响应面法优化长茎葡萄蕨藻多糖提取工艺及抗氧化活性

为了探究提取长茎葡萄蕨藻多糖的最优工艺及抗氧化活性，对目前已有的多糖提取方法进行筛选，并采用单因素实验和响应面实验的方法，对料液比、提取温度、提取时间、木瓜蛋白酶添加量和提取次数这5个因素进行优化。结果显示，添加木瓜蛋白酶提取长茎葡萄蕨藻多糖的方法最高效便捷，且当料液比1∶40，提取温度50 ℃，提取时间3 h，提取次数2次，以及木瓜蛋白酶添加量为2.0% 时，长茎葡萄蕨藻多糖提取率相对较高，可达到41.24%±0.09%。进一步的实验结果显示，长茎葡萄蕨藻多糖对DPPH和ABTS自由基均具有良好的清除活性，其IC₅₀值分别为2.32和0.67 mg/mL。研究表明，使用优化后的木瓜蛋白酶酶解法能有效提高长茎葡萄蕨藻多糖的提取率，且长茎葡萄蕨藻多糖具有良好的抗氧化活性。本研究可为长茎葡萄蕨藻多糖的开发利用提供理论基础和参考依据。     

响应面优化沙蚕抗氧化物的超高压提取及其抗氧化活性研究

为了探讨超高压提取条件对沙蚕提取物中总酚含量的影响,采用超高压提取技术对双齿围沙蚕的抗氧化活性物质进行提取,比较不同提取条件(料液比、提取压力、提取时间及提取温度)对沙蚕提取物中总酚含量的影响,在单因素试验的基础上,采用3因素3水平的2次响应面法优化超高压提取工艺参数。结果表明,超高压提取沙蚕总酚的最佳工艺参数为:料液比1∶40(m/v,g/m L),提取压力378.72 MPa,提取时间28 min,提取温度20℃,在此提取条件下沙蚕提取物的总酚含量为8.39μg/mg干基,其清除超氧阴离子自由基、羟自由基及DPPH自由基的IC50(半数抑制浓度)分别为40.13、212.41及2.00 mg/mL。沙蚕超高压提取物具有很强的抗氧化活性。     

几种海藻多糖抗氧化活性及体外抗脂质过氧化作用的研究

为了探讨不同海藻多糖抗氧化活性的差异,对琼枝(Betaphycus gelatinae)、石莼(Ulva lactuca)、匍枝马尾藻(Sargassum polycystum)、南方团扇藻(Padina australis)和棒叶蕨藻(Caulerpa sertularioides)的粗多糖的自由基清除及脂质过氧化抑制能力进行了研究。结果表明,5种海藻多糖的抗氧化活性存在明显的差异性,南方团扇藻和匍枝马尾藻多糖具有较强的还原力,对超氧阴离子和羟自由基均有较强的清除活性,其中南方团扇藻多糖对超氧阴离子清除活性较强[半抑制浓度(IC_(50))为(262.00±24.60)μg·m L~(-1)],明显高于匍枝马尾藻多糖[IC_(50)=(458.00±18.70)μg·m L~(-1)],对羟自由基的清除活性[IC_(50)=(388.00±45.29)μg·m L~(-1)]与匍枝马尾藻多糖相近[IC_(50)=(312.04±37.42)μg·m L~(-1)],匍枝马尾藻多糖对DPPH的清除能力[IC_(50)=(95.80±7.48)μg·m L~(-1)]显著高于其他4种海藻多糖,而南方团扇藻多糖对DPPH的清除能力较差[IC_(50)=(726.00±54.90)μg·m L~(-1)]。通过体外抗脂质过氧化作用研究发现,南方团扇藻多糖对肝细胞膜脂质氧化有较高的抑制能力[IC_(50)=(283.67±44.14)μg·m L~(-1)],并且对过氧化氢诱导的红细胞溶解有一定的保护能力[IC_(50)=(335.50±22.47)μg·m L~(-1)]。     

舌状蜈蚣藻蛋白质的提取及其抗氧化活性研究

该研究以舌状蜈蚣藻(Grateloupia livida)为原料,以蛋白质提取率为指标,探究不同破壁技术对舌状蜈蚣藻蛋白质的提取效果,并通过单因素分析和正交试验对超声波辅助水提法进行工艺优化,所得蛋白质经硫酸铵盐析法粗提纯后考察其体外抗氧化能力。结果显示,溶胀法、反复冻融法、珠磨法的最高蛋白质提取率分别为(29.66±0.86)%、(24.52±0.04)%、(26.52±0.79)%,均低于超声波辅助水提法;超声波辅助水提法提取舌状蜈蚣藻蛋白质的最佳工艺为:液料比160 mL·g^?1,超声全程时间60 min,超声功率1440 W,pH 6.0,此条件下蛋白质提取率可达58.16%;舌状蜈蚣藻粗蛋白质量浓度在1~8 mg·mL^?1内均具有较强抗氧化活性,其质量浓度为8 mg·mL^?1时的还原力为0.43±0.01,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的半数清除浓度(IC50)为4.00 mg·mL^?1,对2,2'-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)自由基的IC50为3.96 mg·mL^?1。     

蜈蚣藻多糖纯化及抗氧化作用的研究

采用热水浸提法提取蜈蚣藻多糖,通过对超氧阴离子（·O2-）、羟基自由基（·OH）清除效果的研究,评价了蜈蚣藻多糖的体外抗氧化活性,以及对蛋白脱除率和多糖损失率的分析,比较了TCA法和Sevage法脱蛋白的效果,利用Sephadex G-150柱纯化蜈蚣藻多糖,并分析了其部分理化性质和相对分子质量分布.结果表明,蜈蚣藻多糖对·OH清除率的IC50为4.62 mg/mL,对·O2-清除率的IC50为0.62mg/mL,具有体外抗氧化效果;Sevage法脱蛋白效果优于TCA法,蛋白脱除率达85.55％,多糖损失率为15.93％;蜈蚣藻多糖是一种以多糖为主、含有糖蛋白的复合物,其相对分子量的分布范围在3.5×105 ～1.2 ×105 Da.     

鳕鱼鱼鳔抗氧化肽制备工艺研究

本研究以鳕鱼(Gadus morhua)鱼鳔为原料，选用6种不同蛋白酶对其进行酶解，通过比较酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除能力，筛选出最佳蛋白酶为复合蛋白酶。通过单因素实验与响应面优化实验，确定最佳提取工艺：酶解时间为6 h、pH为7.21、温度为58.56℃、酶添加量为200 U/ml。研究结果显示，DPPH自由基清除率为61.1%，与理论值62.0%接近。鳕鱼鱼鳔肽体外清除自由基能力实验发现，酶解产物对羟基自由基与超氧阴离子自由基具有一定的清除能力，同时，具有较好的亚铁离子螯合能力。体外模拟胃肠消化后多肽的抗氧化活性变化，结果显示，体外模拟消化产物水解度有增加，对自由基的清除能力与亚铁离子螯合能力有一定的下降，其可能原因为，经模拟胃肠消化后多肽的结构发生一定的变化，导致了抗氧化活性的变化。     

金枪鱼鱼骨胶原肽的制备及抗氧化活性研究

为制备金枪鱼鱼骨胶原肽,并对其抗氧化活性进行研究,利用酶解、超滤、凝胶色谱和反相高效液相色谱制备抗氧化胶原肽,采用氨基酸序列分析仪测定其氨基酸序列,利用质谱(ESIMS)确定其分子量,采用羟自由基、DPPH自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基清除实验和脂质过氧化抑制实验对胶原肽抗氧化能力进行评价。结果显示,金枪鱼鱼骨胶原蛋白经胃蛋白酶和胰蛋白酶2步酶解和分离纯化得到1个十肽(TFCH-P2),经氨基酸序列分析和质谱(ESIMS)确定其氨基酸序列为Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Glu-Gln-Gly(GPAGPAGQEG),分子量为839.87 u([M+H]+840.68 u)。体外抗氧化实验结果表明,GPAGPAGQEG对羟自由基(EC500.18 mg/mL)、DPPH自由基(EC500.97 mg/mL)、ABTS自由基(EC500.52 mg/mL)和超氧阴离子自由基(EC500.38 mg/mL)具有良好的清除作用;GPAGPAGQEG亦显示出良好的脂质过氧化抑制作用。研究表明,胶原肽GPAGPAGQEG抗氧化活性良好,可以用于抗氧化相关的功能食品、药物或者食品添加剂。     

响应面优化红毛藻多糖提取工艺及抗光氧化活性

采用纤维素酶、果胶酶辅助提取红毛藻多糖,通过单因素试验分别考察pH、酶活性、酶解温度、酶解时间等关键因素对红毛藻多糖提取率的影响,并对多糖的抗光氧化活性进行探究。以单因素试验为依据选择因素水平,以多糖提取率为指标,基于Box-Behnken中心组合试验和Design-Expert 8.0.5软件,进行三因素三水平响应面法优化红毛藻多糖提取工艺,并测定红毛藻多糖对人皮肤成纤维细胞的抗光氧化损伤作用。试验结果显示,酶辅助提取红毛藻多糖的优化工艺条件为:选用果胶酶,pH 6.0、酶活性0.22 U/mL、酶解时间100 min、酶解温度50℃。优化条件下红毛藻多糖提取率为(16.60±0.13)%,接近预测值(16.72%),此优化工艺切实可行。同时,红毛藻多糖在0～200μg/mL质量浓度范围内具有抗人皮肤成纤维细胞光氧化损伤能力,当多糖质量浓度为10～20μg/mL时,细胞活力可恢复至96.53%～98.49%。     

牡蛎酶解液的抗氧化活性

检测了牡蛎(Crassotera gigas)木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性。由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析牡蛎酶解液,得到具抗氧化活性组分的分子量分布。分子量为1191 D和826 D左右的木瓜蛋白酶酶解活性肽组分的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.184 mg/mL和0.673 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别为53.6%和66.5%;分子量分别为1074 D和735 D左右的中性蛋白酶酶解活性肽的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.166 mg/mL和0.830 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别57.6%和70.5%。HPLC分析结果表明,木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的活性肽组分分别由几种抗氧化肽组成。抗氧化活性最强的木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的肽组分在质量浓度为2.5 mg/mL时,活性分别可达83.6%和80.8%。用牡蛎原浆与各酶解液灌胃昆明小白鼠。研究结果表明,用木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解原液及经超滤纯化的酶解液对小白鼠实施灌胃,其肝脏组织的SOD活力都显著提高(P<0.05);灌胃经超滤纯化的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液,小白鼠肝脏组织GSH-PX活力、GSH含量显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。     

琼胶寡糖体外清除自由基活性的研究

在不同条件下对琼胶进行酸水解,得琼胶寡糖A1(以二、四糖为主)和A2(以己糖、辛糖为主)采用化学发光法和DPPH体系分别研究A1、A2对O2·-、·OH和DPPH3种自由基的清除作用。结果表明,A1、A2对3种自由基都有较好的清除作用,而且清除活性随糖浓度的增加而加强。在O2·-体系中,A2的IC50为0.54mg/mL,效果要好于A1(IC50为0.8mg/mL)。在·OH体系中,A2对·OH的清除作用比A1效果好,IC50分别为1.2和2.3mg/mL。2个体系比较发现A1、A2对O2·-的清除作用高于对·OH的清除作用。在DPPH体系中,A1、A2对DPPH有一定的清除,但A1较A2效果好,IC50分别为4和6 4mg/mL。由此可见,琼胶寡糖在不同体系中清除自由基的活性不同。琼胶寡糖在抗氧化方面具有很好的应用价值。     

黄缘盒龟肉的酶解工艺优化及其体外抗氧化活性研究

龟类不仅营养价值高,而且具有潜在的药用价值,通过研究龟肉酶解产物的功能特性,可以科学认识其营养保健功能.以黄缘盒龟肉为原料,羟自由基清除率为指标,碱性蛋白酶为水解酶,通过正交试验L9(34)得到制备抗氧化肽的最佳酶解条件为pH值8.0、酶解温度55℃、料液比1.5∶20 g/mL、加酶量(酶/底物,E/S)3.0％、酶解时间3h,酶解液对羟自由基清除率达到82.08％.酶解产物体外抗氧化活性的结果表明,酶解产物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基和过氧化氢均有较好的清除作用,还具一定的还原能力、亚铁离子螯合能力和亚油酸自氧化抑制能力.总体而言,黄缘盒龟酶解产物在不同的体外抗氧化体系中均表现出一定的抗氧化效果,具有良好的开发利用前景.     

大眼金枪鱼头蛋白酶解物1 ku超滤组分的抗氧化活性及其理化性质

研究大眼金枪鱼头蛋白酶解物1 ku超滤组分体外的还原力、自由基清除能力及对衰老小鼠体内抗氧化能力的影响,分析1 ku超滤组分的一般成分、氨基酸组成及分子量分布,为进一步分离纯化金枪鱼头抗氧化肽提供基础。体外结果显示,1 ku超滤组分对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH自由基的清除活性随浓度的增加而增强,IC50分别为1.38、0.73与0.93mg/mL,还原力也随浓度的增加而增大,在浓度为12.5 mg/mL时为0.763;体内结果显示,灌胃30 mg/kg的1 ku超滤组分连续42 d,D-半乳糖致衰老小鼠肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性、肝组织和血清的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性显著提高(P<0.05),血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01);理化分析结果显示,1 ku超滤组分(干基计)蛋白质含量为96.40%,脂肪0.11%,灰分4.86%,疏水性氨基酸占氨基酸总量的35.8%,活性组分分子量在1 802~2 519 u和422~922 u。     

4种海藻膳食纤维清除自由基的比较研究

采用羟基自由基体系、超氧阴离子自由基体系、烷基自由基引发的亚油酸氧化体系和DPPH体系对江蓠(Gracilaria)、麒麟菜(Eucheuma)、马尾藻(Sargassum)、海带(Laminaria)4种膳食纤维清除自由基的活性进行研究。结果表明，在羟基自由基体系中，江蓠、麒麟菜、马尾藻、海带4种膳食纤维的IC50分别为5．2mg／mL、5．5mg／mL、4．4mg／mL和4．1mg/mL；在超氧阴离子自由基体系中，江蓠、麒麟菜膳食纤维的IC50分别为4．8mg/mL和5．3mg/mL，而马尾藻、海带膳食纤维的最高清除率分别为36％和42％；在烷基自由基引发的亚油酸氧化体系中，江蓠、麒麟菜膳食纤维的最高清除率分别为36％和26％，马尾藻、海带膳食纤维的IC50分别为4．1mg/mL和3．5mg/mL；在DlPIH体系中，江蓠、麒麟菜、马尾藻膳食纤维的最高清除率分别为31％、11％和26％，海带膳食纤维的IC50为6．2mg/mL。在各体系中，与相应的专一性阳性参照物对比，证明这4种海藻膳食纤维对自由基有一定的清除作用。     

二种海胆性腺的脂质组成及其抗氧化活性

为分析马粪海胆和光棘球海胆性腺的脂质组成和抗氧化活性，采用核磁共振和气相色谱—质谱技术对2种海胆性腺油脂的脂质成分和脂肪酸组成进行分析，并通过DPPH自由基清除法、羟基自由基清除法和超氧阴离子自由基清除法对其脂质的抗氧化活性进行研究。结果显示，马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质均以甘油三酯和磷脂为主，胆固醇、胆固醇酯和游离脂肪酸含量较低。马粪海胆和光棘球海胆性腺总脂富含C20:4n-6和C20:5n-3，且二者总量分别占脂肪酸含量的35.88%和34.98%；同时2种海胆性腺的中性脂和极性脂的脂肪酸组成存在较大差异，中性脂以C14:0和C16:0等饱和脂肪酸为主，而极性脂以C20:4n-6和C20:5n-3等多不饱和脂肪酸为主。马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均具有较好的清除能力，DPPH自由基IC₅₀分别为2.75和1.98 mg/mL，羟基自由基IC₅₀分别为0.33和0.29 mg/mL，超氧阴离子自由基IC₅₀分别为0.33和0.31 mg/mL。研究表明，马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质具有较高的营养价值和抗氧化活性，可作为C20:4n-6、C20:5n-3和磷脂等功能性脂质因子的重要膳食来源。     

虾夷扇贝内脏多糖的提取及清除羟基自由基作用的研究

通过正交试验确定最佳提取条件为:温度50℃,pH 8.0,加酶量0.25%,料液比1∶45,提取时间2.5 h;最佳条件下提取的虾夷扇贝内脏多糖具有清除羟基自由基的能力。试验结果表明,6.5 mg/m l虾夷扇贝内脏多糖对羟基自由基的清除率可达84.75%。     

刺参蛋白胰蛋白酶解产物生物活性的研究

用胰蛋白酶对刺参蛋白进行水解,研究其酶解液所具有的抗氧化活性及其对肠道菌群的作用。通过测定刺参蛋白酶解液清除DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基、Feton体系产生的羟基自由基和邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基的能力。同时,研究了刺参蛋白酶解液体外对肠道菌群生长的影响。结果表明,刺参蛋白胰蛋白酶解液具有抗氧化活性和促进乳酸杆菌生长、抑制大肠杆菌和产气杆菌生长的作用。     

蜈蚣藻多糖提取工艺优化

以蜈蚣藻粗多糖产率为指标,比较分析了水提、碱提、酶解法及微波辅助提取等提取粗多糖的方法;以蜈蚣藻多糖得率为指标,研究了浸提温度、提取时间及料液比这三个因素对多糖得率的影响,并在单因素实验的基础之上,选取各因素的较优区域,进行三因素三水平的正交试验,确定了蜈蚣藻多糖提取工艺的最优组合.结果表明:热水浸提法提取蜈蚣藻多糖的产率最高,达到55.64％,且其最佳工艺为温度100℃、时间5h、料液比1∶60,按此工艺提取的蜈蚣藻多糖的得率为59.42％.     

31种常见抗菌中药对DPPH自由基清除作用的分析

采用乙醇提取法提取31种常见水产抗菌中草药中的抗氧化活性物质,采用DPPH自由基分析法测定各提取液抗氧化活性的强弱,并与茶多酚进行比较,以分析其对DPPH自由基的清除作用。结果表明,知母、白头翁和五味子3种中草药具有良好的清除自由基的作用。     

复合酶提取牡蛎抗氧化肽的工艺研究

以牡蛎为原料,首先从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中筛选出胰蛋白酶为内切酶,以水解度为指标,得到最佳的酶解工艺条件:时间4h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％(7 500 U/g),水解度为49.50％;同时以水解度为指标,得到外切酶风味蛋白酶的最佳酶解工艺:时间5h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％ (450 U/g),实际水解度50.95％.最后,以清除羟自由基能力和水解度为指标,探讨内切酶(胰蛋白酶)和外切酶(风味蛋白酶)不同复合酶解方式的抗氧化能力.最终确定,复合酶解制备牡蛎抗氧化肽效果最好,其酶解条件为胰蛋白酶为3％(7 500 U/g)、风味蛋白酶加酶量为3％ (450 U/g),pH8.0,时间5h,料水比1∶2,温度50℃时,水解度高达53.94％,体外清除·OH的EC50为0.56 mg/mL.     

大叶藻黄酮对酒精性肝损伤的保护作用

为了深入挖掘大叶藻黄酮(ZF)的生物活性,提高大叶藻的利用价值,本实验研究了ZF对酒精性肝损伤的保护作用;实验采用纤维素酶-超声波辅助复合浸提法提取大叶藻中的天然活性物质黄酮类化合物,并采用聚酰胺树脂柱层析法对其进行纯化;研究ZF的体外抗氧化能力;将60只ICR小鼠随机分成6组,通过建立酒精性肝损伤模型,研究ZF对肝损伤的保护作用;结果显示,经纯化后ZF的含量达到80%。体外实验表明ZF对DPPH自由基和羟基自由基有清除能力,具有一定的抗氧化活性;体内实验表明ZF对酒精性肝损伤小鼠的抗氧化能力、脂质代谢能力以及乙醇代谢能力均有影响。ZF各剂量组与模型组相比,血清ALT、AST和γ-GT活性显著降低,肝组织MDA含量显著降低,乙醇代谢酶活性显著提高;ZF中、高剂量组小鼠肝组织GSH-Px和SOD活性显著提高,血脂浓度显著降低。长期过量饮酒可导致小鼠肝脏严重损伤,ZF可以改善小鼠肝组织损伤情况,对酒精性肝损伤起到保护作用,其机制可能与增强机体抗氧化能力、调节脂质代谢和乙醇代谢能力有关。