海水蛭弧菌分离纯化方法初步研究

蛭弧菌(Bdellovibrio)广泛存在于自然水体,它具有噬菌的特性,对水体中细菌数量控制具调节作用,有可能是进行生物防治的一种重要生物。本文比较不同分离方法、上层培养基营养盐浓度和富集培养与直接培养等对海水蛭弧菌分离、计数的影响,从而建立了海水蛭弧菌分离和纯化的方法。应用无营养盐的海水双层琼脂平板法,采用6种宿主菌分别对海南4份海水样品进行计数检测,发现不同宿主菌所得到的蛭弧菌数量不同,同时对分离纯化到的3株海水蛭弧菌进行液体培养增殖,进一步检验了海水双层琼脂法的可靠性。     

蛭弧菌海水菌株Bdh5221裂解特性及生长影响因子研究

对利用双层琼脂平板法分离纯化获得的蛭弧菌海水菌株Bdh5221裂解特性及生长影响因子进行了初步研究,为其在生物防治上应用提供理论依据。研究结果表明,蛭弧菌海水菌株Bdh5221对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌、迟钝爱德华氏菌等革兰氏阴性菌有较好的裂解作用;对八叠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌等革兰氏阳性菌的裂解能力较弱;对木糖葡萄球菌和啤酒酵母菌不裂解;可在超声波破碎后的G+菌和酵母菌上生长。蛭弧菌Bdh5221在宿主菌浓度106~109cfu/ml下均可正常生长,高浓度宿主菌更有利于蛭弧菌生长;Bdh5221最适生长的pH在7.0~7.5之间,盐度为20~30左右;Bdh5221增殖速度与起始接种浓度影响不大,起始接种浓度101~103pfu/ml下经过5~7d生长可增殖104左右。     

培养方式对蜜环菌胞内多糖合成与抗眩晕症活性影响的研究

对蜜环菌在不同液态培养方式下胞内多糖的合成、组成以及抗眩晕症活性进行比较。结果显示,蜜环菌在摇床培养条件下形成菌丝球,菌丝多糖(AMP)和生物量在第8d达到最高产量,分别为124.32mg/L和10.85g/L,蜜环菌在静置培养条件下形成菌索,菌索多糖(ARP)与生物量在20d时达到最高,分别为588.40mg/L和37.17g/L,静置培养对蜜环菌胞内多糖的合成有利;两种多糖在多糖含量、蛋白质含量、糖醛酸含量以及皂苷含量等组成成分上基本一致;AKTA-purifier快速层析纯化系统(FPLC)检测显示,AMP与ARP有四个相同的多糖组分,ARP另多出一个组分;抗机械旋转所致小鼠眩晕症试验表明AMP与ARP活性相似,均能显著缩短眩晕小鼠逃避电击所用的时间(P<0.01),增加小鼠眩晕后的进食量,因而对机械旋转所致眩晕症具有一定疗效。