化学物质诱导泥蚶幼虫附着变态的研究↑（*）

1996年8～9月间在室内用8种化学诱导物对泥蚶变态前期幼虫进行附着变态诱导实验。结果表明,8种药物对泥蚶幼虫的变态均有一定的诱导作用。其中,3-HT、EPI和NE对幼虫变态的诱导作用极显著,有效浓度范围较广;KCl和Ala的诱导作用较显著,有效浓度范围较窄;而Try、CABA和Ach只有某些浓度组的诱导效果明显,诱导效率对浓度的信赖性较强。从诱导物浓度来看,10-4mol/L的Ala、GABA和10-5mol/L的EPI诱导效果最好,与对照组相比,变态率均提高12%以上。不同处理时间试验表明,处理时间的长短与幼虫的变态率无一致的相关性关系,因药而异;总的来看,处理时间不超过8h的诱导效果较好,时间过长诱导率降低(GABA除外)。其中,用10-5mol/L的Ala处理1～4h或10-5mol/L的EPI处理4h效果最好,与对照组相比,变态率均提高25%以上。8种药物中,只有Try表现出对幼虫明显的毒性影响,Try的浓度越高,处理时间越长,幼虫的死亡率越高,用10-4mol/L的Try处理幼虫3h,死亡率达89%。     

盐度对九孔鲍胚胎发育及幼体附着率的影响

采用梯度试验研究了盐度和密度对九孔鲍胚胎发育及附着率的影响。试验盐度（‰）为24、26、28、30、32和34，在受精后96h统计各试验组中幼体的变态附着率。结果显示，各盐度组中的幼体均可发育至浮游担轮幼虫，盐度越低，发育速度越快。盐度24组的幼虫不能完成变态继续发育；而在盐度26～34范围内，盐度越高，幼虫的96h变态附板率越高，分别为：5．83±1．12％，12．50±2．33％，16．67±1．87％，16．67±3．33％和18．33±3．12％。密度试验设计5个密度组，选择1、10、100、500、1000只健康浮游幼体分别随机放人500mL水体中，观察密度与九孔鲍幼体附着变态之间的关系，受精后96h的计数。结果表明，不同密度对幼体的附着变态产生影响，1只／500mL密度组中的幼体未完成附着，10～1000只／500mL密度组中，附着变态率随着密度的升高而降低，其中100、500、1000只，500mL三密度组中幼体的附着变态率无显著性差异（P〈0．05）。     

化学物质诱导九孔鲍幼虫变态附着的初步研究

用KCl、尿素[CO(NH2)2]、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)诱导九孔鲍幼虫变态附着,分析同种化学物质的不同质量浓度以及不同的化学物质对变态附着的影响,并对他们的诱导效果进行了对比.试验结果表明,质量浓度为0.075 g/L的KCl和0.35 g/L 的EDTA-Na2的诱导作用最显著,而尿素的诱导效果较差,尿素诱导九孔鲍幼虫变态附着的最佳质量浓度是0.1 g/L.不同的诱导物及同一种诱导物在不同的质量浓度下对九孔鲍幼虫变态附着的诱导作用有较大的差异.     

化学物质对不同发育天数海湾扇贝幼虫变态的诱导

自海湾扇贝(Argopectenirradians)受精后第10天起,定期取一定量海湾扇贝幼虫,分别置于不同浓度梯度的KCl、肾上腺素、去甲肾上腺素、L-DOPA、5-羟色胺、GABA、茶碱和咖啡因等8种诱导物中,处理时间为8h。实验后第14天取出幼虫观察显示,这8种诱导物对不同发育天数海湾扇贝幼虫的变态有着不同的诱导作用。13.42×10-3和20.13×10-3mol/L的KCl对第12天幼虫的变态有抑制作用,变态提高率为负值;当幼虫发育至第13和14天时,上述两浓度的KCl能够明显诱导幼虫变态,变态率均提高20%以上,而对于第16天的幼虫诱导作用有所减弱,变态提高率有所降低;26.85×10-3mol/L的KCl对第12和13天幼虫的变态均有抑制作用,变态提高率为负值,对第14和16天幼虫的变态却有明显持续的诱导作用,变态率分别提高22.98%和37.5%。神经递质肾上腺素、去甲肾上腺素、L-DOPA、5-羟色胺和GABA的诱导作用规律基本相似,即对第13天海湾扇贝幼虫的变态有明显的抑制作用,变态提高率均为负值,而对第14天幼虫的诱导作用较显著。茶碱和咖啡因作为影响细胞内cAMP的物质,其诱导作用规律与神经递质有所不同,对第13天海湾扇贝幼虫变态的诱导效果最好。     

僧帽牡蛎幼体附着和变态的诱导

采用外加人工化学物质检验对僧帽牡蛎眼点幼体的附着和变态诱导活性,结果表明去甲肾上腺素、野上腺素和L-多巴可有效诱导幼体不固着变态.在药物持续作用下,肾上腺素的最佳诱导浓度为10-5mol@L-1(变态率67.4%),去甲肾上腺素的最佳诱导浓度为5×10-5mol@L-1(变态率52.2%),L-多巴的最佳诱导浓度为10-5mol@L-1(变态率43.0%),而对照组变态率为0.幼体大多在药物作用12～24h之间完成变态.三种药物诱导的变态个体中有85%以上是不固着变态.比较多种附着基和EPI的变态诱导活性,显示同种贝壳的活性较肾上腺素还高.去甲肾上腺素诱导幼体变态效应对低盐海水有较强耐受能力,而对高盐海水适应性差.     

KC1对中间球海胆幼虫变态的诱导效果

中间球海胆（Strongylocentrotus intermedius)八腕后期幼虫，在KC1添加浓度100mmol/L海水中，分别处理5，10，15min后，均变态为正常稚海胆，中间试验及生产应用结果表明，经KC1处理，幼虫的附着时间缩短了36h，附着率则分别增加了40．4％，27．75％。     

几种化学物质对西施舌幼虫附着和变态的诱导技术

采用添加不同化学诱导物的方法，研究了肾上腺素（EPI）、氨基丁酸(GABA)、L-多巴（L-DOPA）、Ca²⁺对西施舌眼点幼虫附着和变态的诱导作用，确定了化学诱导物 最佳诱导浓度。结果表明,EPI对西施舌附着和变态的诱导效果最为显著，当EPI浓度为10^-4 mol·L^-1时，附着率及变态率分别为88.3％及92.8％，同时成活率也高达98.14％；GABA亦有较好的诱导效果，当GABA浓度为10^-5 mol·L^-1，附着率及变态率分别为86.9％及87.6％；L-DOPA能诱导西施舌眼点幼虫变态，当L-DOPA浓度为10^-6 mol·L^-1时，变态率达73.3％，附着率达84.9%. Ca²⁺最适宜浓度为20 mmol·L^-1时，附着率、变态率及成活率分别为86.1％、42.8％和87.4％。以上4种化合物最适宜浓度诱导作用时，西施舌幼虫的附着率和变态率均显著高于对照组。实验还对Ca²⁺在西施舌大规模人工育苗中的诱导作用进行探讨。     

维生素B7和B12对细菌生物被膜形成及厚壳贻贝幼虫变态的影响

为探究B族维生素对海洋细菌生物被膜形成、海洋贝类幼虫变态所产生的作用,本研究首先使用维生素B7 (VB7)和B12 (VB12)直接刺激厚壳贻贝(Mytilus coruscus)幼虫,观察其对变态的直接诱导活性;然后通过添加VB7和VB12,与海假交替单胞菌(Pseudoalteromonas marina)共同形成生物被膜,分析B族维生素对生物被膜形成及其生物学特性的影响;同时检测生物被膜变化对厚壳贻贝幼虫变态发育的影响。研究结果显示,0.02 mmol/L浓度VB7和VB12可以直接诱导厚壳贻贝幼虫的变态,且效果最为显著(P<0.05);0.02 mmol/L浓度VB7和VB12处理后的海假交替单胞菌生物被膜对幼虫附着变态的诱导作用均显著提高(P<0.05);进一步通过细菌密度计数、膜厚度分析、可拉酸染色和定量等方法,揭示VB7和VB12处理后生物被膜细菌密度、膜厚度以及胞外多糖、蛋白和脂质均显著增加(P<0.05)。研究结果证实,VB7和VB12可能通过改变海洋细菌生物被膜的生物学特性,进而调控厚壳贻贝幼虫变态发育。本研究为探究厚壳贻贝幼虫附着变态的分子机制提供了新的理论依据和创新思路,同时为B族维生素在提高厚壳贻贝人工育苗技术、改善厚壳贻贝养殖产业问题和促进海洋牧场生态修复建设等方面的应用提供了理论基础。     

诱导皱纹盘鲍浮游幼虫附着和变态的物质

根据鲍育苗中常用的6种底栖硅藻氨基酸的组成分析结果,选择15种人工合成氨基酸作为诱导物质,进行鲍浮游幼虫附着、变态的影响实验,发现天冬氨酸组附着率最高,谷氨酸组次之,但均略低于底栖硅藻组,明显高于对照组。变态率实验,天冬氨酸和谷氨酸组结果基本一致,均略高于底栖硅藻组,明显高于对照组。不同氨基酸浓度对附着、变态的影响实验结果表明:无论是天冬氨酸还是谷氨酸,实验浓度为10-5mol·L-1组的附着率和变态率最高。     

硫酸铜对刺参的急性毒性试验

采用静水法研究了硫酸铜对刺参幼参的急性毒性，结果表明：硫酸铜对平均体重9．2g刺参的96小时LC50为0．77mg／L，安全浓度为0．077mg／L（1）．2CuSO4计），明显低于硫酸铜在海水养殖中的常规用量（0．5～1．0mg／L），因此在刺参养殖中应严格控制硫酸铜的使用。     

脂多糖对细菌生物被膜形成及厚壳贻贝幼虫变态的影响

为探究脂多糖(LPS)对海洋细菌生物被膜形成、海洋贝类幼虫变态所产生的作用,本研究使用不同浓度的LPS直接刺激厚壳贻贝幼虫,观察其对幼虫附着变态的直接作用;同时在海假交替单胞菌形成生物被膜的过程中添加不同浓度的LPS,通过分析生物被膜生物学特性的变化,及变化后的生物被膜对厚壳贻贝幼虫附着变态的影响。研究结果显示,3种浓度的LPS均可直接诱导厚壳贻贝幼虫的变态;10 mg/L浓度LPS处理后的生物被膜其细菌密度、膜厚明显降低(p<0.05),胞外产物中多糖(如可乐酸)、脂类显著增加(p<0.05),同时其对幼虫变态的诱导作用也显著提高(p<0.05),因此推测,在厚壳贻贝幼虫的附着变态过程中,LPS具有直接诱导作用;除此之外,脂多糖还可以通过调控生物被膜胞外物质,特别是可乐酸的生成,从而间接影响厚壳贻贝幼虫的附着变态。     

胆碱受体化合物对厚壳贻贝幼虫变态的调控作用

为研究胆碱受体在厚壳贻贝幼虫变态发育过程中的作用,通过药理学手段调查胆碱类神经递质乙酰胆碱、氯甲酰胆碱及其拮抗剂六甲双铵和阿托品对厚壳贻贝幼虫变态发育调控作用。结果显示:在24 h暴露实验中,氯甲酰胆碱在10-5~10-4mol/L浓度表现出诱导活性,乙酰胆碱则无诱导活性。在持续暴露实验中,氯甲酰胆碱在10-5~10-4mol/L浓度表现出诱导活性,乙酰胆碱在10-6~10-4mol/L浓度表现出诱导活性。在拮抗剂实验中,在10-4mol/L氯甲酰胆碱或10-4mol/L乙酰胆碱存在时,N型胆碱受体拮抗剂六甲双铵对厚壳贻贝幼虫的变态均无抑制效果,表明N型胆碱受体可能并不在幼虫的变态发育过程发挥主导作用。M型胆碱受体拮抗剂阿托品在10-4mol/L氯甲酰胆碱存在时表现出抑制作用,且测试液中幼虫的变态率降为0%,表明M型胆碱受体可能参与调控厚壳贻贝幼虫变态发育过程。在整个药理学实验过程中无死亡幼虫出现,因而氯甲酰胆碱和乙酰胆碱可作为有效诱导物来促进厚壳贻贝幼虫的变态发育,尝试应用于该种的水产养殖过程;同时本研究为厚壳贻贝变态发育调控机制的研究提供有效理论依据。     

脉红螺附着变态与食性转换的研究

为实现脉红螺苗种的规模化生产,本实验通过对脉红螺幼虫培育、采苗、稚螺培育等方面的系统研究,探索了脉红螺苗种繁育过程中幼虫附着变态率低和饵料转换难的问题。结果显示:脉红螺浮游幼虫前期(0~12 d)生长较快,壳高平均日增长21.8μm;中期(13~18 d)生长较慢,壳高平均日增长3μm;后期(19~30 d)生长加快,壳高平均日增长46.8μm。用取自沉淀池中的新鲜海水对脉红螺浮游幼虫进行附着变态诱导,诱导第1天脉红螺浮游幼虫开始出现附着变态,第4天时,附着变态活动基本结束,附着变态率为40%。为变态后的稚螺投喂刚附着的长牡蛎和魁蚶稚贝,第1~8天,稚螺壳高平均日增长65.6μm;第9天开始,稚螺生长速度加快;第9~12天,稚螺壳高平均日增长136.4μm;第13~16天,稚螺壳高平均日增长307.3μm;第17~20天,稚螺壳高平均日增长445.8μm。研究表明,用取自沉淀池中的新鲜海水诱导脉红螺浮游幼虫的附着变态效果好,刚附着的长牡蛎稚贝和魁蚶稚贝可以作为脉红螺稚螺培育阶段的适宜饵料。     

北方沿海西施舌苗种的人工培育试验

在辽宁省沿海首次对西施舌室内人工育苗进行了研究。试验结果表明,对西施舌种贝促熟62d,用流水刺激的方法诱导亲贝排放精,卵,亲贝个体排放比例达到60％以上,个体排卵量约为380～420万粒,其受精率为82．0％,孵化率为46．0％。在盐度为25．6～31．0,水温为23．8～25．9℃的条件下,浮游幼虫9～14d进入附着变态期,变态率为12．4％,壳长生长速度为13．9μm／d。变态后的36d内,壳长平均生长速度为76．3μm／d,成活率为80.4％。沙盘单位面积附苗量为波纹板的48．5倍。本次试验利用12m^3水体育出2．5mm的稚贝21．4万枚,单位水体出苗量为1．78万枚／m^3。     

养殖密度对毛蚶幼虫生长及存活的影响

为探讨毛蚶(Scapharca subcrenata)幼虫养殖的最佳密度,本研究设定了5个不同的放养密度(2、5、8、14、20 ind/m L),养殖实验从D型幼虫阶段一直持续到幼虫完成附着变态。实验结果表明,随着放养密度的增加,水体氨氮浓度、亚硝酸盐浓度显著升高(P0.05);幼虫密度为20 ind/m L时,分别达到最大值0.089 mg/L和0.008 mg/L。溶解氧浓度则随幼虫密度的增大呈现下降的趋势,幼虫密度达到14、20 ind/m L时,显著低于其他密度组(P0.05)。幼虫的生长速率随放养密度的增加显著下降,5~8 ind/m L为幼虫最佳生长密度。幼虫的存活率也随着放养密度的增加显著下降(P0.05),当幼虫的放养密度为20 ind/m L时,存活率仅为35%。放养密度为8 ind/m L时,幼虫的附着密度最大,且在附着基下层的附着密度显著高于中层和上层(P0.05)。同时,随着放养密度的增加,幼虫附着变态的时间被延长,附着变态规格也显著减小(P0.05)。因此,综合考虑各种要素,规模化苗种生产中幼虫的培育密度控制在5~8 ind/m L较为适宜。     

几种阳离子对葡萄牙牡蛎幼虫附着和变态的影响

葡萄牙牡蛎眼点幼虫暴露于K+、Ca2+、Mg2+、NH4+不同添加浓度的海水溶液中.结果显示:在最初4h内K+和NH4+可明显诱导幼虫的附着行为;7d后,10 mM和20 mM的K+以及10 ～ 25 mM的Ca2+可显著诱导幼虫的附着变态,Mg2+与对照组相比无效,NH4+造成幼虫高死亡率.这表明K+、Ca2+可能成为葡萄牙牡蛎育苗生产上幼虫附着变态的有效诱导剂.     

海藻提取液与不同价态砷化物对蚕豆根法细胞遗传毒性的研究

采用蚕豆根尖微核试验，从水产品食用安全角度研究了海带、裙带菜、紫菜提取液和不同浓度的三价砷（As^3＋）、五价砷（As^5＋）、二甲基砷（DMA）的遗传毒性效应，结果表明：用海藻提取液（总砷含量2mg／L、5mg／L、10mg／L）处理蚕豆根尖细胞12、24、36小时，细胞微核率与阴性对照组相比没有显著的变化（p〉0．05）；用As^3＋、DMA（浓度为100μg／L、200μg/L）处理蚕豆根尖细胞12、24、36小时，细胞微核总数和微核率都显著高于阴性对照组（p〈0．05）；As^5＋溶液（浓度为100μg/L、200μg/L）处理蚕豆根尖细胞相同的时间，对微核率的影响要小于As^3＋、DMA的影响。含砷的海藻提取液对蚕豆粮尖细胞几乎没有遗传毒性，海藻是安全可食的；遗传毒性大小顺序为As^3＋〉DMA〉As^5＋。     

虾夷扇贝三倍体诱导与培育技术的研究

取繁殖期虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis)亲体，采用阴干、流水和升温海水催产以及小水体、高密度、雌雄分池排放、人工授精的方法，可获得批重受精卵。分别使用浓度为0．05，0．10，0．15，20，0．30，0．50和0．70mmol/L的6－DMAP诱导虾夷扇贝三倍体，实验水温分别为12℃和14℃。结果表明，水温12℃，6－DMAP0．05mmol/L时，在授精后67min处理胚胎45min诱导三倍体效果较好，三倍体率达83．3％，面盘幼虫相对孵化率达69．5％；水温12℃和14℃时，6－DMAP可诱导17．3％－100．0％的三倍体面盘幼虫；6－DMAP处理组胚胎发育至面盘幼虫的时间比对照组慢，故应推迟1d选优；处理组幼虫初始壳长、壳高及日生长速度皆高于对照组；6－DMAP的残留人影响处理幼虫的成活率，用0．2ml/L的DMSO海水浸洗处理可减轻6－DMAP的副作用。     

采用聚乙烯网衣作为扇贝育苗附着基的试验

本文报告了采用聚乙烯网衣作为虾夷扇贝、海湾扇贝稚贝附着基的附着效果。对变态幼虫至稚贝期的生长和成活稚贝及附着期中间育成率等进行了对比试验。结果表明,采用网衣附着基变态幼虫附着速度比棕帘慢,变态幼虫至稚贝的附着率及其日生长平均值分别为：采用网衣附着基,虾夷扇贝稚贝附着率为５１．９％,平均日生长为１８．２８μｍ,棕帘为５４％,１９．０μｍ。而海湾扇贝网衣为４９．９８％,２１．４μｍ,棕帘为５９％,２１．０μｍ。稚贝中间育成率及单位水体出苗量分别为：虾夷扇贝网衣为２０．８％、６９．１７万枚／ｍ３,棕帘为１６．４３％、５８．５７万枚／ｍ３,海湾扇贝网衣为１８．９９％、８８．３万枚／ｍ３,棕帘为１８．３４％、６０．０万枚／ｍ３。     

纤维素对海假交替单胞菌生物被膜生物学特性及厚壳贻贝幼虫附着变态的影响

为探究纤维素对海假交替单胞菌生物被膜的生物学特性及其对厚壳贻贝幼虫附着变态的影响,实验设置海假交替单胞菌(初始细菌密度5×10⁸个/m L)分别与浓度为0.02、0.20、2.00、20.00 mg/L的纤维素共孵育形成生物被膜,检测形成的生物被膜对厚壳贻贝幼虫变态的诱导作用变化,比较生物被膜成膜能力、胞外产物等生物学特性变化,并分析其与厚壳贻贝幼虫附着变态的关系。纤维素浓度为2.00或20.00 mg/L时,所形成的生物被膜对幼虫附着变态的诱导活性显著降低。通过分析加入纤维素后海假交替单胞菌形成的生物被膜生物学特性发现,随着纤维素浓度升高,生物被膜中细菌的分布更为分散,细菌密度和膜厚呈逐渐降低趋势,生物被膜胞外产物中α-多糖、β-多糖和脂质的生物量显著降低,而蛋白无明显变化。在海假交替单胞菌生物被膜形成过程中,纤维素主要通过降低胞外α-多糖、β-多糖和脂质的产生,进而间接调控厚壳贻贝幼虫附着变态。研究结果为探究海假交替单胞菌纤维素对生物被膜形成及对厚壳贻贝附着变态调控分子机制提供理论依据,为整治生物污损等实际问题提供新思路。