红假单胞菌培养噬菌蛭弧菌的研究

为探索环保型的噬菌蛭弧菌宿主菌菌种，本文用红假单胞菌作为宿主菌进行了培养噬菌蛭弧菌的研究，系统地探索了pH值、缓冲系及温度等环境因子对培养效果的影响。实验表明用红假单胞菌培养噬菌蛭弧菌,其环境影响因子、出斑时间、出斑数量、培养收获浓度等方面均与大肠杆菌无差异，最佳培养条件为25℃～30℃、pH值7．0～8．0、PBS缓冲系、并添加一定量的钙、镁离子，光合细菌中红假单胞菌可完全取代污染菌大肠杆菌培养噬菌蛭弧菌,生产环保型的蛭弧菌制剂，并简化了生产程序。并建立了蛭弧菌的培养采收标准,同时初步提出了一种简易的蛭弧菌浓度的计算方法——裂解系数计算法。     

夏季鲆人工育苗技术研究

1噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的研究历程 1979年，我国首次开展对噬菌蛭弧菌（以下简称蛭弧菌）的研究。研究中发现蛭弧菌对许多动物（包括人体）和植物的致病菌，如霍乱弧菌、不凝集弧菌、伤寒沙门菌、副溶血弧菌、福氏志贺菌及大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、荧光假单胞菌等均具有显著的裂解作用。中国水产科学研究院黄海水产研究所、中国海洋大学、上海水产大学、江苏省海洋渔业研究所等单位的研究证明，蛭弧菌对水生动物养殖中常见的副溶血弧菌、溶藻弧菌等革兰氏阴性菌的裂解率可达97．33％。     

大口鲶病原菌蛭弧菌的分离及其生物学特性研究

从患病南方大口鲶分离得到病原菌N1、N2、N3、N4,以N3为宿主菌,从鱼塘淤泥中分离到三株蛭弧菌。其中蛭弧菌Bd-tw7的宿主菌范围广泛,不仅能降解嗜水气单胞菌、N1、N2、N3、N4等鱼类病原菌,而且能降解大肠杆菌C600、金黄色葡萄球菌等细菌。其在1/10NB双层琼脂平板上形成圆形透明的噬菌斑,最适温度35℃,最适pH为7.5,短杆状,单极生鞭毛。在水体防病试验中,试验组的鱼存活率明显高于对照组(P<0.05)。     

蛭弧菌海水菌株Bdh5221裂解特性及生长影响因子研究

对利用双层琼脂平板法分离纯化获得的蛭弧菌海水菌株Bdh5221裂解特性及生长影响因子进行了初步研究,为其在生物防治上应用提供理论依据。研究结果表明,蛭弧菌海水菌株Bdh5221对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌、迟钝爱德华氏菌等革兰氏阴性菌有较好的裂解作用;对八叠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌等革兰氏阳性菌的裂解能力较弱;对木糖葡萄球菌和啤酒酵母菌不裂解;可在超声波破碎后的G+菌和酵母菌上生长。蛭弧菌Bdh5221在宿主菌浓度106~109cfu/ml下均可正常生长,高浓度宿主菌更有利于蛭弧菌生长;Bdh5221最适生长的pH在7.0~7.5之间,盐度为20~30左右;Bdh5221增殖速度与起始接种浓度影响不大,起始接种浓度101~103pfu/ml下经过5~7d生长可增殖104左右。     

海洋蛭弧菌LBd02-1的分离及其生物学特性的研究

利用海水双层平板法分离获得蛭弧菌LBd02-1,从基因水平上进行鉴定,并对其生物学特性进行了初步研究。研究结果表明,蛭弧菌LBd02-1对嗜水气单胞菌、鳗弧菌、大肠杆菌和霍乱弧菌等革兰氏阴性菌有较好的裂解作用;对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌的裂解能力较弱。以鳗弧菌为宿主菌,探索了不同条件(温度、盐度、Ca2+、Mg2+)下蛭弧菌LBd02-1对鳗弧菌的裂解效果。试验结果表明,蛭弧菌LBd02-1在温度为25~30℃.盐度为10~30时,对鳗弧菌的裂解效果较佳;在Ca2+浓度为5~10 mmol/L、Mg2+浓度为0.5~2 mmol/L时,蛭弧菌LBd02-1的裂解能力也较好。     

噬菌蛭弧菌对草鱼池水质及细菌群落的影响

研究了噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)对草鱼池水质及细菌群落的影响.结果表明,噬菌蛭弧菌对养殖环境的主要水化指标具有明显的改善作用,试验组的平均COD、NH3-N、硫化物显著低于对照组(P<0.05),试验组的DO显著高于对照组(P<0.05),而试验组与对照组的pH值差异不显著(JP>0.05);池水细菌总数及致病菌的数量也随着噬菌蛭弧菌浓度的增加而发生儿何级数减少.     

3株噬菌蛭弧菌裂解特性及在水体中的应用研究

对从海水中分离的3株噬菌蛭弧菌Blb-1、Blb-2、Blb-3在不同条件下的裂解特性进行了初步研究,并进行了Blb-2裂解水体哈维氏弧菌的应用试验。结果表明,3株菌在盐度为0~30时均能良好生长,具有广盐性;3株菌对灭活后的宿主菌具有更强的裂解作用,形成噬菌斑的时间普遍提前,且噬菌斑较大;3株蛭弧菌的裂菌谱试验以及不同蛭弧菌菌龄的裂解效果试验表明,3株菌对气单胞菌属和弧菌属细菌均有很好的裂解能力,而对水产益生菌芽孢杆菌、乳酸菌等裂解能力很弱;应用试验表明,噬菌蛭弧菌对水体中的哈维氏弧菌具有较强的的清除能力。     

噬菌蛭弧菌——水产动物病害生物防治的新工具

噬菌蛭弧菌(以下简称蛭弧菌)是一类专门以捕食细菌为生的寄生性细菌,具有独特的裂解细菌的生物学特性,虽然我国对蛭弧菌的研究滞后于国外,但是利用它作为养殖水体环境中的天然生物改良剂和“活性抗生素”,仍然具有广阔的发展前景。从蛭弧菌的研究历程、蛭弧菌生物学特性包括其分布、宿主范围、生活周期、保藏、噬菌条件、除菌效果、安全性等方面,剖析了研发中存在的问题,进一步提出了研究的方向。     

噬菌蛭弧菌的研究及应用⑧噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的研制、应用及生态效应

1 噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的研究历程 1979年,我国首次开展对噬菌蛭弧菌(以下简称蛭弧菌)的研究.     

噬菌蛭弧菌对乌鳢养殖水质的影响

为了探讨噬菌蛭弧菌制剂净化水质和病害防治的效果,试验以0.75 mL/m2的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度为1.0×108pfu/mL的噬菌蛭弧菌制剂,观察7 d内养殖池的pH、DO、NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数等主要水质指标以及乌鳢死亡数目的变化。向乌鳢养殖池加入噬菌蛭弧菌后,试验组与对照组相比,NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数明显减少(p<0.05),DO明显增大(p<0.05),但pH变化不明显(p>0.05);乌鳢死亡率也明显减少(p<0.05)。试验结果表明,以0.75 mL/m2的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度1.0×108pfu/mL的噬菌蛭弧菌制剂,有利于提高DO含量及乌鳢存活率,降低NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数。     

我国对噬菌蛭弧菌的研究（五）

4.3蛭弧菌在自然水（或土壤）中的分布及数量调查 我们自1979年以来先后7次在江苏、山东、北京和安徽等31个市、县258处共采水（泥）样325份,以El Tor霍乱弧菌、福氏志贺菌、副溶血弧菌、大肠杆菌为宿主菌进行检查,在任一宿主菌上出现噬菌斑者为阳性结果,共检出阳性254份（78.15%）。如样品中加宿主菌培养增殖后再以自来水宿主双层平板检查,则阳性率均有明显提高。     

海水蛭弧菌分离纯化方法初步研究

蛭弧菌(Bdellovibrio)广泛存在于自然水体,它具有噬菌的特性,对水体中细菌数量控制具调节作用,有可能是进行生物防治的一种重要生物。本文比较不同分离方法、上层培养基营养盐浓度和富集培养与直接培养等对海水蛭弧菌分离、计数的影响,从而建立了海水蛭弧菌分离和纯化的方法。应用无营养盐的海水双层琼脂平板法,采用6种宿主菌分别对海南4份海水样品进行计数检测,发现不同宿主菌所得到的蛭弧菌数量不同,同时对分离纯化到的3株海水蛭弧菌进行液体培养增殖,进一步检验了海水双层琼脂法的可靠性。     

1株嗜水气单胞菌的拮抗菌鉴定及其特性研究

从池塘养殖的团头鲂(Megalobrama amblycephala)肠道中分离筛选出15株嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)拮抗菌,其中菌株S24在平板贴片试验中对供试的嗜水气单胞菌菌株具有稳定和较高的拮抗作用。综合形态学观察、生理生化指标检测及分子序列(16S rDNA,gyrB)分析,将菌株S24确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。拮抗菌S24和嗜水气单胞菌(菌株43)的共凝集率为(36.0%±4.3%)。共培养试验可见拮抗菌S24能明显抑制嗜水气单胞菌43的增殖;共培养18 h时,嗜水气单胞菌43的细胞数量达到最低。试验结果表明,拮抗菌株S24适宜作为潜在防治嗜水气单胞菌病的益生菌。     

神克隆菌在河蟹养殖中的应用

神克隆菌主要组成为噬菌蛭弧菌 (Bdellovibrio bacteriovorus)， 1962年 Stolp等发现了该类菌，有噬细菌病毒的作用。它寄生和裂解细菌的生物特性引起了人们的极大兴趣和关注。 30多年来，许多国家和地区对该类菌进行了广泛而深入的研究，研究证明噬菌蛭弧菌对沙门氏菌、志贺氏菌属、变形杆菌属、埃希氏菌属、假单胞菌属、欧文氏菌属、弧菌属中的大部分菌株均有很强的裂解能力。可改善养殖的生态环境，消除有害病菌的滋生场所，降低养殖品种病害的发生率。我们将噬菌蛭弧菌应用于河蟹的养殖，取得了令人满意的效果。 　　一、材料与方法 　…     

牙鲆腹水病病原免疫血清的制备和纯化试验研究

用迟钝爱德华氏菌免疫家兔,制备出高效价迟钝爱德华氏菌免疫血清.先制备迟钝爱德华氏菌抗原, 耳缘静脉注射免疫家兔.经微量反应板法检测血清效价, 效价达到1 ∶ 2560;用Millipore Montage抗体纯化试剂纯化抗体,纯化的抗体经SDS-PAGE电泳,杂带较少,条带主要集中于50 kD处;用斑点酶联免疫吸附试验检测时, 迟钝爱德华氏菌呈阳性, 温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、腐败希瓦氏菌、产碱普罗威斯登菌、阪崎肠杆菌和大肠杆菌均呈阴性.试验结果表明,特异、高效价的迟钝爱德华氏菌免疫血清,为快速检测牙鲆腹水病病原奠定了基础.     

鳗鲡肠道蛭弧菌的分离及其对水产动物细菌性疾病的预防作用研究

以多发性水产动物疾病的病原菌嗜水气单胞菌为宿主，从鳗鲡肠道中分离到一株噬菌力较强的蛭弧菌，命名为Bdm4。通过光学显微镜、相差显微镜和电子显微镜对蛭弧菌Bdm4进行革兰氏染色观察显示，蛭弧菌Bdm4为短杆状和长杆状的革兰氏阴性细菌，其大小约为0．3—0．4μm×1．2～1．5μm；菌有单根的极生长鞭毛。Bdm4对试验所选取的多种海淡水致病菌均有较强的裂解能力，而对所选用的益生菌则不能裂解；且其在鱼体表、鳃和肠道中能有效地消减致病菌，抑制致病菌的繁殖，同时有利于肠道乳酸杆菌数量的增长。     

噬菌蛭弧菌在水产养殖应用中存在问题及对策

噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)属蛭弧菌科,是一类寄生于其他细菌体内并能导致其裂解的细菌。1962年,美国科学家Stolp和Petzold从菜豆叶烧病假单胞菌中首次发现噬菌蛭弧菌,它一般比     

嗜水气单胞菌拮抗菌甲基营养型芽孢杆菌WM-1发酵条件优化

为优化嗜水气单胞菌拮抗菌——甲基营养型芽孢杆菌WM-1的发酵条件,获得抑菌物质产生的最佳培养基配方和培养条件,本实验以嗜水气单胞菌为指示菌,以发酵上清液的抑菌活性为检测指标,采用单因素和正交实验设计,对菌株WM-1的发酵条件进行优化。结果显示,菌株WM-1最适发酵培养基为可溶性淀粉1.0%、牛肉膏1.5%、硫酸镁0.07%、磷酸氢二钾0.05%;最佳发酵条件为初始pH 7.5、培养温度30°C、装液量20%、摇床转速210 r/min、培养时间48 h。在最适培养基和最佳发酵条件下,菌株WM-1发酵液抑菌圈直径达(22.5±0.50)mm,抑菌活性比优化前提高了40.6%。本研究为嗜水气单胞菌的防治提供了新的材料、为甲基营养型芽孢杆菌应用于嗜水气单胞菌的生物防控提供了理论基础。     

粘帚霉对几种水生生物有害菌的抑制作用测定

采用对峙培养法测定了粘帚霉16株菌株对嗜水气单胞菌、耶耳森菌、鳗弧菌、褐藻酸降解菌-MA10和褐藻酸降解菌-MB16的作用。试验结果表明,粘帚霉中NCH-3-1、YJS-3-2、GJ-1-1、SS-1-1、SHW-2-1、SHW-1-1、BD-2-2 7株菌株对供试的5种有害菌表现出较强的抑制作用。     

蛭弧菌及其在水产养殖动物疾病防治中的应用(连载二)

<正>三、蛭弧菌在水产养殖业的应用前景目前,蛭弧菌已在我国商品化生产,并在水产养殖业中广泛应用。其主要生产单位和产品有:宝来利来(泰安)兽药饲料公司的淡水水产动物专用噬菌26(噬菌蛭弧菌溶液),广东省新的生物工程研究所有限公司的复合噬菌蛭弧菌,南京(香港)威力克生物有限公司的鱼虾宝、蟹宝、鳝宝、蛙宝、鳗鱼宝、虾宝,南京福润德动物药业有限公司的三联噬菌皇(水产动物专用),SPSinc.燕金科技发展有限公司的百得菌、噬菌