几种化学物质对西施舌幼虫附着和变态的诱导技术

采用添加不同化学诱导物的方法，研究了肾上腺素（EPI）、氨基丁酸(GABA)、L-多巴（L-DOPA）、Ca²⁺对西施舌眼点幼虫附着和变态的诱导作用，确定了化学诱导物 最佳诱导浓度。结果表明,EPI对西施舌附着和变态的诱导效果最为显著，当EPI浓度为10^-4 mol·L^-1时，附着率及变态率分别为88.3％及92.8％，同时成活率也高达98.14％；GABA亦有较好的诱导效果，当GABA浓度为10^-5 mol·L^-1，附着率及变态率分别为86.9％及87.6％；L-DOPA能诱导西施舌眼点幼虫变态，当L-DOPA浓度为10^-6 mol·L^-1时，变态率达73.3％，附着率达84.9%. Ca²⁺最适宜浓度为20 mmol·L^-1时，附着率、变态率及成活率分别为86.1％、42.8％和87.4％。以上4种化合物最适宜浓度诱导作用时，西施舌幼虫的附着率和变态率均显著高于对照组。实验还对Ca²⁺在西施舌大规模人工育苗中的诱导作用进行探讨。     

我国海产贝类附着变态的化学诱导研究进展

近二十年来,海产贝类幼体附着和变态的化学诱导研究取得了十分显著的进展,发现了许多天然和人工诱导物质。据统计,部分金属离子(K 、Ca2 、Cr6 、)、肾上腺素(EPI)、L-多巴(L-DOPA)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、γ-氨基丁酸(GABA)、5-羟色胺(5-HT)及某些氨基酸与脂肪酸等都已用于约20种贝类附着变态的研究中,成果显著。现在对海产贝类的研究已深入到分子生物学水平,并已成功地用于生产中。     

化学物质对不同发育天数海湾扇贝幼虫变态的诱导

自海湾扇贝(Argopectenirradians)受精后第10天起,定期取一定量海湾扇贝幼虫,分别置于不同浓度梯度的KCl、肾上腺素、去甲肾上腺素、L-DOPA、5-羟色胺、GABA、茶碱和咖啡因等8种诱导物中,处理时间为8h。实验后第14天取出幼虫观察显示,这8种诱导物对不同发育天数海湾扇贝幼虫的变态有着不同的诱导作用。13.42×10-3和20.13×10-3mol/L的KCl对第12天幼虫的变态有抑制作用,变态提高率为负值;当幼虫发育至第13和14天时,上述两浓度的KCl能够明显诱导幼虫变态,变态率均提高20%以上,而对于第16天的幼虫诱导作用有所减弱,变态提高率有所降低;26.85×10-3mol/L的KCl对第12和13天幼虫的变态均有抑制作用,变态提高率为负值,对第14和16天幼虫的变态却有明显持续的诱导作用,变态率分别提高22.98%和37.5%。神经递质肾上腺素、去甲肾上腺素、L-DOPA、5-羟色胺和GABA的诱导作用规律基本相似,即对第13天海湾扇贝幼虫的变态有明显的抑制作用,变态提高率均为负值,而对第14天幼虫的诱导作用较显著。茶碱和咖啡因作为影响细胞内cAMP的物质,其诱导作用规律与神经递质有所不同,对第13天海湾扇贝幼虫变态的诱导效果最好。     

水产养殖

030467化学处理对珠母贝幼贝附着行为的影响=The effeet of ehemical eues on set-tlement behaviour of blackliP pearl oyster(pi,,cta由拼a,邵ritifera)larvae[刊,英〕月)〕roudi Ms,Southgate pC//Aquae.一2002,209(1/4)一117一124 用化学药物诱导珠母贝幼贝更快地附着可以显著提高产量。为达此目的,配制4种浓度(10一2,10一3,10一4和一0一5)的肾上腺素、去甲肾上腺素,r一氨基丁酸(GABA)连同塑料丝一起,用来研究这些物质诱导珠母贝幼体附着的能力。在所有试验浓度中,肾上腺素和去甲肾上腺素对幼贝的附着和爬行行为均无明显的影响。在…     

G-蛋白偶联受体与信号通路对紫贻贝幼体附着变态的调控作用

为了阐明紫贻贝Mytilus galloprovincialis幼体附着变态的内在机理,在天然诱导物-微生物膜的诱导参照下,通过使用G蛋白偶联受体（GPCRs）与信号通路的活化剂与抑制剂初步研究了其对该种幼体附着变态过程中调控作用。结果显示,GPCRs活化剂Gpp[NH]p与抑制剂GDP-β-S没有诱导和抑制活性,表明可能非GPCRs的其他细胞反应/过程参与了M. galloprovincialis幼体的附着变态。腺苷酸环化酶/环腺苷酸（AC/cAMP）信号通路相关、理论上具有诱导活性的6种神经性试剂,除了磷酸二脂酶抑制剂（IBMX）外,其它的在10-8-10-3 M浓度下48 h、72 h后都没有活性,并且高浓度下表现出较高的神经性药物毒性。IBMX仅在10-4 M 浓度72 h后呈现出一定的诱导活性,但是与微生物膜48 h就具有非常高的活性相比显著性较低且时间滞后。磷脂酰肌醇/二酰基甘油/蛋白激酶（PI/DAG/PKC）信号通路相关的2种活化剂48 h、72 h均无诱导活性,但是其抑制剂H-7在10-6 M的低浓度下48 h后表现出显著性的抑制效果,72 h后效果丧失,抑制浓度上升到10-5 M。以上活性浓度与作用时间两个方面的结果明确表明了PI/DAG/PKC信号通路可能参与调控M. galloprovincialis幼体的附着变态,而AC/cAMP信号通路可能作为次要通路,或者由于所用神经性试剂的毒性造成的一种实验假象。本研究有助于推进该品种的发育生物学研究以及通过切断信号通路实现生物污损防治技术的开发。     

诱导皱纹盘鲍浮游幼虫附着和变态的物质

根据鲍育苗中常用的6种底栖硅藻氨基酸的组成分析结果,选择15种人工合成氨基酸作为诱导物质,进行鲍浮游幼虫附着、变态的影响实验,发现天冬氨酸组附着率最高,谷氨酸组次之,但均略低于底栖硅藻组,明显高于对照组。变态率实验,天冬氨酸和谷氨酸组结果基本一致,均略高于底栖硅藻组,明显高于对照组。不同氨基酸浓度对附着、变态的影响实验结果表明:无论是天冬氨酸还是谷氨酸,实验浓度为10-5mol·L-1组的附着率和变态率最高。     

5-羟色胺诱导刺参幼虫附着变态

采用不同浓度的5-羟色胺（5-HT）溶液诱导刺参幼虫附着变态,处理不同时间后,计算附着变态率。结果表明：使用浓度为0．001、0．01、0．1和1mmol／L的5-HT溶液诱导刺参幼虫12和24小时均可不同程度地提高刺参幼虫附着变态率。以浓度为0．1mmol／L的5-HT溶液诱导刺参幼虫24小时效果最好,附着变态率提高12．8％。     

肾上腺素对岩牡蛎幼虫变态的诱导

为了得到壳型规则、大小均一的单体牡蛎,本研究采用肾上腺素对岩牡蛎单体苗种生产的诱导条件进行研究,阐明了岩牡蛎单体苗种的最适诱导浓度、诱导时间和诱导密度。结果显示,肾上腺素能显著诱导岩牡蛎幼虫的不固着变态,最适诱导浓度为5×10–5 mol/L,最适诱导时间为1 h,提高诱导浓度和延长诱导时间导致岩牡蛎幼虫的不固着变态率、稚贝壳高和存活率显著降低;肾上腺素对低于8个/mL幼虫密度的诱导效果差异不显著,但稚贝壳高和存活率在8个/mL的培育密度下显著低于0.5～4个/mL,研究表明利用肾上腺素诱导岩牡蛎单体时,可大批量处理眼点幼虫,但稚贝充气培养的最适培养密度应不高于4个/mL。     

化学物质诱导泥蚶幼虫附着变态的研究↑（*）

1996年8～9月间在室内用8种化学诱导物对泥蚶变态前期幼虫进行附着变态诱导实验。结果表明,8种药物对泥蚶幼虫的变态均有一定的诱导作用。其中,3-HT、EPI和NE对幼虫变态的诱导作用极显著,有效浓度范围较广;KCl和Ala的诱导作用较显著,有效浓度范围较窄;而Try、CABA和Ach只有某些浓度组的诱导效果明显,诱导效率对浓度的信赖性较强。从诱导物浓度来看,10-4mol/L的Ala、GABA和10-5mol/L的EPI诱导效果最好,与对照组相比,变态率均提高12%以上。不同处理时间试验表明,处理时间的长短与幼虫的变态率无一致的相关性关系,因药而异;总的来看,处理时间不超过8h的诱导效果较好,时间过长诱导率降低(GABA除外)。其中,用10-5mol/L的Ala处理1～4h或10-5mol/L的EPI处理4h效果最好,与对照组相比,变态率均提高25%以上。8种药物中,只有Try表现出对幼虫明显的毒性影响,Try的浓度越高,处理时间越长,幼虫的死亡率越高,用10-4mol/L的Try处理幼虫3h,死亡率达89%。     

KCl诱导虾夷马粪海胆幼体变态的研究

研究了不同浓度的KCl对于虾夷马粪海胆幼体变态的诱导作用及对变态后个体生长的影响。试验结果表明,KCl对虾夷马粪海胆是一种极好的变态诱导剂,0.05 mol/L的KCl作用5~10 h诱导效果最佳,在提高变态率的同时,大大地降低了死亡率。     

甲醛对中华虎头蟹Ⅱ期潘状幼体的急性毒性

在盐度28．0～29．0、水温23—24℃和pH8．6～8．7条件下,采用急性毒性试验方法研究了甲醛溶液（37．O％～40．0％）对中华虎头蟹（Orithyia sinica）Ⅱ期溢状幼体的急性毒性。结果表明,甲醛溶液对溢状幼体的24h、48h,及96h的半致死质量浓度分别为131．0μL·L-1、110．3μL·L-1,及98．7μL·L-1;安全浓度为23．4μL·L-1。     

胆碱受体化合物对厚壳贻贝幼虫变态的调控作用

为研究胆碱受体在厚壳贻贝幼虫变态发育过程中的作用,通过药理学手段调查胆碱类神经递质乙酰胆碱、氯甲酰胆碱及其拮抗剂六甲双铵和阿托品对厚壳贻贝幼虫变态发育调控作用。结果显示:在24 h暴露实验中,氯甲酰胆碱在10-5~10-4mol/L浓度表现出诱导活性,乙酰胆碱则无诱导活性。在持续暴露实验中,氯甲酰胆碱在10-5~10-4mol/L浓度表现出诱导活性,乙酰胆碱在10-6~10-4mol/L浓度表现出诱导活性。在拮抗剂实验中,在10-4mol/L氯甲酰胆碱或10-4mol/L乙酰胆碱存在时,N型胆碱受体拮抗剂六甲双铵对厚壳贻贝幼虫的变态均无抑制效果,表明N型胆碱受体可能并不在幼虫的变态发育过程发挥主导作用。M型胆碱受体拮抗剂阿托品在10-4mol/L氯甲酰胆碱存在时表现出抑制作用,且测试液中幼虫的变态率降为0%,表明M型胆碱受体可能参与调控厚壳贻贝幼虫变态发育过程。在整个药理学实验过程中无死亡幼虫出现,因而氯甲酰胆碱和乙酰胆碱可作为有效诱导物来促进厚壳贻贝幼虫的变态发育,尝试应用于该种的水产养殖过程;同时本研究为厚壳贻贝变态发育调控机制的研究提供有效理论依据。     

Effects of Stocking Density, Salinity, and Light Intensity on Growth and Survival of Southern Flounder Paralichthys lethostigma Larvae

Four separate studies were done on Southern flounder Paralichthys lethostigma larvae during first feeding and metamorphosis to determine the effects of stocking density, salinity, and light intensity on growth and survival. One study used stocking densities of 10, 20, 40, and 80 fish/L during first feeding; the second study compared the growth and survival of larvae stocked at 20 and 33 ppt; and a third experiment evaluated stocking densities of 1/L and 3/L under two different light intensities (1,600 lux vs 340 lux) during metamorphosis. The fourth experiment tested the effects of different salinities (0, 10, 20 and 30 ppt) on larval growth and survival during metamorphosis. Growth and survival (overall 6.9%) were not significantly different ( P > 0.05) for stocking rates up to 80/L. Larvae placed into 20 ppt salinity had survival through first feeding similar to that of larvae raised at 33 ppt. During metamorphosis, light intensity had no effect ( P > 0.05) on growth or survival, but fish stocked at 3/L had significantly lower ( P < 0.05) survival than fish at 1/L. Complete mortality of larvae occurred at 0 ppt. Growth and survival past metamorphosis were not significantly different ( P > 0.05) at 10, 20 and 30 ppt, but unmetamorphosed fish did not survive to day 60 at 10 ppt. Based on these results, practical larviculture of Southern flounder may require a two-step process with high stocking rates (80 fish/L) through first feeding and lower densities (1/L) through metamorphosis. Fingerling production in fertilized nursery ponds might he possible at salinity as low as 20 ppt.     

脂多糖对细菌生物被膜形成及厚壳贻贝幼虫变态的影响

为探究脂多糖(LPS)对海洋细菌生物被膜形成、海洋贝类幼虫变态所产生的作用,本研究使用不同浓度的LPS直接刺激厚壳贻贝幼虫,观察其对幼虫附着变态的直接作用;同时在海假交替单胞菌形成生物被膜的过程中添加不同浓度的LPS,通过分析生物被膜生物学特性的变化,及变化后的生物被膜对厚壳贻贝幼虫附着变态的影响。研究结果显示,3种浓度的LPS均可直接诱导厚壳贻贝幼虫的变态;10 mg/L浓度LPS处理后的生物被膜其细菌密度、膜厚明显降低(p<0.05),胞外产物中多糖(如可乐酸)、脂类显著增加(p<0.05),同时其对幼虫变态的诱导作用也显著提高(p<0.05),因此推测,在厚壳贻贝幼虫的附着变态过程中,LPS具有直接诱导作用;除此之外,脂多糖还可以通过调控生物被膜胞外物质,特别是可乐酸的生成,从而间接影响厚壳贻贝幼虫的附着变态。     

管角螺稚贝对亚硝酸盐耐受力研究

水温29℃时研究了管角螺（Hem ifusus tuba）稚贝[壳高（1.22±0.14）mm]在不同盐度和pH下对亚硝酸盐毒性的耐受力。试验结果表明,pH和盐度越低,亚硝酸盐对稚贝的毒害作用越大。水体pH为6.7、7.3、8.0和8.8时,亚硝酸盐对管角螺稚贝的96 h半数致死质量浓度（LC50）（95%可信区间）分别为188 mg.L-1（167～213 m.gL-1）、213 m.gL-1（195～231 m.gL-1）、254 m.gL-1（231～271 m.gL-1）和304 m.gL-1（284～321 m.gL-1）,相对应的安全质量浓度（SC）为18.8 mg.L-1、21.3 m.gL-1、25.4 mg.L-1和30.4 m.gL-1,pH8.8时亚硝酸盐对稚贝的SC是pH 6.7时的1.6倍;盐度在16、19、23和28时,亚硝酸盐对管角螺稚贝的96 hLC50（95%可信区间）分别为151 m.gL-1（138～178 m.gL-1）、171 mg.L-1（159～192 mg.L-1）、265 mg.L-1（246～282 m.gL-1）和296 m.gL-1（278～323 m.gL-1）,相对应的SC分别为15.1 m.gL-1、17.1 m.gL-1、26.5mg.L-1和29.6 m.gL-1,盐度28时亚硝酸盐对稚贝的SC是盐度16时的近2倍。     

漠斑牙鲆仔鱼、稚鱼和幼鱼对低盐度的耐受力和淡水驯化技术的研究

研究了漠斑牙鲆仔鱼、稚鱼和幼鱼对低盐度的耐受力和漠斑牙鲆的淡水驯化技术。初孵仔鱼在盐度为5的水中最多存活5d,5d以后全部死亡。30日龄稚鱼在4h10min淡水组全部死亡,对淡水的耐受力较低,而盐度为5～25的各组72h的存活率都在95.00%以上。90日龄幼鱼经缓慢淡水驯化9d后存活率可达98%以上,对漠斑牙鲆幼鱼进行淡水驯化的最佳年龄为90日龄。淡水驯化影响幼鱼初期的摄食,以后则逐渐趋于正常;急性淡水驯化对幼鱼的伤害比缓慢淡水驯化大;漠斑牙鲆对低盐的耐受力随生长和发育逐渐增加,年龄是影响幼鱼对低盐度耐受力的主要因素。     

盐度对棘头梅童鱼胚胎发育和仔鱼存活的影响

观察比较了11个盐度梯度[0、5、10、15、20、25、30(自然海水)、35、40、45、50]下,棘头梅童鱼(Collichthys lueidus)胚胎的沉浮情况、孵化时间、孵化率和畸形率,并测定了初孵仔鱼的不投饵存活系数(SAI)。结果表明:(1)棘头梅童鱼胚胎在海水盐度为30及以上时100%漂浮;盐度为25时,95%漂浮,5%悬浮;盐度为20时95%悬浮,5%沉底;盐度为15时95%沉底,5%悬浮;盐度为10及以下时100%沉底。在水温18～20℃的条件下,棘头梅童鱼胚胎在盐度5～40范围内经28～32 h能孵化出仔鱼,盐度对孵化时间影响不显著(P>0.05)。但孵化率和畸形率因盐度不同而有显著差异。综合分析表明棘头梅童鱼胚胎孵化的适宜盐度范围为15～35,孵化最适盐度范围在20～30之间。(2)在可孵出鱼苗盐度范围(5～40)内,棘头梅童鱼仔鱼SAI值为(1.80±0.03)～(11.85±0.02),与卵的孵化率呈正相关关系。仔鱼生存的适宜生长盐度为10～30,最适盐度范围为20～25。     

乐清湾塘养泥蚶的生长

1998年6月至2000年7月对浙江省乐清湾塘养泥蚶的生长进行了详细的观察。刚孵化变态的D形幼虫壳长92-100μm，经10d培育达到180.5-201.5μm，平均每日增长8.9-10.2μm；稚贝附着后16d平均壳长从191.3μm增长到634.1μm，平均每日增长27.7μm；出库稚贝放养于围塘内，培育9个月平均壳长达到8.34mm，成为商品贝苗，平均每月增长0.86mm，其中9－10月份增长可达1.65mm；再经15个月培育达到成品贝，平均壳长28.57mm，平均每月增长1.35mm。泥蚶是一种慢生型贝类。对室内浮游幼虫、稚贝、中间暂养贝苗、成蚶养殖期间的多项生长指标进行测量和称重，获得的相关关系非常显著。