三氯生对雌性黄河鲤激素效应及其机制的研究

为了探讨三氯生(TCS)对雌性鱼类性激素的影响及其机制。通过半静态水质接触染毒法对雌性黄河鲤进行染毒,设置对照组和三个不同浓度组(0.04 mg/L、0.08 mg/L、0.16 mg/L)的TCS处理组,采用酶联免疫(ELISA)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组雌性黄河鲤血清睾酮(T)和雌二醇(E₂)的分泌水平及其卵巢中促性腺激素释放激素(CGnRH-ii-2)和雌激素受体(Er)的mRNA表达水平。结果显示：各浓度组的T水平无显著性差异(P>0.01),而0.16 mg/L的TCS能使黄河鲤血清中的E₂含量及E2/T显著性升高(P<0.05, P<0.01)；TCS各浓度组卵巢中CGnRH-ii-2 mRNA水平显著下降(P<0.01),而0.08和0.16mg/L的TCS处理组Er mRNA水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。结果表明：TCS具有潜在雌激素效应,其机制与雌激素受体和促性腺激素释放激素基因表达调控相关。     

黄芩素对鲤肝细胞及肝胰脏组织CAT、GST和MDA水平影响的初步研究

采用处理离体培养的细胞和对鱼灌服方法分别研究了黄芩素对鲤(Cyprinus carpio)肝细胞以及肝胰脏过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)、丙二醛(MDA)的影响。结果显示:黄芩素处理2h后,鲤肝细胞GST活性显著高于对照组(P<0.05),8h时细胞CAT活性极显著高于对照组(P<0.01);灌服黄芩素后,32h时,鲤肝胰脏CAT活性显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,黄芩素可以有效地提高鲤抗氧化酶GST和CAT的活性。     

Pb~(2+)对建鲤幼鱼抗氧化酶活性和总抗氧化能力的影响

为了解铅对建鲤幼鱼(Cyprinus carpio var.Jian)的影响,将建鲤幼鱼暴露于不同水平(0、0.648、1.296、6.480 mg/L)的Pb2+水溶液中,于96 h分别测定建鲤幼鱼肝胰脏、肠、鳃、肌肉中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及总抗氧化能力(T-AOC)。结果表明:随着Pb2+浓度的升高,抗氧化酶活性升高,达到极值后下降。0.648 mg/L浓度组中,肝胰脏中抗氧化酶活性及总抗氧化能力均有较明显升高;肌肉中抗氧化酶活性及总抗氧化能力变化较小;在高浓度组(6.480 mg/L),肾中的三种抗氧化酶活性及总抗氧化能力仍在升高,而在其他组织中酶的活性有所降低。上述研究结果表明,与肠、鳃、肌肉、肾相比,肝胰脏中的抗氧化酶活性及总抗氧化能力敏感,是最先启用的主要解毒器官;在高浓度胁迫时,肝胰脏解毒能力下降,抗氧化防御作用的主要器官由肝胰脏转移到肾脏。     

兴国红鲤AR基因的鉴定及MT暴露对幼鱼肝中AR和vtg表达的影响

实验克隆了兴国红鲤(Cyprinus carpio var singuonensis)雄激素受体(androgen receptor,AR)基因的全长c DNA序列和卵黄蛋白原(vitellogenin,vtg)基因的部分c DNA序列,并对雌性个体组织及甲基睾丸酮(Methyltestosterone,MT)暴露下幼鱼肝胰腺(以下简称:肝)中AR和vtg的表达进行检测。兴国红鲤AR基因c DNA全长3 229 bp,包括104 bp的5'非编码区(untranslation region,UTR)、编码846个氨基酸的2 541 bp开放阅读框(open reading frame,ORF)和485 bp 3'UTR。氨基酸序列同源性分析表明,兴国红鲤AR与其他鲤科鱼类AR的同源性较高。组织表达特征研究表明,AR在雌性个体的肝、卵巢、中肾、肌肉和端脑中有表达,其中肝中的表达量最高;vtg主要在肝、端脑和鳃中表达。兴国红鲤幼鱼在50μg/L的MT中暴露4周后,采用qRT-PCR检测了肝中AR和vtg的表达情况。在处理第1、2周,AR的表达受到一定的抑制,而在第3、4周其表达量升高,但其表达无显著性变化;而vtg的表达量在第3、4周均有极显著的升高。     

鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备

从鲤(Cyprinus carpio)肝脏总RNA中成功地克隆和诱导表达了胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因,并用间接ELISA法和Western-blot对其融合蛋白的多克隆抗体的效价和特异性进行了分析。结果表明,克隆的鲤IGF-Ⅱ基因与已报道的序列相比,有1个位点发生同义突变;经SDS-PAGE电泳分析,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,表达量占菌体总量的35%。经ELISA测定,制备的抗体效价为6400。Western blot分析表明,抗血清能与重组蛋白发生特异性反应     

铜在鲤体内的蓄积及毒性的研究

采用半静态法将鲤(Cyprinus carpio)暴露于不同浓度的铜溶液中,研究了铜在鱼体中的吸收富集及毒性。结果表明:铜在鲤肝、肾、鳃和肌肉中的积累量均随着铜浓度的升高而增加。鲤各部位对铜的蓄积能力依次是肝、肾、鳃、肌肉,且肝、肾中铜的积累量明显高于鳃和肌肉,鲤对铜具有较强的蓄积毒性。中毒鱼体色变黑,生长受到抑制,临死前出现神经症状;鳃小片上皮增生、变性、坏死;肝细胞和肾小管上皮细胞空泡变性、溶解性坏死。     

高糖饲料中添加沙棘粉对黄河鲤生长性能、抗氧化能力和非特异性免疫的影响

为研究沙棘粉对黄河鲤生长性能、抗氧化能力和非特异性免疫的影响，实验选用初始体重约为7.55 g的黄河鲤450尾，随机分为5组，即对照组(control组)、高糖组(HG组)、高糖+0.1%沙棘粉组(G-LSP组)、高糖+0.3%沙棘粉组(G-MSP组)和高糖+0.5%沙棘粉组(G-HSP组)，开展为期10周的养殖实验。结果显示，与高糖组相比，G-HSP组黄河鲤的增重率(WGR)显著提高。与对照组相比，高糖组黄河鲤血清和肝胰脏中丙二醛(MDA)含量升高，过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(TAOC)降低，而补充沙棘粉可减轻这些负面影响。高糖饲料抑制了肝胰脏和肌肉中nrf2mRNA的表达水平，上调了keap1 mRNA的表达水平。沙棘粉对高糖引起的nrf2 mRNA表达水平的降低和keap1 mRNA表达水平的升高有显著的抑制作用。沙棘粉可显著提高受Nrf2调控的下游转录因子(gr、cat、gpx和sod)的mRNA表达水平。此外，添加0.5%的沙棘粉能显著提高血清、脾脏和肠道中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)活性和白蛋白(Alb)...     

三氯生对黄河鲤幼鱼性腺发育分化相关基因表达的影响

采用半静态水体暴露法，将黄河鲤幼鱼暴露于0（对照）、0.04 mg/L, 0.08 mg/L, 0.16 mg/L的三氯生（TCS）溶液中42 d，利用RT-qPCR技术检测黄河鲤性腺发育分化相关基因表达情况。结果显示：雄鱼精巢中，dax1和sox9a基因在0.04 mg/L和0.08 mg/L TCS处理组中显著上调（P<0.01）；sox9b、dmrt1和foxl2基因在0.08 mg/L TCS处理组中显著上调（P<0.05，P<0.01）；nobox基因在0.04 mg/L和0.08 mg/LTCS处理组显著下调（P<0.05，P<0.01）；zp2基因在各TCS处理组显著上调（P<0.05，P<0.01）；ar和amh基因在各TCS处理组显著下调（P<0.05，P<0.01）。雌鱼卵巢中，sox9b基因在0.04 mg/L和0.08 mg/L TCS处理组显著上调（P<0.01）；sox9a和dax1基因在0.04 mg/LTCS处理组显著上调（P<0.05，P<0.01）；zp2基因在TCS处理组显著下调（P<0.05，P<0.01）；foxl2基因在0.04 mg/LTCS处理组显著下调（P<0.05），nobox基因在0.16 mg/L TCS处理组显著下调（P<0.05）。以上研究结果表明：TCS影响了黄河鲤幼鱼性腺发育分化相关基因的表达，可能进一步影响其生殖腺的发育分化。     

亚硝酸盐中毒鲤的血液和组织病理学研究

选取120尾体重为(5.0±0.058)g鲤(Cyprinus carpio)鱼种,观察鲤亚硝酸盐氮中毒后的症状和死亡情况,测定各浓度组中毒鲤的红细胞数量(RBC)和血红蛋白(Hb)含量,并对中毒死亡鲤进行组织病理学研究。结果显示:亚硝酸盐氮(NO2-N)对鲤48、96 h的半数致死浓度(LC50)分别为12.6895 mg/L和9.3111 mg/L;安全浓度为0.8308 mg/L。亚硝态氮的浓度和血细胞数量呈负相关性,而与血红蛋白的含量不相关。高浓度的亚硝酸盐使得试验鱼的鳃和肝胰脏组织产生异常变化,出现血管扩张,充血或淤血以及细胞变性等一系列的组织病理学变化;而低浓度组的组织发生的变化不明显。     

养殖水体邻苯二甲酸二乙酯暴露对凡纳滨对虾壳膜几丁质酶的影响

邻苯二甲酸二乙酯(DEP)是常用的塑化剂,也是环境广泛存在的内分泌干扰物。采用酶促反应动力学法及实时荧光定量PCR检测分析养殖水体DEP暴露对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)壳膜几丁质酶的比活力和酶系列基因mRNA表达量的影响。结果显示不同浓度组的DEP暴露对壳膜几丁质酶比活力的影响不具有显著性;10μg/L DEP暴露120 h后,对虾壳膜几丁质酶系的LV-CHT2、LV-CHT3、LV-CHT7等三个基因的mRNA表达量均被显著抑制,但随着暴露时间延长,这种显著性差异转化成非显著性;而20μg/L DEP胁迫对LVCHT2、LV-CHT3、LV-CHT7等三个基因的mRNA表达量没有显著性影响,不同浓度组的DEP暴露不同时间后对LV-CHT5、LV-CHT6两个基因的mRNA表达量也均不具有显著性影响。     

三氯生对斑马鱼卵巢抗氧化和凋亡相关基因表达的影响

为了探讨三氯生(TCS)对硬骨鱼类性腺损伤作用的分子机制,通过半静态水体暴露法对斑马鱼(Danio rerio)进行染毒,将斑马鱼暴露在2种不同TCS浓度(0.034 mg/L和0.068 mg/L)溶液中,同时设置空白对照组,42 d后,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,探究TCS对斑马鱼卵巢抗氧化及凋亡相关基因表达的影响。结果发现:与空白对照相比,SOD、CAT和GPx1a基因在0.068 mg/L TCS处理组表达水平显著下调,GPx1和MT-2基因在0.034 mg/L浓度组表达显著上调;Bcl-2基因在0.068 mg/L浓度组表达显著下调,p53基因在0.034 mg/L浓度组表达极显著上调,Bax在TCS处理组中均显著上调。以上研究结果表明:较高浓度TCS显著影响了斑马鱼卵巢抗氧化和凋亡相关基因的表达,从而产生了氧化损伤和加速细胞凋亡的发生。     

三氯生对红白鲫运动行为的影响

利用视频跟踪系统研究三氯生(TCS)对红白鲫运动行为的影响。将红白鲫(red-white crucian carp)暴露在5种不同浓度的TCS(0.50、0.60、0.70、0.80和0.90 mg/L)水体中,视频记录5 min内红白鲫的运动轨迹(运动轨迹线、摆动次数)、游动速度和垂直穿梭次数的变化。同时,进行TCS(0.60、0.69 mg/L)对红白鲫的14 d暴露实验,暴露实验结束后,2 min内监测上述指标。结果显示:短期TCS暴露,红白鲫的运动轨迹条数、摆动次数、垂直穿梭次数、运动速率显著增加;暴露14 d后的红白鲫上述运动行为学指标显著降低。结果表明:在一定浓度范围内,TCS能够改变红白鲫的运动行为。     

GH/IGF-Ⅰ轴对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢发育的调控作用

为深入认识半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生殖调控机制,研究了生长轴(GH/IGF-Ⅰ axis)对半滑舌鳎卵巢发育调控的作用及可能机制;分析了卵巢不同发育时期垂体中的生长激素(GH),脑、性腺和肝脏中的类胰岛素生长因子Ⅰ (IGF-Ⅰ)mRNA的表达水平变化;检测了卵巢不同发育期,血清GH、IGF-Ⅰ、雌二醇(E2)、睾酮(T)的表达水平变化,并分析了生长因子与性腺指数(GSI)、E2和T表达变化的关系.结果显示,垂体GH mRNA表达水平在Ⅳ期卵巢时显著升高,至Ⅴ期时达峰值,随后(Ⅵ期)显著降低,垂体GH mRNA表达水平与GSI、血清GH与IGF-Ⅰ表达水平呈显著正相关.血清GH与垂体GHmRNA表达水平表现出相似的变化趋势.肝脏IGF-ⅠmRNA表达水平在Ⅳ期和Ⅴ期卵巢时较低,但Ⅵ期时又显著升高,其与脑IGF-Ⅰ mRNA及血清IGF-Ⅰ表达水平呈显著正相关,而与血清E2和T表达水平呈显著负相关.脑IGF-Ⅰ mRNA表达水平自Ⅱ期卵巢开始显著升高,至Ⅳ期时达峰值,并与血清IGF-Ⅰ表达水平呈显著负相关.卵巢IGF-ⅠmRNA表达水平自Ⅱ期开始显著升高,并在Ⅳ期时达峰值,但在Ⅴ期时明显下降,并保持至Ⅵ期,与血清E2表达水平呈显著正相关,而与血清IGF-Ⅰ表达水平呈显著负相关.血清IGF-Ⅰ变化趋势与肝脏IGF-ⅠmRNA相似.结果揭示了GH、IGF-Ⅰ在转录和血清水平上以协同或者拮抗的方式共同参与了半滑舌鳎卵巢发育的过程,其作用途径可能与性类固醇激素的合成与分泌有关,表明GH/IGF-Ⅰ轴对卵巢发育具有重要的调控作用,为深入认识半滑舌鳎卵巢发育的调控机制提供了新的思路和素材.     

Effects of dietary reduced glutathione on the growth and antioxidant capacity of juvenile Atlantic salmon (Salmo salar)

To investigate the effects of dietary reduced glutathione (GSH) on the growth performance and antioxidant capacity of juvenile Atlantic salmon (Salmo salar), 396 juvenile fish with initial body weight of 143.07 ± 6.56 g were randomly distributed into four groups fed four diets with graded supplementation levels of GSH (0, 100, 200 and 400 mg/kg diet) for 83 days. The results showed that the appropriate GSH supplementation (100 and 200 mg/kg diet) significantly increased the growth performance, activities and gene mRNA expression levels of glutathione peroxidase (GPx) and glutathione transferase (GST), and the content of GSH and total antioxidant capacity (TAOC), whereas it significantly decreased activities and gene mRNA expression levels of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), and the content of malondialdehyde (MDA; p < 0.05). However, the excess dietary GSH (400 mg/kg diet) had an adverse effect on the all above indexes. Interestingly, the dietary GSH had the opposite effect on GSH‐related antioxidant enzymes (GPx and GST) and other antioxidant enzymes (SOD and CAT). The results showed that the diet with 200 mg/kg GSH supplementation was optimal for the juvenile Atlantic salmon, which had a measured GSH content of 209.54 mg/kg.     

饥饿和再投喂期间尼罗罗非鱼生长、血清生化指标和肝胰脏生长激素、类胰岛素生长因子-Ⅰ和胰岛素mRNA表达丰度的变化

在室内可控条件下,对尼罗罗非鱼[初始体质量(62.50±3.44)g]进行饥饿28d和随后再投喂21d的处理,于饥饿第0、7、14、21、28天和再投喂第14、21天进行采样分析,研究饥饿和再投喂期间尼罗罗非鱼生长、血清生化指标和肝胰脏生长激素(GH)、类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和胰岛素(IN)mRNA表达丰度的变化。结果显示,与饥饿第0天相比,饥饿超过7d鱼体体质量显著降低(P<0.05),再投喂21d显著增加(P<0.05);肝体比随饥饿时间延长显著降低(P<0.05),恢复投喂后较饥饿时升高,但显著低于饥饿前水平(P<0.05)。在血清指标上,甘油三酯、血糖、碱性磷酸酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶均随饥饿时间延长而逐渐降低,恢复投喂后均有不同程度提高,但转氨酶活性显著低于饥饿前水平(P<0.05);饥饿和再投喂对血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇无显著影响(P>0.05)。在激素方面,与饥饿第0天相比,饥饿使血清GH含量及其肝胰脏mRNA表达丰度显著升高,血清IGF-Ⅰ及其肝胰脏mRNA表达丰度降低,恢复投喂后两者均显著升高(P<0.05);INmRNA表达丰度在饥饿7~21d显著升高(P<0.05),饥饿第28天时无显著差异(P>0.05),再投喂后显著降低(P<0.05)。     

用IGF—ⅠmRNA表达量评价鲮饲料配方效果的研究

试验以秘鲁鱼粉为饲料蛋白源，研究4种蛋白水平（21．5％、32．2％、42．5％和51．6％）的饲料对鲮（Cirrhinus molitorella）生长、消化酶活性及类胰岛素生长因子（IGF—Ⅰ）mRNA表达水平的影响。经过8周的养殖试验，不同饲料蛋白水平下，蛋白酶活性与特定生长率（SGR）成极显著的正相关性（P〈0．01）；鲮肝组织中IGF—ⅠmRNA的表达量与特定生长率成极显著正相关性（P〈0．01）；鲮肝组织IGF—ⅠmRNA的表达量与蛋白酶活性也成极显著正相关性（P〈0．01）。结果表明，用鲮肝组织IGF—ⅠmRNA的表达量可以快速鉴定饲料的质量。     

Effects of ammonia exposure on stress and immune response in juvenile turbot (Scophthalmus maximus)

The aim of this study was to investigate the effects of ammonia exposure on stress and immune response in turbot. The species was exposed to five total ammonia nitrogen (TAN) concentrations: 0 (control), 1, 5, 20 and 40 mg L^?1 for 96 h. After 0, 24, 48 and 96 h of exposure, blood samples were collected to measure the levels of corticotropin‐releasing hormone (CRH), adrenocorticotropic hormone (ACTH), cortisol, growth hormone (GH), lysozyme (LZM), complement 3 (C3), complement 4 (C4) and immunoglobulinM (IgM); liver samples were taken to analyse oxidative stress parameters (superoxide dismutase, SOD; catalase, CAT; glutathione, GSH; malondialdehyde, MDA), and gene expression of heat shock proteins (HSP 70 and HSP 90) and insulin‐like growth factor‐1 (IGF‐1). The results showed that exposure to higher concentrations of TAN (20 and/or 40 mg L^?1) enhanced the levels of CRH, ACTH and cortisol and attenuated the levels of GH, LZM, C3, C4 and IgM in plasma of turbot after 48 and 96 h. In liver, TAN (20 and/or 40 mg L^?1) apparently increased the activities of antioxidative enzymes (SOD and CAT), mRNA levels of HSP (HSP 70 and 90) and formation of MDA, decreased the content of GSH and mRNA levels of IGF‐1 after 48 and 96 h of exposure. Overall, our results suggested that high ammonia exposure caused activation of hypothalamic–pituitary–interrenal axis, inhibition of GH/IGF axis and immunity, and occurrence of oxidative stress.     

Change in blood stress and antioxidant markers and hydromineral balance of common carp (Cyprinus carpio) anaesthetized with citronellal and linalool: Comparison with eugenol

The present study aimed to investigate the effects of anaesthesia with citronellal and linalool on stress, antioxidant and hydromineral responses of common carp. Eugenol was used as control anaesthetic, as it is a common anaesthetic in aquaculture. The fish (110 ± 5.65 g) were exposed to 406 mg/L citronellal, 982 mg/L linalool or 43 mg/L eugenol within 5 min (short‐term anaesthesia) or 10 and 20 mg/L of each anaesthetic for 3 hr (long‐term exposure), before blood sampling. The results showed that the short‐term anaesthesia had no significant effects on plasma lactate, sodium, chloride and phosphorus levels and blood catalase (CAT) and superoxide dismutase activities. The short‐term anaesthesia with linalool led to higher stress responses (increased cortisol and glucose levels) and oxidative stress (increased malondialdehyde [MDA] level and decreased total antioxidant capacity [TAC] and glutathione peroxidase [GPx] activity) compared to the eugenol and citronellal. Citronellal group had significantly higher cortisol and lower TAC level and GPx activity compared to eugenol group. Under the long‐term exposure, increase in anaesthetic concentration led to significant increase in plasma cortisol, glucose and phosphorus levels. The linalool‐treated fish had significantly higher cortisol and MDA levels compared to the other groups. The eugenol group had significantly higher lactate and phosphorus and lower TAC levels compared to the other groups. Although citronellal causes slight increase in plasma cortisol level, it induces lower tissue damages compared to eugenol. Thus, citronellal might be an alternative anaesthetic for carp anaesthesia based on the present tested parameters.     

辛基酚对鲤的雌激素效应

研究了辛基酚对鲤的雌激素效应。经10、50、100、300和500μg/L辛基酚暴露32d后,鲤存活率和肥满度与对照组无差异;性腺指数变化明显,雌鱼性腺指数随暴露剂量的增大而增大,雄鱼性腺指数随暴露剂量的增大而减小;50μg/L及以上暴露组与对照组差异显著(P<0.05)。辛基酚能诱导鲤雄鱼产生卵黄蛋白原,暴露剂量为10μg/L组有部分雄鱼肝脏匀浆和血液中检出卵黄蛋白原,50、100和300μg/L组卵黄蛋白原含量随辛基酚浓度的增大而显著增大,500μg/L组卵黄蛋白原含量低于300μg/L组、高于100μg/L组,均为极显著差异(P<0.01)。