斑马鱼chac1基因的表达特征及其在髓系造血中的功能研究

为探索chac1基因(ChaC glutathione specific gamma-glutamylcyclotransferase 1)在早期胚胎发育中的功能，本研究以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象首先分析了斑马鱼Chac1蛋白的序列特征并用qRT-PCR检测了chac1在斑马鱼胚胎不同发育阶段和成鱼不同组织中的表达模式，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在chac1基因的三个外显子上设计了3条sgRNA并通过测序及qRT-PCR检测其敲除效率。苏丹黑染色3 dpf(days post fertilization)野生型和chac1突变型斑马鱼幼鱼的中性粒细胞数量；qRT-PCR检测突变斑马鱼髓系造血相关因子。结果显示：chac1是母源基因，在受精后0～3 hpf(hours post fertilization)时其表达量较高，之后随着母本基因的影响逐渐变小，chac1的mRNA表达量下降；在斑马鱼成鱼中，其在肌肉、卵巢、脑中高表达；此外，突变型斑马鱼较野生型斑马鱼相比，其苏丹黑染色阳性信号更多；chac1突变后髓系造血转录调控因子pu.1的mRNA水平上调。综上...     

斑节对虾细胞周期蛋白Y基因克隆与原核表达

为了研究细胞周期蛋白Y(cyclin Y)在斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢发育中的作用,从斑节对虾转录组数据中筛选获得cyclin Y基因部分序列,采用SMART-RACE方法克隆得到斑节对虾细胞周期蛋白Y(Pm-cyclin Y)基因c DNA全序列。Pm-cyclin Y基因c DNA全长1576 bp,其中包含108 bp的5′非编码区(5′UTR)和439 bp的3′非编码区(3′UTR)以及1029 bp的开放阅读框(ORF),可编码342个氨基酸。生物信息学分析显示,其编码的氨基酸序列有1个保守的周期蛋白框(cyclin box)同源结构域(172~257 aa),预测的分子量约为37.6 k D,理论等电点6.64。实时定量PCR显示其m RNA在卵巢的表达量显著高于其他组织(P0.05);并且在卵巢5个不同发育期都有表达,在III期卵巢中的表达量最高。本研究通过原核表达方法对Pm-cyclin Y进行重组表达,为其蛋白质功能方面的研究奠定了基础。     

太湖似刺鳊鮈染色体组型分析及细胞核DNA含量

采用PHA、秋水仙素碱腹腔或背部肌肉注射，活体培养法，用空气干燥法制片，运用Micromeasure version 3.3染色体分析软件和Photoshop 7.0对似刺鳊鮈染色体数目和核型进行了分析；同时，取似刺鳊鮈血细胞、尾鳍、鳃、肌肉、性腺和肝脏为材料，以鸡血细胞为DNA标准（2.50pg/2c），使用EPICS-XL型流式细胞仪测定了似刺鳊鮈细胞核DNA含量。结果显示：染色体众数2n=50，染色体大小的绝对值为0.86～2.32µm，平均长度为1.63µm，未观察到次缢痕及异配型染色体，亦未发现有随体，核型公式为18m+20sm+8st+4t，NF=88。6个组织细胞核DNA含量分别为：尾鳍3.779 pg/2c，鳃4.007 pg/2c，肌肉3.819 pg/2c，性腺(卵巢4.242 pg/2c、精巢1.842 pg/2c)，肝脏3.905 pg/2c。尾鳍、鳃、肌肉和肝脏的细胞核DNA含量不存在显著差异（p＞0.05），但都极显著高于血细胞DNA含量（p＜0.01）；卵巢细胞核DNA含量约为精巢的2倍。     

滇池金线鲃对椭圆背角无齿蚌寄生效果的研究

滇池金线鲃（Sinocyclocheilus grahami）为云南滇池特有鱼类,选用滇池金线鲃作为椭圆背角无齿蚌（Anodonta woodiana elliptica）的寄生鱼,并对第1次和第2次寄生效果进行分析。结果表明,钩介幼虫主要寄生在鳍条（背鳍、胸鳍、腹鳍和尾鳍）以及鳃丝上,也有少量个体寄生在颌须、鼻瓣膜、...     

星突江鲽的形态特征及内部结构研究

通过观察、测量、解剖、数据的整理和分析，对120尾全长11-43cm，体质量0．02～2．49kg的养殖星突江鲽（Platichthys stellatus Pallas）外部形态、可量可比性状、可数性状和内部结构进行了研究。外部形态包括口、鼻、眼、鳍条、侧线和鳞片的特征；可量可比性状包括全长／体长（T1/S1）、体长／体高（S1/Bd）、体长／头长（S1/M1）、头长／吻长（H1/P1）、尾柄长／尾柄高（C1/Cd）、体长／尾柄长（S1/C1）、头长／眼间距（H1/Ei）、头长／眼径（H1/Ed）比值及其相关方程；可数性状包括背鳍鳍条、尾鳍鳍条、臀鳍鳍条、腹鳍鳍条、胸鳍鳍条、侧线鳞、侧线上鳞、侧线下鳞、牙齿、幽门盲囊、上鳃耙、脊椎骨；内部结构主要包括消化系统的组成和解剖位置。结果表明：（1）外部形态的明显特征在于：背鳍、臀鳍、尾鳍有黑色和黄色相间的条纹；多角星状鳞片，有刺状突起。（2）全长／体长变动范围最小，雌雄差异最小，其线性相关性最好，全长与体长相关方程为S1=0．8771 T1-0．1589（R^2=0．9822）；头长／吻长、头长／眼径不仅变动最大，而且其线性相关性最差，雌雄的差异也最大；星突江鲽体长与体质量关系为：W=0．0168S1^3.199，R^2=0．9797：雄性：W=0．0274S1^2.9721，R^2=0．993；雌性：W=0．0134S1^4.3008，R^2=0．9822（W代表体质量，kg：S1代表体长，cm）。（3）星突江鲽腹鳍鳍条与幽门盲囊最稳定；侧线鳞和牙齿变动最大。（4）牙尖锐，圆锥形；胃大，呈“I”型，肠粗短；1-2枚幽门盲囊。通过比较发现：星突江鲽的外部形态、可量可比性状和内部结构特征均与石鲽相近：星突江鲽与6种比目鱼相比，可数性状指标的数目多较少。     

斑节对虾细胞周期蛋白T基因的克隆和表达分析

真核生物的转录调控多发生在转录的延伸阶段,细胞周期蛋白T(cyclin T)是细胞转录的重要调控因子。文章利用RACE技术获得斑节对虾(Penaeus monodon)cyclin T(Pmcyclin T)c DNA全长,其全长为3 421 bp,其中开放阅读框(ORF)3 135 bp,编码1 044个氨基酸;生物信息学分析显示,该氨基酸序列含有一个周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区,并含有N-糖基化位点和磷酸化位点;经BLAST同源性分析显示,细胞周期蛋白T编码的蛋白与柑橘木虱(Diaphorina citri)、切叶蚁(Acromyrmex echinatior)等多种节肢动物有很高的同源性;利用qRTPCR技术对Pmcyclin T在不同组织及卵巢发育各时期的mRNA水平的表达谱进行了研究。结果表明,细胞周期蛋白T在斑节对虾的心、卵巢等7个组织中均有表达,其中卵巢中表达量显著高于其他组织(P0.05);在卵巢发育各时期中,细胞周期蛋白T在Ⅲ期表达量最高。     

四带小鲃胚胎发育及系统进化分析

四带小鲃是一种具有较高经济价值的小型热带观赏鲤科鱼类。本实验利用光学显微镜观察了其胚胎发育全过程,采用小鱼游泳法和流式细胞术检测了其染色体数目及DNA含量,最后利用线粒体基因组序列对其在鲃亚科中的系统进化地位进行了分析。结果显示,水温28°C条件下,四带小鲃的胚胎发育经历了卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官形成期和出膜期7个时期,24 h孵化出膜。与斑马鱼出膜时开始形成色素不同,四带小鲃出膜时色素未形成,这有利于早期器官形成和发育的观察。以公鸡血细胞DNA含量2.30 pg/2c为标准,四带小鲃DNA含量为1.50 pg/2c。四带小鲃染色体为2n=50,系统进化树显示,四带小鲃在鲃亚科鱼类进化史上属于较早出现的鱼类,染色体数为原始的数目类型,鲃亚科其他属的鱼类独立发生多倍化。上述结果为四带小鲃的繁殖和遗传改良研究提供了基础资料。     

不同倍性团头鲂群体的线粒体DNA 分析

测定了来自5个不同倍性团头鲂（Megalobrama amblycephala）群体（4n-F1、正交3n、反交3n、异源3n、二倍体2n）57个个体的线粒体DNA控制区、细胞色素b基因、16S rRNA基因和COⅡ基因序列，通过对这4段基因序列的联合分析，研究了5个不同倍性团头鲂群体的遗传变异。这4个基因片段的长度分别为：控制区937bp，细胞色素b基因1140bp，16S rRNA基因片段564bp，COⅡ基因片段642bp。将4个基因片段合并为1条总长度为3283bp的片段：在这条3283bp片段中，T、C、A、G4种核苷酸的平均含量分别为27．18％、25．45％、30．71％、16．66％。57个个体中确定了55种单倍型，未发现群体间有共享的单倍型，五群体的单倍型多样度在0．9848-1．0000之间，显示不同倍性团头鲂群体内单倍型类型丰富。5个群体内各序列平均核苷酸差异数（目在8．000-24．273之间，核苷酸多样性指数（π）在0．2483％～0．7866％之间：群体间遗传距离范围为0．0039～0．0106，显示不同倍性团头鲂群体遗传多态性丰富。核苷酸多样性指数（π）、平均核苷酸差异数（K）和核苷酸序列间平均遗传距离在5个群体间的变化趋势一致，由大到小依次为反交3n、异源3n、正交3n、同源4n-F1、二倍体2n。而且，反交3n、异源3n、正交3n和同源4n-F1群体的核苷酸多样性指数（π）、平均核苷酸差异数（K）以及核苷酸序列间平均遗传距离均显著大于2n群体（P〈0．05）。结果表明，反交3n、异源3n、正交3n和同源4n-F1群体的遗传多样性水平显著高于2n群体。[中国水产科学，2008，15（2）：222-229]     

不同眼型金线鲃洞穴鱼类趋触行为的对比研究

研究金线鲃（Sinocyclocheilus）的游动特征——趋触性（贴近边界前行）,为人工养殖、繁育和物种保护提供理论支持。试验用金线鲃均为成鱼,8种51尾,其中盲眼种2种、小眼种和正常眼种各3种。试验在安静、黑暗的环境进行,刺激条件分别为无干扰、静止障碍物和振动吸引,使用软件追踪分析试验鱼位置(距离和方向)、时间以及相对于试验缸壁的游动速度,运用线性模型分析金线鲃趋触行为差异的关键因素。结果表明：趋触前行时间占比盲眼种为73.06%、小眼种为72.65%、正常眼种为54.62%;趋触距离盲眼种（197±18）SBL、小眼种（158±14）SBL、正常眼种（139±15） SBL;趋触游动速度盲眼种（0.53±0.19）cm/（s·SBL）、正常眼种（0.37±0.18）cm/（s·SBL）、小眼种（0.46±0.22）cm/（s·SBL）。金线鲃趋触前行的行为与游泳特性如游泳速度和时间高度相关,趋触行为可能作为一种自我保护作用和觅食策略,甚至作为一种防御策略。实践中可以依据金线鲃眼部形态和行为上的趋触性偏好分类培育饲养,同时增加缓沉型鱼食以及增添静止设施。     

倒刺鲤的胚胎发育及水温对胚胎发育的影响

对倒剌鲃的胚胎发育进行连续跟踪观察，并探讨了水温对其胚胎发育的影响。结果表明：水温（25±0．5）℃时·孵化时间为53．4．3h；胚胎发育过程中出现克氏囊。水温21～33℃条件下。刨剌鲃的胚胎均能孵化·水温（x）与孵化时间（y）成极显著的负相关关系：y=235．72e^-0.0566x,P〈0．01；水温与积温的关系为：y=7519．4x^-0.5192.P〈0．01。孵化率（y）与水温（x）相关关系式为：y=-1．6655x^2＋88．621x—1091．5．由曲线方程可以推算出胚胎发育的适宜水温范围为23．4～29．8℃．通过曲线求导数推算极值的方法。求得胚胎发育的最适水温为26．6℃。     

Repeatability of fin length measurements using digital image analysis and studies of fin erosion as indicator of social interactions in Atlantic cod (Gadus morhua)

The aims of this study were to examine fin erosion caused by social interactions between Atlantic cod (Gadus morhua) juveniles, and to evaluate the repeatability of recorded fin length using digital image analysis (DIA). Fin length of 2100 juvenile Atlantic cod was analysed using DIA, during a 6 weeks experiment. The lengths of the three dorsal fins and the caudal fin were measured by three different assessors (M, K, B) three times during the experiment. Repeatability was based on a sub set of data from 42 randomly chosen fish. Assessor M measured the length of the fins of the 42 fish three times (M1, M2, M3). M1 and M2 were done on the same day, while M3 was conducted 2 weeks later. Assessor K measured two times with a 2‐year interval, and assessor B measured the fin length only once. The correlations between replicated measurements within assessor were highest for assessor M measured on the same day indicating an effect of memory. Repeatability of fin length ranged from 0.57 to 0.73 for the four fins. Social interaction with respect to fin erosion was studied using data on the four fins from all 2100 fish. ‘Relative fin length’ (fin length/total body length × 100) was calculated to assess fin erosion. Results indicated that all four fins were eroded due to social interactions, but the caudal fin was most severely eroded. In conclusion, DIA can be used to measured fin length but the method could be improved by using chromatic pictures.     

7种观赏性剑尾鱼品种间杂交子代的体色及鳍形研究

7种观赏性剑尾鱼的自交、杂交,对其子代的体色(包括眼睛色彩)及鳍形等性状进行统计分析。试验结果表明,黑眼为显性基因控制,红眼为隐性基因控制,体色与眼睛颜色有一定的连锁关系;推测剑尾鱼体色遗传由数量性状基因参与控制;尾鳍燕尾相对于正常尾为显性,而且雄性尾鳍的燕尾和长臀鳍具有连锁性;高背鳍由显性基因控制,正常背鳍由隐性基因控制,拥有正常背鳍的个体,其基因型是隐性纯合,拥有高背鳍的个体,其基因型为杂合,初步推断显性纯合为致死基因型。     

锦鲤尾鳍细胞系(KF-H)的建立

本研究建立了锦鲤(Cyprinus carpio)尾鳍细胞系。染色体数目、核型及DNA含量等实验,发现锦鲤体细胞和锦鲤培养细胞无显著性差异,染色体数目和DNA含量符合比例关系,建立的锦鲤尾鳍细胞系已形成了稳定的遗传性状,命名为KF-H。     

点篮子鱼形态特征及其相关性参数分析

对捕捞自琼海海域的560 ind体重0.3~551.3 g、体长2.3~24.7 cm的野生点篮子鱼外部形态、可量可比性状、可数性状和内部结构进行了研究,分析了形态特征参数间相关关系。结果表明:(1)体呈椭圆形,侧扁;侧线完全,位高,与背缘平行,向后延伸至尾鳍基部;体侧有许多橙黄色斑,背鳍、胸鳍和腹鳍黄色,臀鳍、尾鳍浅灰褐色;背鳍末端下方有一圆斑,为该鱼明显特征。(2)属Y型胃,幽门部肌肉发达,具有4~6个指状粗大的幽门盲囊;消化道、肠道长度分别为体长的2.53±0.36、2.17±0.28倍,肠道长Li与体长Lb的关系式为Li=2.693 1Lb0.903 4(R2=0.879 4)。(3)可量可比性状表明,全长/体长变动范围最小,线性相关性最好,其相关方程为Lt=1.134 5Lb+0.493 6(R2=0.998);体长与体重关系为:W=0.037 6Lb2.893 3(R2=0.991 7);点篮子鱼的b值为2.893 3,小于3,为负异速生长,体长快于体重的增长。(4)分析各形态特征参数与体长关系发现,测定的12个参数均与体长显著相关(P0.01);进而控制体长的影响,分析这12个参数间的偏相关关系,显示与其它参数存在最多偏相关性的是头高,其与除体重外的其它8个参数间均显著相关(P0.01);而尾柄长与其它参数的偏相关性最差,其只与头高、体重显著相关。     

大泷六线鱼的外形特征与消化系统结构

观察并描述了大泷六线鱼的外部形态特征,详细测量了30个个体的大泷六线鱼外部形态参数,进行了相关关系分析;并解剖观察了其消化系统结构特征。外部形态参数全长(LT)与体长(LB)相关关系为LB=0.8489LT+1.0309(R2=0.978),体长与体重的关系为W=0.0211LB2.9927,(R2=0.8337),其余形态参数相关性较低;可数性状背鳍、臀鳍、腹鳍、胸鳍、尾鳍鳍条数分别为38～43、18～22、5～7、17～18、13～15;侧线5条;第3侧线鳞数80～128;第1鳃弓鳃耙数16～19;消化系统结构特征:口咽腔较小,颌齿发达;食道短粗;胃发达,具有27～36个幽门盲囊;胃发达且分化明显,肠在腹腔内呈两个盘曲,肠长/体长为0.801±0.01,表明大泷六线鱼为典型的肉食性鱼类。     

Differential viral haemorrhagic septicaemia virus genotype IVb infection in fin fibroblast and epithelial cell lines from walleye,Sander vitreus (Mitchill), at cold temperatures

A cell line, WE‐cfin11e, with an epithelial‐like morphology was developed from a caudal fin of walleye, Sander vitreus (Mitchill), characterized as distinct from the established walleye caudal fin fibroblast‐like cell line, WE‐cfin11f, and compared with WE‐cfin11f for susceptibility to VHSV IVb. Immunocytochemistry and confocal microscopy were used to localize the intermediate filament protein, vimentin, the tight junction protein, zonula occludens‐1 (ZO‐1), the extracellular matrix protein, collagen I, and the viral protein, G. Although both cell lines contained vimentin, only WE‐cfin11e stained for ZO‐1 and only WE‐cfin11f stained for collagen I. Ascorbic acid increased the accumulation of collagen I and caused the appearance of collagen fibres only in WE‐cfin11f cultures. At 14 °C, both cell lines produced VHSV IVb, but the infection developed more rapidly in WE‐cfin11f. At 4 °C, both cell lines became infected with VHSV IVb as judged by the expression of viral proteins, N and G, but only WE‐cfin11f produced virus. The results suggest that cold temperatures can modulate viral tropism.     

A Survey of Trout Fin Erosion, Water Quality, and Rearing Conditions at State Fish Hatcheries in Utah

A total of 600 hatchery trout were examined for signs of fin erosion including rainbow trout Oncorhynchus mykiss , cutthroat trout O. clarki , brook trout Salvelinus fontinalis and brown trout Salmo trutta . A scoring system was used to evaluate erosion on all fins from 20 fish samples. Water quality and hatchery rearing variables were also determined for corresponding raceways or ponds. For rainbow trout groups ( N = 24), stepwise multiple linear regression was used to interpret the relationship between fin erosion and the other variables. These fish groups averaged between 92 and 243 mm in total length and no significant correlation was observed between length and a fin erosion index ( r = 0.045). The best-fit regression model (adjusted R² = 0.689) suggested that fin erosion was correlated with lower alkalinities, unnatural bottom substrates (concrete or steel), higher unionized ammonia levels, and higher fish densities. Despite significant variation between hatcheries, fin condition was significantly better in rainbow trout than in cutthroat trout in three of four hatcheries containing both species and the same substrate. Fin erosion in rainbow trout occurred primarily on dorsal fins, followed in order of decreasing severity, by pectoral, caudal, anal, and ventral fins.     

Comparison of pelvic fin rays, scales and otoliths for estimating age and growth of bull trout, Salvelinus confluentus

Abstract  The suitability of three anatomical structures to determine age and growth of bull trout, Salvelinus confluentus (Suckley), was assessed. Scales and pelvic fin rays collected from recaptured bull trout 96–265 mm TL were used to validate annulus formation and assess the accuracy and precision of back calculation. Ageing precision and agreement of assigned ages were compared among scales, fin rays and otoliths from bull trout 52–711 mm TL. Annulus formation was validated for 88% (14 of 16 fish) of recaptured bull trout using pelvic fin rays and 68% using scales (15 of 22 fish). Annulus formation in fin rays occurred between late April to early June, and the hyaline (non-growth) band began forming in late August. Back-calculated length was not significantly different from measured length at initial capture either for fin rays or scales ( P  ≥   0.19), and absolute percent error was 7.2 ± 1.2 (mean ± SE; n  =   14) for fin rays and 8.7 ± 1.9 ( n  =   15) for scales. Consistency of back-calculated lengths at age between tag and recapture samples for individual fish was similar for fin rays (mean absolute difference = 8.2% ± 0.9; n  =   33) and scales (9.4% ± 1.4; n  =   40). However, fin rays (87% precision) and otoliths (90%) provided notably higher ageing precision than scales (68%) and closer agreement of assigned ages, particularly for fish older than age 4. Pelvic fin rays appear to offer more accurate and precise age and growth determinations than scales and a non-lethal alternative to otoliths, but further work is needed to validate the accuracy and precision of ageing large, migratory bull trout.     

卵形鲳鲹仔稚鱼异速生长的研究

以传统的理论生物学研究方法,对孵化后卵形鲳鲹1~36日龄仔、稚鱼各器官测量和分析,研究其在早期环境适应上的异速生长及其生态学含义,以期为卵形鲳鲹的人工繁殖、育苗提供参考。试验结果表明,卵形鲳鲹仔、稚鱼的感觉、呼吸、摄食和游泳等器官快速分化,均存在异速生长现象。在头部器官中,吻长、口宽、眼径和头高在仔鱼期均为正异速生长,稚鱼期头高为等速生长,吻长、眼径和口宽为负异速生长。在身体各部位中,仔鱼期头长、体高和尾长为正异速生长,躯干长为负异速生长;稚鱼期各部分皆为等速生长;在游泳器官中,仔鱼期卵形鲳鲹胸鳍长、尾鳍高和臀鳍长为正异速生长,尾鳍长为等速生长,背鳍长为负异速生长;稚鱼期背鳍长和臀鳍长为正异速生长,胸鳍长、尾鳍长和尾鳍高为等速生长。卵形鲳鲹这些关键部位的快速发育,使外源性营养开始后以最小的代谢损耗获得了生存能力的显著提升,对适应复杂的生存压力具有重要的生态学意义。