SPMI基因在公母猪生殖道的时空表达特性研究

为揭示猪精子运动抑制因子(Seminal plasma motility inhibitor,SPMI)基因在公母猪生殖道的时空表达特性,本研究运用定性RT-PCR分析了SPMI在生殖道的组织表达谱,利用半定量RT-PCR技术分析了SPMI在公猪精囊腺和尿道球腺组织的发育性表达.定性RT-PCR分析结果发现,SPMI基因在精囊腺中的表达丰度最高,在尿道球腺和子宫角中呈中等丰度表达,在前列腺、子宫颈和卵巢中的表达较弱,在其它生殖道组织未检测到mRNA表达.半定量RT-PCR分析结果显示,SPMI基因在公猪精囊腺和尿道球腺中的发育性表达规律相似,都在初生时即启动,表达水平随着日龄的增加不断提高,直至性成熟(150日龄).其中SPMI基因在精囊腺中的表达在60、90和150日龄均有显著提高(P＜0.05);而在尿道球腺中,SPMI基因的表达在30、90和150日龄均有显著提高(P＜0.05),而60日龄的表达较30日龄时有所提高,但差异不显著(P＞0.05).这些结果提示SPMI基因在公母猪生殖道呈广泛表达,其发育性表达呈日龄依赖性特点,表达水平在初情期至性成熟期有显著提高.     

日粮营养水平对番鸭GH、GHR基因表达影响的研究

为了解番鸭在生长发育过程中不同日粮营养水平对番鸭生长激素(GH)、生长激素受体(GHR)基因在肌肉组织中的表达情况,试验在0~21、22~42和43~91日龄分别设计9个营养水平的日粮,分别饲喂番鸭,在21、42和91日龄分别对番鸭进行屠宰获得其胸肌和腿肌的组织样,采用实时荧光定量PCR检测不同样品之间GH、GHR基因mRNA表达的差异。结果表明,在21、42日龄时,GH、GHR基因在同组织中不同日粮营养水平之间均无显著性差异(P0.05)。在91日龄时,各组胸肌中GH基因表达无显著性差异(P0.05),各组腿肌中GH基因表达差异显著(P0.05),各组胸肌、腿肌中GHR基因表达均有显著性差异(P0.05)。在番鸭早期生长发育过程中,GH、GHR基因表达未因日粮营养水平的不同而出现差异,但是在91日龄时会受到日粮营养水平的影响。     

香猪垂体特异性转录因子基因及其相关基因表达水平的半定量分析

采用RT-PCR方法对香猪及对照猪种(上海白猪、大约克夏猪)PIT-1基因和相关基因(GH、PRL和TSH-β基因)的mRNA扩增,并以β-actin为内参照进行基因表达水平的半定量分析。结果表明,香猪PIT-1基因及GH、TSH-β基因的表达水平均显著低于上海白猪和大约克夏猪(P<0.05),香猪与上海白猪、大约克夏猪在PRL基因表达水平上的差异也接近显著水平。研究结果提示,香猪的PIT-1基因可能存在着突变,从而使其PIT-1基因的表达水平降低,减弱了PIT-1蛋白对于GH、PRL及TSH-β基因转录和表达的激活功能,导致香猪生长缓慢和矮小性。     

生长激素受体基因在美国短毛黑水貂组织中表达量变化研究

为了探讨水貂生长激素受体(GHR)基因在不同组织中的表达变化,以美国短毛黑水貂为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测了GHR基因在不同生长发育阶段(45、90、120、150、180日龄)心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤等组织的表达水平,并进行了比较分析。结果表明:GHR基因在同一组织不同日龄表达具有较大差异,例如,在心脏、肝脏和脾脏组织,180日龄表达量极显著高于其他日龄(P0.01),而肠组织,其在45、120日龄均极显著高于其他日龄(P0.01);此外GHR表达量在同一日龄不同组织同样存在较大差异,例如,90日龄时皮肤组织极显著高于其他组织(P0.01),180日龄时脾脏极显著高于其他组织(P0.01)。说明水貂GHR基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

Tektin3基因在猪生殖系统发育中的表达规律研究

TEKTIN是附着于精子尾部基因丝的重要组分,对于基因丝的稳定和结构的复杂性起重要作用。Tektin3是其家族成员之一。研究采用RACE方法,获得梅山猪Tektin3基因全序列,利用生物信息学方法分析其结构和功能,采用半定量的方法研究150日龄梅山公母猪23个不同组织Tektin3基因的表达特征,并用Realtime PCR方法分析2、30、60、90和150日龄梅山公猪睾丸的表达规律。结果表明:(1)Tektin3基因全序列1 761bp,包含5'UTR 95bp,完整的CDS序列1 473bp和3'UTR 193bp,编码490个氨基酸,相对分子质量为56 481.3,理论等电点为7.94。(2)Tektin3基因在睾丸中高丰度表达,在下丘脑和子宫角中表达丰度较低。(3)Tektin3基因从梅山猪60日龄开始表达,到90日龄时显著下降(P0.05),150日龄时显著上升(P0.05)。结果表明该基因编码氨基酸除与精子发生有关,可能还与部分组织或器官的纤毛发生及公猪的性发育有关。     

芪归催乳散对母猪泌乳性能及仔猪免疫和抗氧化功能的影响

旨在研究饲料中添加中药"芪归催乳散"超微粉对母猪泌乳性能及仔猪免疫和抗氧化功能的影响。选取24头胎次、分娩期相近的待产长白二元母猪,随机平均分为3组,每组8个重复。自产前7d开始,对照组母猪饲喂基础日粮,试验1,2组的母猪分别在基础日粮中添加1%和2%的芪归催乳散超微粉,直至断奶。仔猪分别于出生当日、20日龄及断奶时测体质量,计算泌乳量;并于断奶当日从每窝随机挑选2头仔猪采血,检测血清免疫和抗氧化指标。母猪则收集初乳,并于产后4,21d采血,用于检测初乳成分及泌乳相关激素水平。结果显示,在饲料中添加芪归催乳散超微粉能显著提高母猪泌乳量、初乳中蛋白含量以及初乳中催乳素(PRL)、生长激素(GH)和促甲状腺素(TSH)水平(P0.05),显著提高母猪血清中催乳素(PRL)和生长激素(GH)水平(P0.05);同时能显著提高仔猪血清免疫球蛋白(IgG,IgM,IgA)和补体C3的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性(P0.05),降低丙二醛(MDA)含量(P0.05)。上述结果表明,芪归催乳散能显著提高母猪泌乳相关激素水平,促进泌乳;同时能提高哺乳仔猪免疫和抗氧化功能。     

雪山草鸡PRL基因的表达差异及其对繁殖性能的影响

从880只250日龄雪山草鸡中选取处于产蛋期、就巢期和恢复期的鸡各20只,屠宰采集下丘脑、垂体、输卵管和卵巢,用荧光实时定量PCR法检测其中催乳素基因mRNA的表达水平,并与繁殖性能进行相关分析,结果表明:PRL基因在4个组织中都有表达,但在垂体中的表达极显著高于其他组织(P<0.01),而且在其他3个组织之间PRL的表达差异并不显著(P>0.05);就巢期鸡PRL基因在垂体中的表达量显著高于产蛋期鸡和恢复期鸡(P<0.05),而在下丘脑、输卵管和卵巢3个组织中3组个体PRL基因的表达量差异不显著(P>0.05);PRL在垂体的表达与种鸡的繁殖性能旱负相关,相关系数为-0.328(P<0.05).     

放养模式下不同鸡种屠宰性能、肉质特性及相关基因表达规律研究

研究以大恒699优质肉鸡和沐川黑鸡为素材,于3个日龄点进行屠宰性能和肉质特性的分析,同时采用RT-PCR法对ADSL基因和H-FABP基因表达量进行测定,分析基因表达规律及其与肉质性状之间的相关性。结果:1屠宰性能:大恒699在120日龄时屠宰率最高,90日龄时胸肌率和腿肌率最佳;沐川黑鸡90日龄时胸肌率、腿肌率偏低,120日龄时屠宰率、胸肌率和腿肌率均较高。2肉质特性:大恒699与沐川黑鸡肌苷酸(IMP)含量均为先降后升的趋势,品种间差异不显著(P0.05)。大恒699肌内脂肪(IMF)含量随日龄增加而增加;沐川黑鸡IMF含量120日龄150日龄90日龄,大恒699 IMF含量略高于沐川黑鸡。3基因表达规律及与肉质性状相关性:大恒699和沐川黑鸡ADSL基因相对表达量90日龄时高于120和150日龄,大恒699差异显著(P0.05)。ADSL基因相对表达量均与IMP含量显著相关(P0.05),基因表达量的增减趋势与IMP含量的变化趋势一致。两个品种H-FABP基因相对表达量日龄间差异不显著(P0.05),90和150日龄H-FABP基因相对表达量与IMF含量显著或极显著负相关(P0.05或P0.01),而120日龄H-FABP基因相对表达量与IMF含量不相关(P0.05)。     

不同日龄苏太仔猪LTβR基因组织表达谱及发育性表达规律分析

试验旨在探讨LTβR基因在仔猪出生至断奶期间的mRNA表达变化,为进一步研究该基因与F18大肠杆菌致病的相关性提供理论依据。本试验选取从初生到断奶的4个日龄(8、18、30和35日龄)苏太仔猪各4头,利用实时荧光定量PCR方法分别比较分析了LTβR基因在各个体11个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肌肉、胸腺、淋巴结、十二指肠及空肠)间的表达规律。结果表明,LTβR基因在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、淋巴结、十二指肠及空肠组织中呈现较高水平的表达,并且表现出明显的发育性表达差异。LTβR基因在8日龄仔猪淋巴、十二指肠和空肠组织中的表达极显著高于其他日龄(P<0.01);在8日龄仔猪肺脏组织中的表达极显著高于35日龄(P<0.01),且显著高于30日龄(P<0.05);在35日龄仔猪肝脏组织中的表达极显著高于其他日龄(P<0.01);在35日龄仔猪胃组织中的表达显著高于18日龄(P<0.05)。由此推测,8日龄左右为仔猪肠道免疫屏障快速形成期,LTβR基因的较高表达可能有利于仔猪对F18大肠杆菌抗性。     

萨福克羊GH和IGF-1基因组织表达水平的分析

为分析生长激素(growth hormone,GH)基因和胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)基因对绵羊生长发育的作用,以6月龄萨福克公羊为试验材料,利用荧光定量PCR SYBR Green I荧光染料法,对绵羊肠系膜淋巴结、心脏、肝脏、垂体、大脑、肾脏、骨骼肌、皮肤、肺脏、睾丸和脾脏11个组织中GH和IGF-1基因的表达水平进行相对定量分析。结果表明,GH基因在睾丸、肠系膜淋巴结和脾脏中的表达量显著高于心脏、肝脏、大脑、肾脏和骨骼肌(P0.05);IGF-1基因在肝脏和肠系膜淋巴结中的表达量显著高于心脏、垂体、大脑、肾脏、骨骼肌、皮肤、肺脏、睾丸和脾脏(P0.05)。说明绵羊GH和IGF-1基因有特定的组织表达模式;GH基因与免疫、繁殖及机体的生长发育密切相关;IGF-1基因与生长发育及免疫密切相关,肝脏不仅是IGF-1的主要合成器官,也是该基因特异性表达的主要器官组织之一。GH和IGF-1基因均具有一因多效作用。     

日粮不同蛋白质水平对绵羊IGF-1和GH分泌及基因表达的影响

本研究旨在探讨不同蛋白质水平日粮对绵羊胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和生长激素(GH)分泌及基因mRNA表达量的影响,为科学配置肉羊饲料及研究肉羊生长发育提供基础。选择6月龄体重相近的多胎萨福克公羔18只,随机分为3组,分别饲喂不同蛋白质水平的日粮(低蛋白日粮、中蛋白日粮和高蛋白日粮)。采用ELISA方法和SYBR Green Real-time PCR方法检测日粮不同蛋白质水平对不同生长发育阶段(30、60、90和120d)羔羊外周血中IGF-1、GH浓度和皮肤组织中基因表达的影响。结果显示,日粮蛋白质水平显著影响绵羊平均日增重、外周血中IGF-1和GH的浓度以及皮肤组织IGF-1基因的表达丰度,而未显著影响GH基因的表达丰度。结果提示,随着日粮蛋白质水平的升高,绵羊生长发育快,外周血中IGF-1浓度增加,GH浓度降低,IGF-1基因表达量增加。     

β-catenin基因在辽宁绒山羊皮肤毛囊中表达的研究

β-catenin是Wnt信号途径中的重要调控因子,对毛囊细胞的生长、分化、运动、凋亡的调节都具有重要的作用。采用荧光定量PCR方法检测45日龄、365日龄、730日龄的辽宁绒山羊皮肤中β-catenin mRNA的表达,分析其在不同日龄辽宁绒山羊皮肤上的表达差异。结果表明:β-连环蛋白在不同年龄辽宁绒山羊皮肤中均有表达。45日龄的β-catenin基因mRNA表达量极显著(P<0.01)地高于365日龄(1周岁)和730日龄(2周岁)的表达量,而365日龄(周岁)与730日龄(2周岁)间β-catenin基因mRNA表达量则差异不显著(P>0.05)。说明β-catenin在绒山羊皮肤毛囊的发育和成熟过程中发挥重要作用。     

载脂蛋白CⅡ基因在猪肝脏组织中的发育性表达研究

试验旨在探究载脂蛋白CⅡ(apolipoprotein Ⅱ,ApoCⅡ)基因mRNA在马身猪和大白猪肝脏组织中的发育性表达规律,揭示ApoCⅡ基因表达水平与猪脂质代谢之间的关系。采用实时荧光定量PCR技术检测了马身猪和大白猪1~180日龄(1、30、60、90、120、150和180日龄)肝脏组织中ApoCⅡ基因mRNA表达。结果表明,马身猪和大白猪肝脏组织ApoCⅡ基因mRNA发育性变化趋势存在差异,马身猪ApoCⅡ表达量从1日龄到60日龄逐渐降低,在90日龄时上升,之后逐渐降低;而大白猪从1日龄到150日龄呈现逐渐降低趋势,180日龄时回升。1日龄时,马身猪和大白猪肝脏中ApoCⅡ基因mRNA的表达量差异不显著(P>0.05),在其他阶段,两品种间的表达量存在显著或极显著差异(P<0.05或 P<0.01)。这表明肝脏中ApoCⅡ mRNA的表达具有显著的日龄依赖性和明显的品种差异性,其表达可能对猪脂质代谢有显著影响。     

新疆巴什拜羊MSTN mRNA在不同月龄发育性变化研究

运用荧光定量PCR技术对不同月龄(0日龄或初生、1月龄、2月龄、3月龄、4月龄、5月龄)新疆巴什拜羊肌肉和脂肪MSTN基因的表达量进行定量,2-ΔΔCT方法分析不同生长阶段MSTN基因表达量的差异,以期获取MSTN基因在不同月龄巴什拜羊的表达规律,同时丰富与肌肉生长相关基因的研究。结果表明:初生、3月龄新疆巴什拜羊肌肉中MSTN基因的表达量极显著低于1、2、4、5月龄(P0.01),1月龄的表达量又极显著高于其他各月龄(P0.01),2月龄显著低于5月龄(P0.05);初生时新疆巴什拜羊脂肪中MSTN基因的表达量极显著低于4月龄和5月龄(P0.01),1月龄MSTN基因的表达量极显著高于2月龄和3月龄(P0.01)、极显著低于4月龄和5月龄(P0.01),5月龄MSTN基因的表达量极显著高于4月龄(P0.01)。表明巴什拜羊肌肉生长发育在初生时较快,在1月龄和2月龄生长发育较慢,3月龄生长发育最快,随后生长发育趋于平稳;脂肪的生长发育在初生后略快于1月龄,2月龄和3月龄的生长发育较快,4月龄较慢,5月龄生长发育慢于其他各月龄。     

油脂类型对肉鸡不同组织甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因相对表达量的影响

本试验旨在探究油脂类型对肉鸡不同组织甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因相对表达量的影响。试验选用240只1日龄的科宝肉鸡母雏,随机分为8个组(4个单一油脂组,分别在饲粮中添加5.00%亚麻油、玉米油、芝麻油和猪油;4个混合油脂组,分别在饲粮中添加2.50%猪油+2.50%玉米油、2.50%猪油+2.50%芝麻油、2.50%亚麻油+2.50%玉米油和2.50%亚麻油+2.50%芝麻油),每组6个重复,每个重复5只鸡。试验期42 d。结果表明:1)组织及油脂类型与组织的交互作用对42日龄肉鸡组织GAPDH基因的相对表达量影响显著(P0.05),油脂类型对42日龄肉鸡组织GAPDH基因的相对表达量的影响不显著(P0.05)。42日龄肉鸡胸肌GAPDH基因的相对表达量显著高于肝脏和腹脂(P0.05),是肝脏的37.50~89.50倍,是腹脂的129.54~190.64倍,而42日龄肉鸡的GAPDH基因的相对表达量在肝脏与腹脂之间差异不显著(P0.05);玉米油组胸肌中GAPDH基因的相对表达量显著高于猪油组(P0.05)。2)21日龄肉鸡肝脏GAPDH基因的相对表达量显著或极显著高于42日龄(P0.05或P0.01)。3)油脂组合及油脂组合与日龄的交互作用对肉鸡肝脏GAPDH基因相对表达量的影响均不显著(P0.05),但日龄对肉鸡肝脏GAPDH基因相对表达量的影响显著(P0.05)。由此可见,油脂类型对肉鸡GAPDH基因的相对表达量的影响呈现组织间的差异,玉米油可提高胸肌GAPDH基因的相对表达量。42日龄肉鸡胸肌GAPDH基因的相对表达量显著高于肝脏和腹脂,21日龄肉鸡肝脏GAPDH基因的相对表达量显著高于42日龄     

五龙鹅GnRH、PRL和FSHβ因多态性与产蛋性状相关研究

本试验对五龙鹅促性腺激素释放激素(GnRH)、催乳素(PRL)和促卵泡激素β亚基(FSHβ)基因进行多态性检测,并分析其与产蛋性状的关系.选产蛋高峰期五龙鹅100只,采取个体圈养方式饲养,记录个体产蛋量.结果显示,FSHβ外显子3存在1个SNP位点产生3种基因型AA、AB、BB,产蛋量呈现AA型＞AB型＞BB型趋势;PRL内含子2上存在1个SNP位点产生3种基因型CC、CD、DD.CC型、CD型、DD型的开产日龄、开产蛋重、平均蛋重之间差异不显著(P＞0.05),CD型、DD型的产蛋总量显著高于CC型(P＜0.05);GnRH基因5′端调控区存在1个SNP位点产生2种基因型EE、EF型,EF型的开产日龄、开产蛋重、平均蛋重都要高于EE型,但是二者之间差异不显著(P＞0.05),EE型的产蛋总量显著高于EF型(P＜0.05).     

猪皮下脂肪组织的生长发育研究

脂肪沉积是动物体内能量贮存的主要方式,是猪重要的经济性状,其生长发育状况决定了猪的生长速率。本实验选取出生后0、30、180 d和7年的金华母猪皮下脂肪组织作为研究对象,测定了脂肪细胞体积、血清代谢指标、脂肪代谢基因的表达量和脂肪细胞线粒体DNA拷贝数。结果表明:在出生后0d到7年的生长发育过程中,脂肪细胞体积呈现极显著增长(P0.01);血清代谢指标发生了显著变化(P0.05);脂肪代谢基因的表达量呈现显著差异(P0.05),在180 d时脂肪合成基因的表达量最高,而脂肪分解基因的表达量最低;脂肪细胞线粒体DNA拷贝数呈现极显著增长(P0.01)。本研究旨在为脂肪组织的生长发育提供基础理论数据,以期进行更深入的研究。     

电穿孔法转移GHRH(1-32)质粒在仔猪肌肉中表达对生产性能的影响

采用pcDNA3.0-GHRH(1-32)质粒,对断奶仔猪肌肉单次注射后电穿孔处理,观察对猪生产性能的影响。采用碱变性法提取pcDNA3.0-GHRH(1-32)质粒并定量。选取32日龄仔猪60头,公母各半,分别注射0(生理盐水)、1.0mg GHRH表达质粒,然后用电穿孔仪电击处理。结果表明,与对照组相比,试验组猪32日龄初始平均体质量无差异(P0.05),公猪67和98日龄平均体质量分别显著增加26.71%(P0.05)和21.31%(P0.05),而母猪呈增加趋势但差异不显著(P0.05);公猪32~67日龄日增重显著增加47.93%(P0.05),而母猪呈增加趋势但差异不显著(P0.05);试验组淘汰率降低20.04%,其中公猪淘汰率降低33.50%;试验组猪80、150和180日龄血清GHRH浓度分别显著增加13.64%(P0.05)、15.82%(P0.05)和11.36%(P0.05),血清中IGF-1浓度分别增加26.70%(P0.05)、4.31%(P0.05)和6.04%(P0.05),且母猪血清浓度增幅高于公猪;血清中其余激素(T3、T4、IL-2、IL-6)和IgG浓度也呈上升趋势等。本试验表明GHRH(1-32)表达质粒可提高猪生产性能。     

转pGH IGF-1基因对猪生长和繁殖性能的影响

为了解转双基因在猪生长发育中作用及意义,选取23头健康仔猪,其中转p GH、IGF-1双基因猪4头,转p GH基因猪12头,非转基因猪7头,研究p GH、IGF-1基因对猪生长和繁殖性能的影响。结果表明,转p GH、IGF-1双基因猪个体均重比转p GH单基因猪高2.83%,差异显著(P0.05);转双基因猪比非转基因猪高7.37%,差异显著(P0.05)。转双基因猪体重达100 kg的日龄比转单基因猪少8.93 d,差异显著(P0.05),转双基因猪比非转基因猪少12.23 d,差异显著(P0.05),转单基因猪比非转基因猪少3.30 d,差异不显著(P0.05);转双基因公猪的精液量,分别比转p GH单基因公猪与非转基因公猪提高27.61%、18.31%,差异均显著(P0.05);精子密度,三者之间差异均不显著(P0.05);转双基因公猪与非转基因猪的精子活力之间差异不显著(P0.05);转单基因公猪畸形率分别比转双基因公猪、非转基因猪高23%、18%,差异均显著(P0.05)。为进一步分析p GH-IGF-1生长轴对家猪生产性能的具体影响提供参考依据,也为转基因技术的推广与应用提供有力依据。     

脂肪酸合成酶基因mRNA在马身猪和大白猪3种组织中的发育性表达研究

为探究脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)基因在猪不同组织中的发育性表达规律,本研究采用实时荧光定量PCR技术检测马身猪和大白猪7个阶段(初生、30、60、90、120、150和180日龄)肝脏、背最长肌和背部皮下脂肪3种组织中FAS基因mRNA的相对表达量。结果表明,品种间比较,FAS基因mRNA在马身猪和大白猪肝脏、背最长肌和背部皮下脂肪组织各生长发育阶段中的表达差异均达到显著或极显著(除肝脏组织初生阶段和背部皮下脂肪组织120日龄阶段)(P<0.05;P<0.01)。FAS基因mRNA在大白猪组织间的表达差异与生长发育相关,150和180日龄阶段,背部皮下脂肪组织中表达量极显著高于肝脏和背最长肌组织(P<0.01),初生、30日龄和90日龄阶段,背最长肌中的表达量极显著高于肝脏和背部皮下脂肪组织(初生阶段无脂肪组织样)(P<0.01);而马身猪整个发育过程中,背最长肌组织表现为优势组织,极显著高于其他2种组织(除120日龄阶段外)(P<0.01),脂肪组织表达量次之,肝脏组织中表达量较少。品种、日龄、组织及品种与日龄、组织与日龄的互作效应对FAS基因mRNA的相对表达量均有极显著影响(P<0.01)。FAS基因直接参与脂肪酸的合成,对猪肉质性状的遗传改良具有重要意义。