哈维氏弧菌感染的杂色鲍全组织均一化cDNA文库的构建

提取了哈维氏弧菌（Vibrio harveryi）感染的杂色鲍（Haliotis diversicolorReeve）总RNA,采用SMART方法合成双链cDNA,并用双链特异核酸酶进行均一化处理。割取0.5~1.0和1.0~3.0kb的片段分别连接pDNR-LIB并转化大肠杆菌（Esherichia coli）,最终构建2种片段大小的杂色鲍全组织均一化cDNA文库。2文库库容均在2.5×105cfu.mL-1左右,PCR检测阳性重组率为100%。随机挑取200个克隆测序,获得高质量EST序列174条。组装后得到149条Unigenes,冗余率为14.37%。序列注释结果表明,有39条Unigene序列与已知基因高度相似。综上所述,文章所建cDNA文库质量良好,可以满足后续研究工作的需要。     

方斑东风螺“急性死亡症”的病原病理研究

对海南发生的方斑东风螺（Babylonia areolata）“急性死亡症”进行了病原分离纯化、人工感染试验，以及病原16SrDNA分析和生理生化鉴定。结果显示病原菌为哈维弧菌（Vibrioharveyi）；药敏试验结果显示，该病原菌对常见的抗菌药物如恩诺沙星、复合磺胺等敏感，而对青霉素表现为耐药；组织病理结果显示鳃叶、腹足、肝胰腺、消化道、肾等器官的细胞出现变性、坏死、血细胞浸润等现象。     

1株军曹鱼病原弧菌的鉴定及其系统发育树分析

从养殖的患病军曹鱼身上分离出1株病原菌JT2，革兰氏阴性，短杆状，有极生鞭毛，能运动，菌落半透明。经回归感染实验，证明该菌为军曹鱼病原菌。进行了常规生理生化实验，并用API-ID32E系统鉴定该菌。再经Biolog-GN细菌鉴定系统鉴定，结果JT2与鲨鱼弧菌（Vibrio carchariae）相似度最高。为了进一步确定该菌的分类学地位，测定了其16SrDNA序列，分析了相关细菌的同源性，构建其系统发育树。结果表明，该菌株与V．carchariae的亲缘关系最近。综合上述几种方法的鉴定结果，最后鉴定该株菌为鲨鱼弧菌V．carchariae。     

氟苯尼考用于水产养殖的安全性

氟苯尼考(florfenicol)，又称氟甲砜霉素，是一种新型广谱高效抗菌药物，自20世纪90年代初开始应用于水产养殖。1990年氟苯尼考首次在日本上市用于治疗黄尾蛳(Seriola lalandei)、真鲷(Pagrosomus major)、银大马哈鱼(Oncorhynchus kisutch)、日本竹笑鱼(Trachurus japonicus)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、香鱼(Plecoglossus altivelis)、罗非鱼和鳗鱼等的假结核性巴氏杆菌病(pasteurellosis)和链球菌病(streptococcosis)，随后，韩国、挪威、智利、加拿大、英国等分别上市用于治疗专门疾病。中国1999年批准氟苯考尼为国家二类新兽药，在水产养殖上可用于治疗鳗鲡爱德华氏病和赤鳍病。本研究从氟苯尼考抗菌活性与药效学、药代动力学、毒理学、以及药物残留、耐药性等方面探讨其用于水产养殖病害防治的安全性，旨为该药在中国水产养殖中的科学合理应用提供理论参考。     

杂色鲍养殖环境中致病性弧菌分布调查

从深圳不同的杂色鲍人工养殖场采集并分类环境生物样品。应用TCBS平板分离并作生理生化初步鉴定弧菌,平板涂布法统计水样和各类生物每mL(或每g)所含弧菌总数,并应用基于16S~23SrDNA间区序列设计的4种水产病原弧菌特异性引物进行PCR,定性检测各类环境样品所携带致病性弧菌的分布状况。结果显示,弧菌广泛存在于杂色鲍养殖环境中,且杂色鲍养殖池池水中的弧菌密度大于进水口海水。在养殖环境生物中,不同环境生物中每克生物所携带的弧菌数差别很大,其中盘管虫、海蟑螂、等足类所携带的弧菌数最多,而海鞘携带的弧菌数最少。在常见的4种致病性弧菌的检测结果上,创伤弧菌和溶藻弧菌阳性率均为3.4%。通过研究弧菌在杂色鲍养殖环境中弧菌的分布特征,为杂色鲍养殖中流行性弧菌病的预防提供科学依据。     

广东省杂色鲍苗种培育的现状及发展趋势

1、前言自古以来,鲍鱼即在中国的饮食文化之中占有重要的地位,所谓的山珍海味,其中之一指的就是鲍鱼。鲍肉味鲜美,具有很高的营养价值,被称为“海味之冠”,其贝壳有清肝明目之功效,国内外市场紧俏,价格一直看好,也供不应求,在古代中国药理论述上,相传其壳可治眼疾,故有石决明之     

哈维弧菌rbsB基因的克隆与表达

哈维弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼养殖中一种重要的病原菌。该研究根据已知rbs B(核糖体结合蛋白)基因序列设计引物,扩增得到哈维弧菌354(V.harveyi 354)rbs B基因的全序列(Gen Bank序列号MF797015),预测该序列可编码292个氨基酸,分子量为30.7 k D,理论等电点为5.05,亲水性系数为0.043,为疏水性蛋白。根据Rbs B氨基酸构建的系统进化树可以发现哈维弧菌Rbs B蛋白和欧文弧菌(V.owensii CAIM 1854)的关系最近。构建了p GEX-4t-1-rbs B重组质粒并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,得到的重组蛋白的相对分子量约59 k D,在37℃、IPTG浓度为0.6 mmol·L–1诱导8 h时表达量最高。     

氟苯尼考对杂色鲍脓疱病的实验药效研究

室内通过浸浴、创伤或注射方式对杂色鲍幼鲍以病原菌MyroidesodoratusNPB03菌株人工感染脓疱病,探讨新型抗菌药物氟苯尼考(florfenicol)在不同浓度下药浴对脓疱病的治疗效果。结果显示健康杂色鲍浸浴方式不能感染,而腹足创伤感染较注射方式引起明显的脓疱病症状,对创伤感染用氟苯尼考6μg·mL-1浓度药浴可明显降低死亡率,但对注射感染需10μg·mL-1浓度才可有效控制感染所致的死亡,结果表明对已被病原细菌感染的鲍应施用较高浓度的药物处理才有效。     

杂色鲍幼苗大规模死亡与细菌数量的关系

对杂色鲍育苗过程中养殖池、附着板上的细菌数量进行了监测,当鲍苗出现大规模死亡前后,池水及附着板上细菌数量比养殖初期高2个数量级,利用臭氧处理养殖水后,附着板上的细菌数量没有发生根本变化,鲍苗同样出现死亡,鲍苗剥离后1周左右也出现大规模死亡。在鲍苗大规模死亡前后分离的细菌经过鉴定为塔式弧菌及Vibrio sp.     

杂色鲍育苗中"掉板症"的药物防治研究

在循环水育苗系统中,针对近年来南方杂色鲍育苗中的"掉板症",使用新兽药氟苯尼考(Florfenicol)和自配药物"鲍健",40 d育苗期内分别获得71.2%和67.7%的成活率,体长为(1.39±0.27) mm和(1.97±0.21) mm,而未使用药物的对照组幼体附着后10～12 d内全部死亡,初步试验显示使用抗菌素可有效控制"掉板症".同时分离出1株毒力强、疑为致病菌的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus).