2021年北京市兽医实验室非洲猪瘟病毒核酸检测能力比对

为客观评价北京市兽医实验室非洲猪瘟病毒核酸检测能力水平,2021年北京市动物疫病预防控制中心组织10家区级兽医实验室和7家非洲猪瘟第三方授权实验室开展了非洲猪瘟病毒核酸检测能力比对试验,并利用箱线图、稳健统计Z比分数、尧敦图等统计方法,对各实验室非洲猪瘟病原学检测结果进行统计分析。结果显示,18家兽医实验室（含北京市动物疫病预防控制中心）中有17家检测结果正确,只有1家实验室的1份盲样检测结果不合格,但部分实验室仍存在检测结果预警情况。建议各实验室持续加强质量控制,提高检测能力和水平。     

非洲猪瘟病毒核酸定性检测方法比对

为提升兽医实验室非洲猪瘟病毒核酸检测能力和质量控制水平,积累检测经验,以更好地开展非洲猪瘟检测,2020年7月,参加了北京市农业农村局组织的“非洲猪瘟实验室检测能力比对”项目。本次比对同时选用《非洲猪瘟检疫技术规范》(SNT 1559—2010标准)中的普通PCR方法、荧光定量PCR方法以及商品化试剂盒,对5份验证样品开展非洲猪瘟病毒核酸检测和结果比对。比对发现,3种检测方法结果一致,样品检测结果与预期一致,结果满意。此次比对确认了实验室现有检测方法能够满足非洲猪瘟病毒核酸的日常检测需求,同时提升了实验室人员的检测能力,积累了检测经验,可为非洲猪瘟防控提供有力的技术支撑。     

2022年湖南省兽医实验室检测能力比对及非洲猪瘟检测能力验证

实验室检测能力比对与能力验证是评估实验室检测质量的重要手段。2022年4月,按照农业农村部关于检测能力比对的工作部署和要求,湖南省组织全省14个市级77个县级兽医系统实验室开展了检测能力比对,267个实验室开展了非洲猪瘟能力验证。市级开展禽流感病毒H5/H7亚型核酸鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、O型口蹄疫病毒抗体检测3个项目,县级开展非洲猪瘟病毒核酸、O型口蹄疫病毒抗体以及布鲁氏菌抗体检测3个项目,非洲猪瘟检测实验室开展非洲猪瘟病毒核酸检测项目,每个项目各5份盲样。结果显示:12个市级和59个县级系统实验室所有比对项目检测结果全部准确,实验室整体准确率为78.02%,1 355份样品中1 317份样品检测结果准确,样品整体准确率为97.20%;267个参加非洲猪瘟能力验证的实验室中,224个实验室核酸检测结果准确,实验室整体准确率为83.90%,1 335份样品中1 265份样品结果准确,样品整体准确率为94.76%,其中屠宰企业样品准确率最低(93.30%)。结果表明:湖南省兽医实验室检测能力整体良好,但部分县级兽医系统实验室及屠宰企业实验室检测能力有待加强。各地应继续加强实验室检...     

非洲猪瘟实验室消毒和无害化处理操作规范

按照《农业农村部办公厅关于做好非洲猪瘟实验室检测工作的通知》(农办牧[2018]54号)和《农业农村部办公厅关于进一步做好非洲猪瘟实验室检测工作的通知》(农办牧[2018]66号)要求,截至2019年6月,四川省农业农村厅组织相关专家分三批对申请开展非洲猪瘟检测的第三方兽医实验室进行了现场查验和能力比对,共核准了14家第三方兽医实验室可以受委托开展非洲猪瘟检测,同时发布了《非洲猪瘟实验室消毒和无害化处理操作规范》和《实验室非洲猪瘟生物安全应急预案》,供相关机构参照执行。     

基于风险监测的县域非洲猪瘟疫病发生风险调查评估

为科学防控非洲猪瘟疫情，以基于风险监测的原则在项目县域内开展非洲猪瘟疫病发生风险调查评估。在生猪养殖、运输屠宰和市场销售等环节共采集生猪全血样品3 085份、环境样品983份，实验室检测非洲猪瘟病毒核酸，结果全血样品全部呈阴性，环境样品有24份阳性。对生猪养殖场点开展问卷调查，进行半定量风险评估，结果非洲猪瘟疫病发生风险等级以种猪场较低，单纯育肥场较高，县域内发生区域性非洲猪瘟疫病的风险较低。     

不同非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒在检测猪肉及猪肉制品中的比较

为了解不同非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒在检测猪肉及猪肉制品中的特征,采用国内外6种商品化非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测试剂盒,分别对同一样本开展稳定性试验,对相同非洲猪瘟强阳性、中阳性及弱阳性样本开展敏感性试验。结果显示:6种试剂盒扩增稳定性良好;对强阳性样本,所有商品化试剂盒均能检出;对中阳性及弱阳性样本,特别是弱阳性样本,不同试剂盒的检出情况不尽相同。因此在实际应用中,应根据具体需求选择合适检测试剂盒。本试验为一线工作者选择使用不同商品化非洲猪瘟检测试剂盒提供了一定参考。     

猪病动态

俄罗斯伏尔加格勒州新发非洲猪瘟 日前，俄罗斯伏尔加格勒州兽医实验室在对对伏尔加格勒州卡拉切夫斯基区斯维特罗格农场送检的病死猪病理材料样品进行检验时，检出非洲猪瘟病毒基因。     

多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒

为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法。根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT—PCR扩增后将产物回收,克隆至pMDl8-T构建pMDl8-T—CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMDl8-T—ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板时建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级．而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后．发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标。未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。     

非洲猪瘟病毒抗体检测间接ELISA方法的建立

以基因工程表达的非洲猪瘟病毒VP73蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,用以检测猪血清中抗非洲猪瘟VP73蛋白的抗体。该方法对非洲猪瘟标准阳性血清的检测灵敏度可以达到1∶2 560,与同类进口ELISA试剂盒相当。此方法只特异性检出非洲猪瘟阳性血清,而对猪传染性胸膜肺炎等5种猪传染病阳性血清的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。批内和批间重复性试验结果发现,检测同一份血清的变异系数小于10%,表明其重复性较好。包被好的酶标板37℃放置5d后,对同一份血清的检测敏感性无明显变化,初步表明其稳定性较好。利用建立的间接ELISA方法和进口ELISA试剂盒分别对150份血清样品进行非洲猪瘟血清抗体检测,结果表明本方法的特异性和敏感性分别为99.1%和94.3%,2种方法检测结果的符合率为98%。以上试验表明,本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性、较好的重复性和稳定性,可以满足临床检测的需求。     

浅谈菏泽市防控非洲猪瘟的举措

非洲猪瘟疫情在一些地方暴发后,山东省菏泽市专门成立了非洲猪瘟防控专家组,及时指导全市的非洲猪瘟防控工作,加强对各县区兽医技术人员的培训,指导各县区兽医实验室非洲猪瘟检测能力建设,促进畜牧业发展。1开展技术培训菏泽市动物疫病预防控制中心多次开展非洲猪瘟防控技术培训,先后对全市9县区技术骨干近百人次进行了理论和实操培训,通过培训,使各县区掌握非洲猪瘟采样、样品前处理、检测技术及试验废弃物处理注意事项,熟悉样品送检要求和检测阳性结果的处置规定。     

非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及临床应用

为建立非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR方法,以非洲猪瘟病毒P72蛋白编码基因为靶基因设计引物和探针,利用正交试验方法优化反应体系及扩增程序,建立了非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR方法,并对其敏感性、特异性及稳定性进行评估。结果显示:建立的方法最低检出限为0.58 copies/μL,与荧光PCR方法相比更敏感;本方法与布鲁氏菌、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒无交叉反应;对10倍稀释的标准物质检测10次,变异系数为8.44%,重复性好。利用建立的方法对100份临床样品进行检测,结果均为阴性,与荧光PCR检测结果一致;对5份实验室间比对样品进行检测,检测出阳性样品4份,阴性样品1份,与实验室间比对给定的样品盘结果一致。结果表明,本研究建立的微滴式数字PCR方法的敏感性、特异性和稳定性符合要求,适于非洲猪瘟病毒临床检测。     

各地

正山西省确定首批8家实验室可检测非洲猪瘟近日,山西省农业农村厅发布《关于确定山西首批非洲猪瘟检测委托实验室的通知》,山西省确定8个实验室为首批非洲猪瘟检测委托实验室,山西省农业农村厅畜牧兽医局将不定期对受委托实验室的实验活动和生物安全进行督导。根据通知,各受委托实验室应严格遵守实验室生物安全操作规范。样品检测前,要在生物安全柜中对样品进行处     

6种非洲猪瘟荧光PCR试剂盒对比试验

对5个厂家的6种非洲猪瘟荧光PCR试剂盒检测的敏感性和一致性进行综合比较,选取已知阳性的核酸样品作为待测样品进行梯度稀释,每组设置三个平行对照,使用A1、A2、B、C、D、E6种试剂盒,按照各厂家试剂盒说明书对所有样品进行非洲猪瘟荧光PCR检测及结果判定,并从检出ct值的样品数量、检出核酸最低拷贝浓度、检出ct值的平均值和检出ct值的离散度四个维度来综合评估对6种试剂盒的敏感性和一致性.结果显示:检测灵敏度方面,由高至低的排名为试剂盒D＞试剂盒C＞试剂盒A2＞试剂盒E＞试剂盒B＞试剂盒A1;检测一致性方面,试剂盒D＞试剂盒C＞试剂盒A2＞试剂盒E＞试剂盒B=试剂盒A1.综合6种试剂盒的敏感性和一致性来看,试剂盒D的灵敏度和一致性最好,试剂盒C稍低于试剂盒D,但差距很小,几乎在同一水平,试剂盒A2灵敏度和一致性次之,其余三种试剂盒E＞试剂盒B＞试剂盒A1.     

云南省文山壮族苗族自治州首例非洲猪瘟的初步诊断

2019年5月23日,云南省文山壮族苗族自治州砚山县维摩乡散养户饲养的猪发生疑似非洲猪瘟疫情。文山州动物疫病预防控制中心兽医分子生物学实验室运用PCR核酸检测技术结合临床剖检,对该起疫情进行了初步诊断,并经云南省动物疫病预防控制中心兽医实验室复核,确诊为非洲猪瘟病毒感染。此次非洲猪瘟的临床诊断与PCR检测,为基层实验室非洲猪瘟诊断积累了经验,对非洲猪瘟的早发现、早控制具有积极意义。     

农业农村部:进一步做好非洲猪瘟实验室检测工作

12月14日,农业农村部下发进一步做好非洲猪瘟实验室检测工作的通知,内容如下。一、疫病检测程序首次发生疑似非洲猪瘟疫情的省份,按照《农业农村部办公厅关于做好非洲猪瘟实验室检测工作的通知》(农办牧〔2018〕54号)(以下简称《通知》)有关要求,由中国动物卫生与流行病学中心进行确诊。再次发生疑似非洲猪瘟疫情的,由省级动物疫病预防控制机构进行确诊;各受委托实验室发现疑似阳性结果,要将疑似阳性样品送省级动物疫病预防控制机构进行确诊。确诊后要将病料样品送中国动物卫生与流行病学中心备份。     

应用ELISA方法检测非洲猪瘟抗体

为了验证ELISA方法检测非洲猪瘟抗体的可行性,在东莞市3个屠宰场采集92份猪血清,应用ELISA方法进行检测,结果为阴性和阳性质控均成立,非洲猪瘟抗体均为阴性。结果表明,ELISA方法操作简便,适合大规模样品非洲猪瘟抗体的监测。     

湖南省非洲猪瘟检测实验室能力建设现状调查

为了解湖南省非洲猪瘟检测实验室能力水平,采用问卷调查、能力比对、现场调查等方式,对实验室类型、数量、仪器设备、人员配置、检测能力比对、运行情况、生物安全措施等开展全面调查。问卷及现场调查显示:湖南省具备非洲猪瘟检测能力实验室179个,其中系统内兽医实验室仅37个,检测力量薄弱,难以满足当前非洲猪瘟防控需要;屠宰企业实验室120个,但实验室条件简陋、人员配置不合理,检测结果难以有效保障;实验室仪器设备与检测试剂来源多样,缺少统一判定标准,结果准确率低;实验室质量管理体系及生物安全管理体系不完善,监管不规范。能力比对显示:参与完成能力比对的实验室150个,检测结果全部符合的实验室78个,实验室检测质量堪忧;屠宰企业实验室存在大量假阴性结果,疫病传播风险大。这提示湖南省虽拥有一批非洲猪瘟检测实验室,但整体检测水平不高,检测能力和实验室生物安全水平亟待加强。     

动物疫情快递——赞比亚发生非洲猪瘟

2007年12月12日,赞比亚向OIE报告了非洲猪瘟疫情。疫情始于2007年11月1日,11月27日得到确诊。属于临床病例,依靠临床检查、实验室检测和尸体剖检作出诊断。病原是非洲猪瘟病毒。设在卢萨卡的中央兽医实验室（国家实验室）采用直接荧光抗体试验（FAT）检测呈阳性,南非Ondersteerpor兽医研究所（OIE参考实验室）的病毒分离试验还在进行中。     

2019—2021年浙江省兽医实验室非洲猪瘟检测能力比对

为了解兽医实验室非洲猪瘟病毒检测能力,2019—2021年,浙江省按年度分别组织了地（市）、县（市、区）级系统兽医实验室和116家生猪屠宰企业参加了非洲猪瘟检测能力系列比对工作。结果显示：兽医系统实验室2019—2021年样品正确率分别为100%、98.78%、98.90%,实验室正确率分别为100%、94.55%、96.00%。2019年屠宰企业检测室样品检测正确率为83.45%。系统内实验室整体正确率较高,但部分县区级实验室检测水平还有待提高。屠宰企业检测室检测能力亟待提升,存在生物安全设施不完善,生物安全意识不强等问题。这提示浙江省兽医实验室还需提升管理规范化水平,提高人员检测能力。     

荧光PCR检测非洲猪瘟病毒的注意事项

当前,基层兽医实验室、大型养殖场及屠宰场等已逐步开展非洲猪瘟病毒的实验室检测工作,主要以荧光PCR检测为主。本文对实验室及人员硬件、实验操作各环节常见的问题及注意事项进行梳理汇总,为基层开展日常ASF检测提供参考。