我国对噬菌蛭弧菌的研究（四）

2.3蛭弧菌对伤寒沙门菌的裂解作用蛭弧菌Bd81、Bd98对206株（江苏省地方菌201株,标准菌5株）伤寒沙门菌有显著的裂解作用,在自来水双层琼脂平板上,大多数可以形成清晰透明的噬菌斑,裂解强度不完全一致。Bd81裂解率为96.6%,Bd98裂解率为99.02%。     

3株噬菌蛭弧菌裂解特性及在水体中的应用研究

对从海水中分离的3株噬菌蛭弧菌Blb-1、Blb-2、Blb-3在不同条件下的裂解特性进行了初步研究,并进行了Blb-2裂解水体哈维氏弧菌的应用试验。结果表明,3株菌在盐度为0~30时均能良好生长,具有广盐性;3株菌对灭活后的宿主菌具有更强的裂解作用,形成噬菌斑的时间普遍提前,且噬菌斑较大;3株蛭弧菌的裂菌谱试验以及不同蛭弧菌菌龄的裂解效果试验表明,3株菌对气单胞菌属和弧菌属细菌均有很好的裂解能力,而对水产益生菌芽孢杆菌、乳酸菌等裂解能力很弱;应用试验表明,噬菌蛭弧菌对水体中的哈维氏弧菌具有较强的的清除能力。     

蛭弧菌裂解作用的初步研究

蛭弧菌是一种寄生性细菌．广泛分布干土壤及各种水域之中．对诸多革兰氏阴性菌尤其是水产动物病厚菌具有吞噬裂解活性。本文选取七株细菌为宿主菌．对蛭弧菌的裂解作用进行了初步研究。结果表明：除金黄色葡萄球菌外，蛭弧菌对其他六株菌均具有不同程度的裂解活性．其中以对红色假单胞菌的裂解能力更强。     

海洋蛭弧菌LBd02-1的分离及其生物学特性的研究

利用海水双层平板法分离获得蛭弧菌LBd02-1,从基因水平上进行鉴定,并对其生物学特性进行了初步研究。研究结果表明,蛭弧菌LBd02-1对嗜水气单胞菌、鳗弧菌、大肠杆菌和霍乱弧菌等革兰氏阴性菌有较好的裂解作用;对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌的裂解能力较弱。以鳗弧菌为宿主菌,探索了不同条件(温度、盐度、Ca2+、Mg2+)下蛭弧菌LBd02-1对鳗弧菌的裂解效果。试验结果表明,蛭弧菌LBd02-1在温度为25~30℃.盐度为10~30时,对鳗弧菌的裂解效果较佳;在Ca2+浓度为5~10 mmol/L、Mg2+浓度为0.5~2 mmol/L时,蛭弧菌LBd02-1的裂解能力也较好。     

九孔鲍消化道及养殖水体中弧菌胞外毒力因子的分析

从汕尾健生鲍鱼养殖场成鲍养殖水体和消化道中分离筛选到22株弧菌,其中14株来自成鲍消化道,8株来自养殖水体。本文对这两种不同来源的菌株进行了致病因子(胞外酶及溶血毒素)的分析比较,同时采用API条带法对其进行了种类鉴定。结果发现,消化道中除1株溶藻弧菌和3株最小弧菌外,其余均为河流弧菌;而水体中除副溶血弧菌和创伤弧菌各1株外,其他也均为河流弧菌。实验还发现,在5株胞外酶分泌能力最强的弧菌中,只有Sh031株是副溶血弧菌,另外4株(Bh14、Sh02、Sh08、Sh05)均为的河流弧菌。结果显示,无论是养殖水体还是消化道,河流弧菌都应视为一种海水养殖贝类(鲍)的主要条件致病菌,是能力较强的胞外致病因子生产者。     

一株海洋蛭弧菌的裂解谱和盐度耐受性分析

近年来,由弧菌导致的水产动物病害频繁发生,弧菌病害已成为海水养殖病害最重要的防治对象之一。蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)是一类专门以捕食细菌为生的寄生性细菌,由于它具有寄生和裂解许多鱼类和水体致病性细菌的作用,在生物预防弧菌方面日益显出其优越性。水产用噬菌蛭弧菌优良菌种的筛选获得是其后续研究开发与应用的重要保障,基于此,本实验对本实验室保存的一株海洋蛭弧菌BD-zr-11(分离自海水养殖池)进行了裂解谱分析和盐度耐受性分析,旨在为该菌株在海水养殖中的潜在应用提供一定科学依据和数据支撑。     

噬菌蛭弧菌预防对虾弧菌感染的应用研究

采用16S rDNA特异引物对63F和842R对蛭弧菌标准菌株Bdellovi briobacteriovorus 109-J和实验菌株Bd-9913进行了PCR鉴定，使用Bd-9913菌株分别对3株虾类病原菌溶藻弧菌Vibrio alginolysticus LS01、HF09，副溶血弧菌V．parahaemolyticus V28以及1株大肠埃希氏菌Escherichia coli CH-42进行裂解。结果表明，10^5PFU／ml的Bd-9913对于10^9CFU／ml的宿主菌具有较好的裂解效果。采用3．0×10^5PFu／mlBd109-J和Bd-9913分别与饲料混合（v／w）后投喂3．0g左右的凡纳滨对虾幼虾，14d内未发现对虾异常，且在对虾肠道内检测不到Bd109-J及Bd-9913，证明二者对于凡纳滨对虾幼虾是安全的。对正常养殖了50d的室外集约化虾池水体分别泼洒终浓度0．3mg／L的二氯异氰脲酸、0．3mg／L季胺盐络合碘和3．0×10^5PFU／ml蛭弧菌，后者对于抑制水体弧菌活菌浓度的效果明显优于化学消毒剂。当每隔20d左右分别进行一次上述水体处理，通过比较体内弧菌感染的对虾个体数，发现从肝胰腺分离到弧菌的对虾数量二者无显著差异，但从血淋巴分离到弧菌的对虾数量，蛭弧菌处理组显著少于化学消毒剂处理组，显示了蛭弧菌在预防对虾弧菌感染方面的优越性。     

鳗鲡肠道蛭弧菌的分离及其对水产动物细菌性疾病的预防作用研究

以多发性水产动物疾病的病原菌嗜水气单胞菌为宿主，从鳗鲡肠道中分离到一株噬菌力较强的蛭弧菌，命名为Bdm4。通过光学显微镜、相差显微镜和电子显微镜对蛭弧菌Bdm4进行革兰氏染色观察显示，蛭弧菌Bdm4为短杆状和长杆状的革兰氏阴性细菌，其大小约为0．3—0．4μm×1．2～1．5μm；菌有单根的极生长鞭毛。Bdm4对试验所选取的多种海淡水致病菌均有较强的裂解能力，而对所选用的益生菌则不能裂解；且其在鱼体表、鳃和肠道中能有效地消减致病菌，抑制致病菌的繁殖，同时有利于肠道乳酸杆菌数量的增长。     

霍乱弧菌SWBC—a为靶细菌筛选宽裂解弧菌噬菌体

以舟山赤潮海水为样品,以SWBC-a为靶细菌,分离出4株噬菌体,检测了噬菌体的效价、RTD值、对26株弧菌(副溶血孤菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌)的裂解范围,其中SWBC-a-3能裂解3株弧菌,裂解范围较宽,而且显示出跨种属裂解的能力,对这株噬菌体进行了初步的生物学特性研究,包括电镜下的形态,pH值稳定性和热稳定性,钙、镁离子对噬菌体吸附的影响.这2株噬菌体对弧菌的裂解能力较强,有潜在的实用价值.     

蛭弧菌及其在水产养殖动物疾病防治中的应用(连载一)

蛭弧菌是寄生在某些细菌并导致其裂解的一类细菌,最早是由德国的Stolp在土壤中发现的。蛭弧菌的生物学名称为噬菌蛭弧菌。蛭弧菌是一类专门捕食细菌的寄生性细菌,具有独特的裂解细菌的生物学特性,能够在较短的时间内裂解水体中的沙门氏菌属、志贺氏菌属、埃希氏菌属、假单胞菌属、欧文氏菌属、弧菌属等属的种类,可将致病菌限制在较低水平上,同时,还可有效地控制养殖水体的COD、硫化物和氨氮存留量。     

蛭弧茵裂解作用的初步研究

蛭弧菌是一种寄生性细菌,广泛分布干土壤及备种水域之中,对诸多革兰氏阴性菌尤其是水产动物病原菌具有吞噬裂解活性.本文选取七株细菌为宿主菌,对蛭弧菌的裂解作用进行了初步研究.结果表明:除金黄色葡萄球菌外.蛭弧菌对其他六株菌均具有不同程度的裂解活性,其中以对红色假单胞菌的裂解能力更强.     

蛭弧菌的生物学特性及其在刺参养殖中的应用前景

蛭弧菌是一种以捕食细菌为生的寄生性细菌，对诸多水产动物病原菌具有吞噬和裂解作用。蛭弧菌能够预防水产动物的细菌性疾病、改善养殖环境以及增强水产动物机体免疫力。养殖刺参的疾病以细菌性病害为主，利用蛭弧菌可以预防刺参疾病的发生。关键词蛭弧菌水产养殖刺参应用前景     

Glycosphingolipid receptors for pathogenic vibrios in intestines of mariculture fish

Vibrios are highly motile, facultatively anaerobic bacteria that are ubiquitous in aquatic environments and part of the normal intestinal microflora of healthy fish, but some species can cause vibriosis. The adherence of vibrios to host fish intestines is a significant event not only for their survival and growth, but also in terms of pathogenicity. However, the molecular mechanism underlying the adhesion of vibrios to the intestinal tract of fish is not fully understood. We report here the identification of intestinal glycosphingolipid (GSL) receptors to which pathogenic vibrios attach in typical mariculture fish. Thin-layer chromatography overlay assays using five species of ³⁵S-labeled vibrios and intestinal glycosphingolipids of seven species of mariculture fish revealed that all of the fish tested possessed GM3 (NeuAcα2-3Galβ1-4Glcβ1-1′Cer) and/or GM4 (NeuAcα2-3Galβ1-1′Cer) as major acidic intestinal GSLs and that all of the vibrios tested specifically adhered to GM3 and/or GM4. Our results demonstrate that these GSLs were able to function as a receptor for the various vibrios tested. Analysis of the relationship between sugar structure and receptor activity for vibrios revealed that ‘NeuAcα2-3Galβ1-’ is required at the non-reducing end of glycosphingolipids for the bacteria to attach.     

杂色鲍养殖环境中致病性弧菌分布调查

从深圳不同的杂色鲍人工养殖场采集并分类环境生物样品。应用TCBS平板分离并作生理生化初步鉴定弧菌,平板涂布法统计水样和各类生物每mL(或每g)所含弧菌总数,并应用基于16S~23SrDNA间区序列设计的4种水产病原弧菌特异性引物进行PCR,定性检测各类环境样品所携带致病性弧菌的分布状况。结果显示,弧菌广泛存在于杂色鲍养殖环境中,且杂色鲍养殖池池水中的弧菌密度大于进水口海水。在养殖环境生物中,不同环境生物中每克生物所携带的弧菌数差别很大,其中盘管虫、海蟑螂、等足类所携带的弧菌数最多,而海鞘携带的弧菌数最少。在常见的4种致病性弧菌的检测结果上,创伤弧菌和溶藻弧菌阳性率均为3.4%。通过研究弧菌在杂色鲍养殖环境中弧菌的分布特征,为杂色鲍养殖中流行性弧菌病的预防提供科学依据。     

蛭弧菌海水菌株Bdh5221裂解特性及生长影响因子研究

对利用双层琼脂平板法分离纯化获得的蛭弧菌海水菌株Bdh5221裂解特性及生长影响因子进行了初步研究,为其在生物防治上应用提供理论依据。研究结果表明,蛭弧菌海水菌株Bdh5221对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌、迟钝爱德华氏菌等革兰氏阴性菌有较好的裂解作用;对八叠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌等革兰氏阳性菌的裂解能力较弱;对木糖葡萄球菌和啤酒酵母菌不裂解;可在超声波破碎后的G+菌和酵母菌上生长。蛭弧菌Bdh5221在宿主菌浓度106~109cfu/ml下均可正常生长,高浓度宿主菌更有利于蛭弧菌生长;Bdh5221最适生长的pH在7.0~7.5之间,盐度为20~30左右;Bdh5221增殖速度与起始接种浓度影响不大,起始接种浓度101~103pfu/ml下经过5~7d生长可增殖104左右。     

弧菌影响斑节对虾受精卵和无节幼体发育的研究

用8种弧菌对斑节对虾受精卵和无节幼体进行感染试验,结果表明,8种弧菌严重地影响虾卵的孵化和幼体的正常发育,其中以混合弧菌感染致病性最强。试验还显示了弧菌对越是早期的胚胎侵害力越强。     

杂色鲍健康苗种与患病苗种异养细菌致病毒力因子的比较研究

2002年以来,南方杂色鲍苗出现大规模死亡的问题,严重影响到南方鲍产业的发展。为寻找病因,于2004年自广东深圳下沙鲍鱼场培苗过程中变白掉板的杂色鲍苗以及官湖养殖场健康鲍苗各分离到19株和15株异养细菌,在此基础上研究了它们蛋白酶、淀粉酶、明胶酶、磷脂酶的产酶能力及溶血现象,并对它们的产酶能力及溶血能力进行了比较分析。结果表明,虽然来自下沙病鲍苗的菌株比来自官湖的健康鲍苗的溶血能力差;但它们大多数具有较强的分泌蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、磷脂酶的能力。考虑到胞外酶是细菌的毒力因子之一,据此推测,下沙鲍鱼场鲍苗发生脱板死亡的原因可能与这些菌株能分泌胞外酶有关。