊胎肺细胞上连续培养传代。可出现以多核巨细胞为特征为细胞病变。用其培养物制备的琼扩抗原与抗ＯＰＰＶ标准阳性血清呈阳性反应，与抗马传贫病毒、牛白血病病毒标准阳性血清无交叉反应，电镜观察，病毒粒子大多散在细胞外及胞浆空胞中，以出芽方式增殖，病毒呈球多，直径８０～１２０ｎｍ，用ＯＰＰＶ感染山羊的肝脏分离培养物     

鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒（DPV34）经12日龄鸭胚连续传2代，收获的尿囊液DPV34F2作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞，连续传代5次。结果，从第2代开始，接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变，随首代次的增加，细胞病变愈加明显。经电镜观察，第5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子；将第5代培养物接种鸭胚，出现典型鸭瘟病变；用PCR方法检测培养物，也出现DPV的特征DNA带。     

贵州犬瘟热病毒的分离鉴定

对流行病学调查、临床症状检查和ELISA检测为犬瘟热阳性的自然发病犬,取肠内容物为病料,采用同步培养方法接种于犬肾细胞系(MDCK)进行病毒的分离,并对分离株进行了形态学特征、血凝特性、动物感染及RT-PCR鉴定。结果表明:病料接种MDCK细胞产生明显的细胞病变(CPE),电镜负染观察接毒细胞培养物见有典型的犬瘟热病毒粒子。分离株不凝集鸡及人“O”型红细胞,接种犬出现明显的临床症状和病理变化。用RT-PCR技术检测病毒细胞培养液,扩增出的片段长为760 bp,与预期设计的长度相同,由此确证分离株为犬瘟热病毒,命名为CDV-GZ2株。     

绵羊进行性肺炎病毒对山羊的感染试验

绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）感染山羊后可生产琼扩抗体．用ＯＰＰ抗体阳性山羊的肺脏、肝脏分离物在绵羊胎肺细胞上连续培养传代，可出现以多核巨细胞为特征的细胞病变．用其培养物制备的琼扩抗原与抗ＯＰＰＶ标准阳性血清呈阳性反应，与抗马传贫病毒、牛白血病病毒标准阳性血清无交叉反应．电镜观察。病毒粒子大多散在细胞外及胞浆空胞中，以出芽方式增殖，病毒呈球多，直径８０～１２０ｎｍ．用ＯＰＰＶ感染山羊的肝脏分离培养物复归山羊，２个月后４只山羊琼扩抗体全部阳转．     

马传贫强毒攻击穴位注苗马的形态学观察

穴位注射马传贫弱毒苗马２２匹，分别在注苗后２、３、６个月用马传贫强毒攻击３个月后迫杀，经病理学与免疫形态学联合检查表明，攻毒马有三种类型形态学改变；第Ｉ种有较典型马传贫病理变化，免疫活性细胞数量减少，且变性，坏死，第Ⅱ种类型无马传贫规律病理变化，免疫活性细胞活化，增殖，但肝内有铁反应；第Ⅲ种类型马无马传贫病理性损伤，免疫系统明显活化，增殖，据此查明２个月攻毒马１匹，出现第Ｉ种类型形态学改变，３个月     

目前对马传贫的认识

马传贫已逐渐趋向于隐性感染。本文主要叙述马传贫病毒(EIAV)及其自然媒介传播、马传贫的发病机理、临床表现和马传贫传播的防制等内容。病毒由于EIAV在体外细胞培养上的增殖明显受限(马白细胞培养例外),所以难以在实验室开展EIAV工作。病毒增殖技术的困难迫使应用马匹进行马传贫琼脂扩散(AGID)试验抗元的生产和为了验证马传贫感染进行的马匹接种试验。近年来,通过在马成纤维细胞培养上的持续增