注射白斑综合征病毒对克氏原螯虾酚氧化酶活力的影响

将白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)、大肠杆菌(Escherichia coli)(DH5α)用注射法接种克氏原螯虾(Procambarus clarkii),在0~72 h之间定时检测克氏原螯虾血细胞和肝胰脏中酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)活力变化。结果显示:(1)0.1 mg/m L和1 mg/m L胰蛋白酶处理样品后,样品间差异不显著。(2)加胰蛋白酶处理与未加胰蛋白酶相比,供试克氏原螯虾PO活力均升高。(3)未加胰蛋白酶与加胰蛋白酶表现出相似的特征,WSSV和Ah注射组与对照组相比均表现为,12~48 h PO活力显著高于对照组,并且在48 h达到最大值,72 h时基本恢复正常;注射DH5α组与对照组相比没有显著性变化。可见感染WSSV后,克氏原螯虾体内酚氧化酶活力发生了变化,由此推测,PO参与了螯虾体内抵御病毒的免疫反应。     

氨态氮和亚硝态氮对日本沼虾酚氧化酶活力及血蓝蛋白含量的影响

在水温(24±1)℃下分别测定了日本沼虾暴露在0、2.2、4.2、8.7、17.8、36.6 mg/L氨氮和0、2.0、3.2、5.0、7.9、13.3 mg/L亚硝酸盐后血淋巴中酚氧化酶活力和血蓝蛋白含量的变化。试验结果表明,随着氨氮和亚硝酸盐浓度的升高,酚氧化酶活力先升后降,在氨氮质量浓度为8.7 mg/L、亚硝酸盐质量浓度为5.0 mg/L时,酚氧化酶活力最高。在氨氮质量浓度为2.2 mg/L、亚硝酸盐质量浓度为2.0 mg/L时,血蓝蛋白含量显著高于对照组。日本沼虾血淋巴中酚氧化酶活力和血蓝蛋白含量没有相关性。     

克氏原螯虾酚氧化酶部分生化特性的研究

以克氏原螯虾(Procambarus clarkii)酚氧化酶(PO)为材料,采用L-DOPA为反应底物,分光光度计测定不同温度和pH条件下PO活力,研究克氏原螯虾PO的特性,为其免疫学研究及优化PO准确测定方法提供依据。结果显示PO活力最高时的温度为35℃,低于和高于35℃活力逐渐下降,45℃以上活力迅速下降;0℃仍具有最高活力的24%。在pH4.0～9.5内PO均具有活力,鳃组织最佳pH5.5,血清最佳pH6.5。因此测定克氏原螯虾PO活力的最佳参数为温度35℃,pH5.5(鳃)或6.5(血清)。以上结果说明冰浴终止反应法测定克氏原螯虾PO活力会影响结果的准确性,要慎用。     

铜绿微囊藻对克氏原螯虾幼虾存活及成虾几种酶类的影响

为研究铜绿微囊藻对克氏原螯虾的影响,将克氏原螯虾幼虾及成虾暴露在不同浓度的铜绿微囊藻溶液中,研究了铜绿微囊藻对幼虾存活率、外部形态及肝胰腺超微结构的变化和成虾总血细胞密度(THCs)、血清中血蓝蛋白含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化物酶(POD)、酚氧化物酶(PO)以及鳃丝Na⁺/K⁺-ATP酶活性的影响。结果表明,(1) 高浓度的铜绿微囊藻能显著降低幼虾的存活率。(2) 显微观察表明,1.0×10⁷/mL及以上浓度的铜绿微囊藻液中培养7 d后,幼虾肝胰腺呈现暗红色,并伴有一定的肿大现象,透射电镜显示其肝胰腺细胞受到损伤。(3) 高浓度的铜绿微囊藻能造成应激反应,THCs在暴露1 d后显著升高并稳定在较高水平;血蓝蛋白含量变化不明显,只在5 d时显著低于对照组(P<0.05),PO活性都表现出先显著性增强(P<0.01),回落后又有所增加的波动趋势;血清中的T-SOD活力在1 d后受到抑制,5 d时被激活至较高水平;POD活性都表现出先显著性增强(P<0.01),回落后又有所增加的波动趋势;鳃丝中Na⁺/K⁺-ATP酶活性在暴露1 d后显著降低(P<0.01)后回升,并最终维持在较高水平。研究结果表明,高浓度的铜绿微囊藻能造成克氏原螯虾幼虾存活率显著降低并影响其肝胰腺超微结构;而克氏原螯虾成虾对铜绿微囊藻有相对较强的耐受力,血淋巴的酶学变化表明,暴露在铜绿微囊藻水体的成虾经历过应激反应并有逐步适应的过程。     

氯化铵对“黄海1号”中国对虾免疫相关酶类的影响

在不同浓度氯化铵作用条件下对中国对虾"黄海1号"群体和中国对虾野生群体的存活率, 血清中的溶菌酶(LSZ)、酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)及酸性磷酸酶(ACP)活力变化进行了测定.发现"黄海1号"的24、48和72 h的半数致死浓度(LC50)及安全浓度均高于野生群体;氯化铵浓度为8 mg/L时,"黄海1号"体内的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶活力极显著低于野生群体(P<0.01);氯化铵浓度为16 mg/L时, "黄海1号"体内的溶菌酶活力显著高于野生群体(P<0.05),酸性磷酸酶活力显著低于野生群体(P<0.05);氯化铵浓度为32mg/L时,"黄海1号"体内的溶菌酶、酚氧化酶活力极显著高于野生群体(P<0.01),超氧化物歧化酶活力显著高于野生群体(P<0.05),酸性磷酸酶活力显著低于野生群体(P<0.05);氯化铵浓度为64mg/L时,选育群体"黄海1号"体内的超氧化物歧化酶活力显著高于野生群体(P<0.05);氯化铵浓度为128mg/L时,两群体的各项免疫指标都未出现明显差异.比较发现,随着氯化铵浓度的上升,选育群体中国对虾"黄海1号"几种与抗病力相关的生理指标都表现出了其比野生群体优良的特性.     

高pH胁迫对“黄海1号”中国对虾免疫相关酶的影响

对高pH养殖水体中"黄海1号"中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)群体和野生群体的存活率,血清中的溶菌酶(LSZ)、酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)及酸性磷酸酶(ACP)活力变化进行了测定.经高pH胁迫72 h后检测发现,在pH8.2～8.6,"黄海1号"和野生群体存活率均高于90%,两群体机体表现出一定的应激能力;在pH8.8～9.0时,"黄海1号"及野生群体死亡率都急剧增加,几种免疫相关酶类较在pH 8.6时都有较高幅度的变化,"黄海1号"的死亡率及酶突变程度均小于野生群体;在pH 9.2时,2群体的死亡率及体内的几种免疫相关酶活性变化幅度继续增大,但2群体间差异减弱;在pH 9.4时,两群体中国对虾全部死亡.比较发现,当海水pH在一定的范围内升高时,"黄海1号"免疫能力要高于野生群体.     

泥蚶血清及血细胞免疫功能研究

初步研究了泥蚶(Tegillarca granosa)血细胞离体条件下的吞噬作用以及血清因子对其的影响,并测定经大肠杆菌注射以后,泥蚶血清中抗菌、溶菌、酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)活力的变化。结果表明,泥蚶血清能促进血细胞对大肠杆菌的吞噬,但不能识别鸡红细胞。大肠杆菌激发后泥蚶血清中抗菌活力在1h、15h和30h时实验组均显著高于对照组。溶菌活力实验组均高于对照组,但在15h差异不显著。PO活力实验组均低于对照组,在30h时差异极显著。SOD活力在1h时显著低于对照组,而在30h时显著高于对照组。     

颤藻对凡纳滨对虾生长和免疫相关酶活力的影响

颤藻(Oscillatoria sp.)是对虾养殖水体中的一种常见蓝藻。通过在凡纳滨对虾养殖水体中投加不同浓度的颤藻,测定凡纳滨对虾的成活率与体长、体重,以及不同颤藻浓度下凡纳滨对虾的免疫相关酶活力,研究颤藻对凡纳滨对虾生长和免疫酶活力的影响。结果表明:颤藻对对虾的成活率、体长和体重有显著影响(P<0.05),随藻浓度增加对虾的成活率、体长和体重呈下降的趋势。颤藻对对虾超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、酚氧化酶(PO)、碱性磷酸酶(ALP)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、抗菌活力影响显著(P<0.05),低浓度的颤藻诱导酶活力增大,当浓度大于12.5 mg/L时,其酶活力呈下降的趋势。当颤藻浓度为2.5 m g/L和12.5 mg/L时,GST、ALP活力分别达到最大值(39.05 U/mg、73.62 U/g)。以上研究结果说明,颤藻具有一定的毒性,低浓度的颤藻可诱导酶活性增加,高浓度的颤藻能抑制酶的活性和对虾生长。为了保证凡纳滨对虾的健康养殖,养殖水体中的颤藻浓度应该控制在12.5 mg/L以下。     

强壮藻钩虾对中国明对虾与日本囊对虾生长和抗病力的影响

以强壮藻钩虾(以下简称钩虾)作为中国明对虾和日本囊对虾的天然饵料,以对虾人工配合饲料为对照研究钩虾对中国明对虾和日本囊对虾生长和抗病力的影响。对两种规格的中国明对虾[体质量分别为(0.33±0.0204)g和(2.07±0.184)g,分别记为SF组和MF组]和日本囊对虾[体质量为(0.25±0.018 1)g,记为SM组]分别投喂人工配合饲料和钩虾,养殖35 d。结果显示:(1)与人工配合饲料相比钩虾可以提高MF组和SM组对虾的特定生长率和SM组对虾的成活率;(2)钩虾可以显著提高SF组和SM组对虾血细胞总数(P<0.05);(3)钩虾可以显著提高3组对虾血清总蛋白含量(P<0.05)及SF组和SM组血蓝蛋白含量(P<0.05);(4)钩虾可以显著提高日本囊对虾溶菌酶活力(P<0.05);(5)钩虾可以显著提高FM组和SM组对虾酚氧化酶活力和超氧化物歧化酶活力(P<0.05);(6)钩虾可以显著性提高SF组和SM组对虾血清过氧化物酶相对活力(P<0.05);(7)对虾健康指标总得分与其感染WSSV后的100%致死时间关系密切,两者之间呈现一定的线性关系(R2=0.948 9)。研究结果表明,钩虾与对虾人工配合饲料相比可以促进中国明对虾和日本囊对虾的生长及提高对虾抗病力。     

蛋氨酸铜和硫酸铜在凡纳对虾饲料中的应用效果比较

通过在饲料中分别加入不同浓度(铜元素的添加浓度分别为0、7.5、15、30、45mg·kg-1饲料)的硫酸铜和蛋氨酸铜,比较了硫酸铜和蛋氨酸铜对凡纳对虾生长、血液免疫因子及虾体铜的影响。添加蛋氨酸铜的各实验组生长速度同对照组之间没有显著差异;而添加硫酸铜的各组,只有铜添加量为30mg·kg-1饲料的试验组生长速度显著高于对照组(P<0.05),其它组同对照组之间差异不显著;成活率各组间无显著差异。除了铜添加量为15mg·kg-1饲料的试验组,各试验组对虾血清的酚氧化酶(PO)活力都高于对照组,其中当铜添加量为30mg·kg-1时最强,在此时蛋氨酸铜添加组的PO活力高于硫酸铜;随着铜添加浓度的提高,超氧化物歧化酶(SOD)活力增强,在添加量达到30mg·kg-1饲料时达到最大,此时硫酸铜组和蛋氨酸铜组间无差异,都为507。对虾肌肉中铜的含量各组间无显著差异,为(4.07±1.80)mg·kg-1,个体间差异非常大;肝胰脏中铜的最高含量为210.36mg·kg-1,最低为33.78mg·kg-1(空白对照组),明显高于肌肉中的含量。结果表明,在试验条件下,同硫酸铜相比,蛋氨酸铜没有显著的促生长效果,对肌肉、肝铜含量以及SOD活性没有显著影响。     

南美白对虾和罗氏沼虾血细胞中酚氧化酶活力的比较

对比研究了不同化合物对南美白对虾和罗氏沼虾血细胞溶解上清液(HLS)中酚氧化酶原激活系统(pwPO系统)的激活效果.实验结果表明南美白对虾和罗氏沼虾HLS中proPO系统可以被多种化合物激活.其中实验用内源性激活剂以LPS的激活作用最强,Laminarin、Zymosan A、β-1,3-1,6-glucan和Peptide的激活效果次之;外源性激活剂中SDS对2种虾都有显著的激活作用,而Trpsin对南美白对虾的激活作用不显著,对罗氏沼虾激活作用显著;金属离子Ca2+和Mg2+对proPO系统都有激活作用,对南美白对虾HLS中PO活力,Ca2+的激活作用随着Ca2+浓度的增加而增强,Mg2+在100 mmol/L时激活作用最强,而对罗氏沼虾HLS中PO活力,Ca2+和Mg2+均在20 mmol/L时激活作用最强.     

盐度突变对凡纳滨对虾非特异性免疫因子的影响

研究了盐度对凡纳滨对虾非特异性免疫因子的影响。结果表明,盐度突变对凡纳滨对虾非特异性免疫因子的影响是显著的。研究结果表明,盐度突变组(30～27、30～24、30～21、30～18和30～15)血细胞内O2-产量呈先升后降的趋势;酚氧化酶(PO)活力升高,盐度突变组显著高于对照组(P<0.05);盐度突变组SOD活性显著低于对照组(P<0.05);血清蛋白含量逐渐降低,对照组显著高于盐度突变组(P<0.05)。     

左旋咪唑对罗氏沼虾免疫功能及抗病力的影响

以0(对照)、50、100和150 mg/kg饲料的剂量将左旋咪唑(LMS)添加于基础饲料中制成颗粒饲料投喂罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)14 d,采样测定了罗氏沼虾血细胞吞噬活性、血清酚氧化酶(PO)、溶菌酶(LSZ)及超氧化物岐化酶(SOD)活性,并以6×105cells/mL浓度的致病性嗜水气单胞菌(Aerom onas hydrophila)对罗氏沼虾进行肌肉注射(20μL/尾),记录接种7 d后罗氏沼虾的累积死亡率。结果表明,3个LMS处理组的罗氏沼虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清PO、LSZ及SOD活性均显著地高于对照组(P<0.05);LMS处理组的罗氏沼虾对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。因此,饲喂适量的LMS能促进罗氏沼虾的免疫力和抗病力;在本试验条件下,100 mg/kg饲料的剂量为最适添加剂量。     

虫草菌粉对罗氏沼虾免疫功能的影响

罗氏沼虾饵料中添加0．5％虫草菌丝，罗氏沼虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清溶菌酶活力及酚氧化酶活力均显著提高。经嗜水气单胞菌攻毒后，试验组的免疫保护率也明显提高。试验证明，口服虫草菌粉可显著地提高罗氏沼虾的免疫功能，有效地预防嗜水气单胞菌的感染。     

盐度升高对中华绒螯蟹几种非特异性免疫因子的影响

采用逐步增盐法, 结合生物酶学测定, 研究了从淡水升高盐度到 7、14、21、28和35对二秋龄雌、雄中华绒螯蟹血清总蛋白、氧合血蓝蛋白含量及碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)活力的影响。结果显示, 随着盐度的升高, 中华绒螯蟹的血清总蛋白、氧合血蓝蛋白含量逐渐降低; AKP活性先略升高, 而后逐渐降低; 与雄蟹的PO活力逐渐降低相比, 雌蟹的PO活力先降低, 当盐度高于21后维持稳定水平; SOD活性先略降低, 盐度高于21被激活。除SOD外, 雌蟹血清各测定指标均显著高于雄蟹(P<0.05)。研究结果表明, 盐度接近或超过28将显著影响中华绒螯蟹3种免疫酶的活性及总蛋白和氧合血蓝蛋白的含量, 进而影响其免疫防御能力。     

饲料中益生菌对凡纳滨对虾生长、肠道菌群及部分免疫指标的影响

以初体质量为(0.11±0.00)g的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,在室外水泥池进行10周饲喂实验,研究饲料中添加单一益生菌和复合益生菌对凡纳滨对虾生长、消化酶、肠道和粪便菌群及部分免疫指标的影响.以基础饲料为对照组,在基础饲料中分别添加地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、虾乐333(复合益生菌)、地衣芽孢杆菌+枯草芽孢杆菌(1:1)、虾乐333+地衣芽孢杆菌+枯草芽孢杆菌(1:1:1)各1 g/kg,配制5种实验饲料.实验结果显示,复合益生菌饲喂组对虾的特定生长率显著高于对照组(P<0.05),而单一益生菌饲喂组与对照组差异不显著(P<0.05).饲料中添加益生菌能使凡纳滨对虾肠道蛋白酶和淀粉酶活力升高,其中复合益生菌饲喂组淀粉酶活力显著高于对照组(P<0.05).与对照组比,饲料中添加益生菌显著降低了肠道及粪便弧菌数(P<0.05),不同程度提高了凡纳滨对虾血清蛋白浓度、酚氧化酶活力、溶菌酶活力和总抗氧化力,其中添加复合益生菌能使血清蛋白浓度及溶菌酶活力较对照组显著提高(P<0.05).上述结果表明,与饲喂单一益生菌相比,复合益生菌对凡纳滨对虾的生长、免疫力具有更好的促进作用.     

亚硝酸盐对茂名海域文昌鱼生长及磷酸酶、酚氧化酶的影响

研究了文昌鱼耐受亚硝酸盐（NO2^-）的极限以及在NO2^-胁迫条件下文昌鱼的体重及磷酸酶、酚氧化酶的变化情况。结果表明，文昌鱼在（25±1）℃温度条件下在96小时时间间隔内耐受NO2^-的LC50为262．98mg／L。在水体NO2^-不超过0．34mg/L时文昌鱼酸性磷酸酶（ACP）较对照组无显著变化（P〉0．05），在浓度为0．24mg/L时碱性磷酸酶（ALP）及酚氧化酶（PO）受显著促进作用（P〈0．05）；当水体NO2^-大于12．07mg，L时，文昌鱼ALP、ACP及PO活性均随水体中NO2^-浓度的增加受显著（P〈0．05）抑制作用。水体浓度达33．44m以时，文昌鱼体重与对照组相比受抑制作用显著（P〈0．05）。     

β-1,3-葡聚糖及其羧甲基衍生物对海湾扇贝免疫功能的影响

对海湾扇贝注射酵母β-1，3-葡聚糖及不同取代度的羧甲基葡聚糖（包括CMG1、CMG2、CMG3和CMG4，取代度分别为0．335，0．556，0．732和0．857），分别于注射后24、48和72h测定血清蛋白含量及血清和血细胞中酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LSZ）活力，比较β-1，3-葡聚糖及羧甲基葡聚糖对扇贝免疫功能的影响。结果显示：1）与对照组相比，葡聚糖组血清蛋白含量无显著变化，CMG2、CMG3和CMG4组注射后48h有显著提高；2）葡聚糖和CMG4可以迅速持久地增加扇贝血清PO活力，CMG的取代度越大，提高血细胞PO活力的能力越强；3）在提高扇贝血淋巴SOD活性作用中，CMG4组效果要优于其余试验组；4）CMG4组注射后24、48h，血清LSZ活力分别有极显著和显著提高，72h后所有试验组与对照组无显著差异，CMG3组注射后24h血细胞LSZ活力极显著增加，CMG4组注射后24、48和72h有显著提高。表明羧甲基化不但提高了葡聚糖的水溶性，而且影响其对扇贝的免疫增强效果，取代度为0．857的CMG4对扇贝的免疫增强效果最为显著。     

水产常用抗菌药物对锯缘青蟹酚氧化酶的影响

研究了喹诺酮类等17种常见抗菌药物对青蟹酚氧化酶的影响。试验结果表明,药物质量浓度为500μg/ml时,所有抗菌药物对青蟹酚氧化酶(PO)均有明显抑制作用;药物质量浓度为5~10μg/ml时(常规使用剂量),庆大霉素、卡那霉素和丁胺卡那霉素等5种药物的PO抑制率为10%~25%;诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星等6种药物的PO抑制率为5%~10%,抑制作用较弱;恩诺沙星和红霉素等4种药物的PO抑制率均小于5%,对青蟹PO无明显影响;低剂量阿维菌素和氟苯尼考对青蟹有免疫促进作用。     

肽聚糖制剂对南美白对虾体液免疫因子的影响

按一定梯度配制5种含不同水平肽聚糖制剂的饲料,投喂南美白对虾(Litopenaeus vannamei),35 d后取实验对虾血样,用于测定血清中酚氧化酶活力、磷酸酶活力、溶菌活力及超氧化物歧化酶活力.结果显示,饲料中肽聚糖质量分数为500×10-6的实验组,对虾血清中酚氧化酶活力最高,肽聚糖质量分数为2 500×10-6的实验组,对虾血清中酸性磷酸酶与碱性磷酸酶活力最高,肽聚糖对对虾的血清溶菌活力影响不明显(P>0.05).由此表明饲料中添加适量(质量分数500×10-6左右)的肽聚糖制剂可使对虾体液免疫因子总体活力达到较高水平,饲料中肽聚糖制剂含量过高对对虾非特异免疫力的作用效果反而不佳.南美白对虾血清中酚氧化酶活力对饲料中肽聚糖含量变化较敏感,可作为肽聚糖使用效果的评价指标之一.