马波沙星人工抗原的合成及其免疫原性的鉴定

合成、鉴定了马波沙星(MBF)人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清蛋白(OVA)为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原(MBF-BSA)和包被抗原(MBF-OVA),并使用紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA方法鉴定人工抗原合成效果。初步鉴定结果显示,MBF-BSA与MBF-OVA均偶联成功;用免疫抗原MBF-BSA免疫小鼠,经ELISA方法检测,五免后血清中抗体效价可达1∶5.12×105,半数抑制率为90.20 ng/m L。研究表明,马波沙星人工抗原合成成功,其免疫抗原具有良好的免疫原性,免疫小鼠可获得高效价、高特异性多克隆抗体。     

盐酸克伦特罗人工抗原及抗体的制备

为了制备盐酸克伦特罗(CL)人工抗原及抗体,试验采用重氮化法将盐酸克伦特罗与经过活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫抗原(CL-BSA)和检测抗原(CLOVA),经紫外光谱扫描对偶联物进行鉴定;用免疫抗原免疫BALB/c小鼠制备盐酸克伦特罗多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:盐酸克伦特罗人工抗原合成成功,制备的鼠源多克隆抗体效价达1∶64 000,该抗体可用于下一步试验。     

氯霉素人工抗原的合成及其抗体的制备

为了合成氯霉素(CAP)人工抗原并制备抗体,试验建立CAP残留的酶联免疫吸附试验(ELISA)法,采用重氮化法将半抗原CAP与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,制得免疫抗原,然后与卵清白蛋白(OVA)进行偶联,制得包被抗原,通过紫外光谱扫描鉴定是否偶联成功;用免疫抗原免疫KM小鼠,制备CAP多克隆抗体,并通过间接ELISA法测定抗体效价。结果表明:通过紫外光谱扫描,CAP-BSA在275 nm处为最大吸收峰,CAP-OVA在276 nm处为最大吸收峰;并且免疫KM小鼠得到的抗体效价高达1∶128 000。说明试验成功制备了CAP人工抗原,并且获得了高效价的多克隆抗体,也进一步证明了药物偶联成功。     

氨苄西林人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

为了建立氨苄西林(AMP)残留检测的免疫分析方法,试验采用碳二亚胺(EDC)法将AMP与经活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别进行偶联,合成人工抗原AMP-BSA和AMPOVA,通过紫外光谱扫描对人工抗原进行鉴定,将AMP-BSA免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:AMP与载体蛋白BSA和OVA偶联成功,并成功制备了鼠源AMP多克隆抗体,效价高达1∶64 000。     

酸性红73人工抗原的合成与鉴定

为进一步制备酸性红73新型人工抗原,试验采用N,N-羰基二咪唑(CDI)法合成酸性红73的免疫原和包被原,经紫外扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定偶联成功,酸性红73与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OA)的偶联比分别为9∶1和5∶1。免疫后所得兔源多克隆抗体,采取双向琼脂扩散实验和方阵滴定法确定包被抗原和抗体的最适工作浓度分别为1∶4000、1∶8000。     

苯乙醇胺A人工抗原的合成及鉴定

采用重氮化法将苯乙醇胺A分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原苯乙醇胺A(PEAA)-BSA和检测抗原PEAA-OVA。经紫外扫描法和SDS-PAGE鉴定表明偶联成功,偶联比分别为15∶1、17.4∶1。用PEAA-BSA免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价4.1×105以上、IC50值为0.2μg/L的多抗血清,证明合成了具有免疫原性的人工免疫原。     

多西环素人工抗原的合成与鉴定

将多西环素（doxycycline,DOX）进行化学修饰引入羧基或氨基等活性基团,然后与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成人工免疫原DOX—PABA—BSA、DOX—BSA和包被原DOX—PABA—OVA、DOX～OVA,并用紫外吸收（UV）、凝胶电泳（SDS—PAGE）和EUSA方法对人工抗原进行鉴定;将合成的人工抗原DOX—PABA—BSA、DOX—BSA分别免疫BALB／C小鼠,用间接ELISA方法测定多抗（pAb）效价,用竞争ELISA方法鉴定其敏感性,用交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,二个免疫组6只小鼠血清抗体效价均在1：6400以上,DOXpAb对DOX的50％抑制浓度（IC50）在39．79～53．13μg/L,抗血清与四环素类药物交叉反应很低。本实验为建立多西环素ELISA残留免疫学检测方法和并制备多西环素试剂盒奠定了基础。     

用于检测孔雀石绿的全抗原的合成与鉴定

采用重氮化法,将半抗原副品红(Pararosaniline,PA)分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,反应得到免疫抗原和包被抗原,其偶联最佳结合比分别为8.8∶1,12.7∶1,6.9∶1,经紫外扫描光谱和蛋白电泳鉴定得到全抗原。用制备的抗原乳化后免疫小鼠获得了效价较高的多克隆抗体。为进一步制备抗孔雀石绿单克隆抗体打下基础。     

氨基脲人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

目的合成氨基脲人工抗原并制备其多克隆抗体。方法以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),并采用碳化二亚胺法和混合酸酐法将其分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成氨基脲人工抗原。以氨基脲人工抗原(CPSEM-BSA)为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA法测定其抗体效价。结果经薄层层析、红外光谱和元素分析等方法鉴定合成半抗原即为CP-SEM。紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明人工抗原合成成功。免疫获得抗氨基脲的多克隆抗体,其抗体效价为1:64000。结论氨基脲人工抗原合成成功,并获得抗氨基脲的多克隆抗体。     

盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定

本试验旨在合成盐酸四环素人工抗原,为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素(TCH)发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐,再与蛋白质载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功,且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3.4∶1和4.2∶1。用免疫原免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA法测IC50,获得了效价为1∶51200I、C50为16.91 ng/mL的多克隆抗体,最终证明人工抗原制备成功。     

雌二醇多克隆抗体的制备与鉴定

制备雌二醇完全抗原,并通过免疫家兔得到多克隆抗体,为下一步制备雌二醇单克隆抗体和雌二醇检测ELISA试剂盒奠定基础。试验以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用碳化二亚胺法,合成了雌二醇(E2)的2种免疫偶合物:免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功与否,并对偶合物的蛋白含量、结合比进行测定并以免疫原E2-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,用包被原E2-OVA进行ELISA,对多克隆抗体特异性及效价进行检测。结果表明成功合成了雌二醇人工抗原即免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA,二者的蛋白浓度分别为5.455和7.533mg/mL,结合比分别为7:1和8:1;制备的多克隆抗体特异性好,血清效价为1:106。     

己烯雌酚免疫分析技术研究进展

己烯雌酚为人工合成的二苯乙烯类雌激素药物,曾经作为促生长剂广泛应用于畜牧业。但国内研究表明,己烯雌酚存在着潜在的致癌性。因此,近年来,其在饲料及动物性食品中的残留检测倍受关注,但己烯雌酚属于小分子化合物,不具备免疫原性。己烯雌激酚人工抗原主要采用混合酸酐反应(氯甲酸异丁酯法)将半抗原己烯雌酚与载体蛋白牛血清蛋白连接制备人工免疫原,并采用碳二亚胺法将半抗原己烯雌酚与载体蛋白卵清蛋白连接制备人工包被原。文章对己烯雌酚的免疫分析技术进行了综述。     

展青霉素人工抗原的制备与鉴定

为探讨展青霉素（patulin,PAT）不同抗原合成方法对完全抗原制备及抗体产生的影响,本试验利用琥珀酸酐联合活泼酯法,分别制备免疫原PAT-BSA和包被原PAT-OVA。为提高PAT与偶联蛋白的结合率,尝试将BSA修饰为EDA-BSA后与PAT进行偶联,并对比2种偶联方法制备的完全抗原免疫动物后抗血清的效价水平。同时利用琼脂糖凝胶电泳、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、凝胶渗透色谱多种方法分析鉴定偶联结果,为PAT单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

恩诺沙星完全抗原的合成及兔源多抗血清的制备

为了合成恩诺沙星（enrofloxacin,EFLX）完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原免疫兔,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明,免疫兔血清效价都在1∶51200以上,其中2号兔效价最高,达到1∶204800,敏感性好,半数抑制浓度IC₅₀为169.91 ng/mL,检测范围为37.52～302.31 ng/mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原,获得了敏感的兔源多克隆抗体血清,为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。     

磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究

试验旨在研究磺胺二甲嘧啶（SM2）免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。     

二氟沙星人工抗原的合成与鉴定

通过化学方法合成了二氟沙星人工免疫原和包被原；采用碳二亚胺法将半抗原二氟沙星与载体蛋白BSA连接制备人工免疫原；并采用氯甲酸异丁酯法将二氟沙星与载体蛋白OVA连接制备人工包被原，经FeCl3显色反应、紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功。这对抗二氟沙星单克隆抗体的制备具有重要意义。     

恩诺沙星在鸡肉组织中残留的ELISA检测方法研究

分别用N-羟基琥珀酰亚胺法和氯甲酸异丁酯法把恩诺沙星(ENR)与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔得到ENR的多克隆抗体,建立了ENR间接竞争ELISA方法。结果表明:抗ENR血清效价达达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为Y=-0.2341X+0.1193(R2=0.9878),中值(IC50)为36 ng/mL,最低检测限(LOD)为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10~1000 ng/mL。批内变异系数为3.18%~7.64%,批间变异系数为9.69%~11.94%,鸡组织中的ENR的回收率为76.5%~89.42%。本试验建立的ELISA方法能够满足恩诺沙星兽药残留检测要求。