环境因子对胭脂鱼精子活力影响的研究

通过观察精子的快速运动时间和寿命,研究了6种环境因子对胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus Bleeker)精子活力的影响。结果表明:胭脂鱼精子对酸碱的耐受能力较强,在pH值为4~10时,精子均可以快速运动,且在pH值为8时精子的活力最强。不同浓度的NaCl、KCl、葡萄糖、CaCl2、MaCl2溶液对胭脂鱼精子运动的诱导效果不同。5种溶液最适于胭脂鱼精子运动的浓度分别为:NaCl 102 mmol/L;KCl 75 mmol/L;葡萄糖100 mmol/L;CaCl275.6 mmol/L;MgCl275.6 mmol/L。且在5种溶液低浓度时精子活力较强,超过一定浓度精子的运动开始被抑制。     

阳离子、葡萄糖及渗透压对丁(鱼岁)精子活力的影响

利用KCl、NaCl、CaCl2和葡萄糖配制成不同渗透压的溶液,丁(鱼岁)精子在453.0 kPa KCl溶液、226.5 kPa NaCl溶液和葡萄糖溶液中的活力最强,寿命最长;566.3 kPa已完全抑制精子在这3种溶液中的活动.葡萄糖能有效延长精子寿命,表明丁(鱼岁)精子具有利用外源性葡萄糖的能力.56.7 kPa CaCl2已构成对精子的抑制作用,并引起精子聚集,而且随Ca2+浓度增高,对精子的抑制作用和聚集程度更严重.     

氯化钠浓度对鲈鲤精子活力的影响

为了解鲈鲤精子的生理特性,研究了不同氯化钠浓度试验条件下鲈鲤精子的活力情况,结果表明:在0%～0.65%氯化钠溶液中鲈鲤精子均能被激活;当氯化钠溶液浓度为0.35%时,鲈鲤精子激烈运动时间和寿命最长,分别为(66.33±7.99)s、(635.66±95.78)s,而且该组的鲈鲤精子的寿命极显著高于其他处理组(P0.01),激烈运动时间除显著高于0.60%组和0.65%组(P0.05)外,与其他处理组的差异不显著(P0.05);当氯化钠浓度超过0.35%时,鲈鲤精子活动强度减弱,寿命缩短;当氯化钠溶液浓度超过0.70%后,精子无法被激活。本研究可为鲈鲤精子的保存提供参考依据。     

阳离子、葡萄糖及渗透压对丁Gui精子活力的影响

利用KCl、NaCl、CaCl2和葡萄糖配制成不同渗透压的溶液，丁Gui精子在453．0kPa KCl溶液、226．5kPaNaCl溶液和葡萄糖溶液中的活力最强，寿命最长；566．3kPa已完全抑制精子在这3种溶液中的活动。葡萄糖能有效延长精子寿命，表明丁Gui精子具有利用外源性葡萄糖的能力。56．7kPa CaCl2已构成对精子的抑制作用，并引起精子聚集，而且随Ca2^2 浓度增高，对精子的抑制作用和聚集程度更严重。     

不同浓度的K~+、Ca~(2+)和葡萄糖对乌原鲤精子活力的影响

通过观察精子的快速运动时间和寿命,研究了不同浓度梯度的K+、Ca2+和葡萄糖溶液对乌原鲤精子活力的影响。结果表明:不同浓度的K+、Ca2+和葡萄糖溶液对乌原鲤精子运动的诱导效果不同。3种溶液最适于乌原鲤精子运动的浓度分别为:K+100 mmol/L;Ca2+37.8 mmol/L;葡萄糖125mmol/L,且在这3种溶液低浓度时精子活力较强,超过一定浓度精子的运动开始被抑制。     

阳离子、葡萄糖及渗透压对丁精子活力的影响

利用KCl、NaCl、CaCl2和葡萄糖配制成不同渗透压的溶液,丁鱼岁精子在453 0kPaKCl溶液、226 5kPaNaCl溶液和葡萄糖溶液中的活力最强,寿命最长;566 3kPa已完全抑制精子在这3种溶液中的活动。葡萄糖能有效延长精子寿命,表明丁鱼岁精子具有利用外源性葡萄糖的能力。56 7kPaCaCl2已构成对精子的抑制作用,并引起精子聚集,而且随Ca2+浓度增高,对精子的抑制作用和聚集程度更严重。     

葡萄糖和果糖对海捕野生大黄鱼精子活力的影响

给7尾体质量325~520g的成熟海捕野生大黄鱼注射促黄体素释放激素类似物5μg/kg后采精液,在4℃(冰箱)下取出,以0、100、200、300、400、500、600、700、800、900mmol/L的葡萄糖溶液或果糖的海水溶液激活,观察大黄鱼精子活力,以精子的激烈运动、摇尾运动、缓慢运动和寿命作为评价指标,建立数学模型。试验结果表明,500mmol/L葡萄糖溶液和600mmol/L果糖溶液对大黄鱼精子活力的影响显著高于其他浓度(P0.05);527mmol/L葡萄糖溶液和614mmol/L果糖溶液能最大限度地延长大黄鱼精子的激烈运动时间;葡萄糖溶液浓度为559mmol/L、果糖溶液浓度为597mmol/L能最大限度地提高大黄鱼精子的寿命;葡萄糖对大黄鱼精子活力的影响高于果糖。     

银鲳精子的超微结构

运用扫描与透射电镜对银鲳精子的超微结构进行了观察。银鲳精子由头部、中段和尾部(鞭毛)3部分组成。精子全长约39.51±1.64μm,头部长约1.98±0.30μm,表面粗糙。头部的主要结构包括细胞核和中心粒复合体。细胞核位于头部腹侧,卵圆形。细胞核中染色质致密,存在着不规则的网络状间隙。近端中心粒为9组三联微管结构,与远端中心粒相互垂直。中段的主要结构为袖套和线粒体。袖套与细胞核后端相连,含有4~5个线粒体及少量囊泡。尾部细长,长约37.52±1.68μm,至末端逐渐变细。尾部的主要结构为轴丝,为典型的"9+2"微管结构。尾部具有波纹状侧鳍,排列不对称。     

刀鲚精子超微结构研究

在光学显微镜及透射电子显微镜下观察刀鲚精子超微结构,并对精子各部分长度进行测定。研究表明,刀鲚精子由头部、中段和尾部(鞭毛)组成。头部在光学显微镜下近梭形,透射电镜下纵切则近圆形。头部无顶体,由细胞核组成,核内染色质致密,空隙少,几乎无细胞质。头部后端偏一侧处有一植入窝,内有中心粒复合体。精子中段位于核后端,由中心粒复合体和袖套组成。中心粒复合体由近端中心粒和远端中心粒组成,两者基本位于一直线上。袖套肥厚的一侧有较多的线粒体和囊泡。尾部分为主段和末段,无侧鳍。主段具典型的9+2的轴丝结构,末段很短,无典型轴丝结构。通过光学显微镜测定,精子头部为(2.34±0.16)μm,中段(1.49±0.18)μm,头宽(1.29±0.21)μm,尾部长(34.07±4.31)μm,全长(37.77±4.21)μm。     

圆口铜鱼精子超低温冷冻保存

为建立圆口铜鱼(Coreius guichenoti)精子超低温冷冻保存方法,采用计算机辅助精子分析系统(CASA)评价了4种稀释液(D15、D20、L1、D1), 3种抗冻保护剂[二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(METH)]在3种体积浓度(7.5%、10%、12.5%, V/V)下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果,并比较了150 mOsm/kg NaCl与超纯水作为激活剂对精子活力的影响。结果表明,D1组稀释液的精子活率(MOT)最高,为(74.64±13.17)%,与鲜精无显著差异(P0.05);以10%甲醇作为抗冻保护剂的圆口铜鱼精子经超纯水激活后,测得MOT最高,达到(78.11±14.74)%,与鲜精无显著差异(P0.05),精子运动速度达最大,平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、VAP(平均路径运动速度)分别达到(50.28±12.46)μm/s、(35.06±10.82)μm/s、(39.44±12.46)μm/s,精子快速运动时间和寿命分别为(8.67±1.15) s、(33.33±5.00) s,显著低于鲜精(P0.05); 7.5%甲醇组和7.5%二甲基甲酰胺组的MOT次之,分别为(77.71±17.74)%、(76.42±12.49)%,抗冻剂二甲基亚砜组的MOT显著低于甲醇组、二甲基甲酰胺组(P0.05)。12.5%的3种抗冻保护剂中,几乎无精子存活;在不同种类不同浓度的抗冻剂保护下,10%甲醇组,相较于使用超纯水激活,用150 mOsm/kg NaCl激活后的精子活率和寿命更高,说明Na~+有延长冻精寿命,提高精子活率的作用。研究表明, D1+10%METH (7.8 g/L NaCl+0.5 g/L KCl+15 g/L葡萄糖+10%METH)可用于圆口铜鱼精液超低温冷冻保存,为圆口铜鱼的繁育工作和种质资源保护奠定了基础。     

斜带石斑鱼精子超微结构及盐度、温度、pH对精子活力及寿命的影响

选取健康雄性斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)亲鱼进行人工采精,以日立H-600型透射电镜观察精子超微结构,同时设定盐度梯度、温度梯度和pH梯度,观察其对精子活力的影响。超微观察显示,精子头部呈圆形或卵圆形,核膜与质膜间的空间较大;近端中心粒的长轴与尾部约成120°的夹角;基体位于鞭毛顶端,长轴与精子头部细胞核长轴平行;袖套位于核后端,呈筒状,两侧不对称,分布着数量、大小不等的线粒体和囊泡。尾部细长,长26.0～31.5μm,其主要结构是轴丝,轴丝为典型的"9+2"微管结构。活力实验显示,精子活力的最适盐度为27～35,盐度33时精子寿命最长,为27min;最适pH为6.5～8.7,pH8.4时精子运动时间最长,为20min;最适温度为25～31℃,29℃时精子寿命最长,为37min。     

曼氏无针乌贼精子的超微结构

采用透射电镜的方法研究曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)成熟精子的形态及结构特征.结果表明,曼氏无针乌贼的成熟精子由头部和尾部组成,尾部可明显地分为中段、主段和末段3部分.头部由顶体和细胞核构成,顶体呈倒"U"形,位于核的顶端,其内电子密度均匀.细胞核呈稍弯的长柱状纺锤形,为高电子密度的均质结构.尾部中段可见,是由无数个线粒体组成的线粒体距(mitochondrial spur)围绕尾部鞭毛.鞭毛由"9+2"结构的轴丝及外围9束粗纤维组成,形成"9+9+2"结构.尾部主段线粒体距消失,粗颗粒物质包绕轴丝.精子末段呈细长鞭状,由轴丝和质膜组成,随后包围轴丝的9束粗纤维直径变细直至消失,最终,轴丝仅为单一微管.研究认为,曼氏无针乌贼的精子类型是介于原生型与修饰型之间的中间型.[中国水产科学,2009,16(1):8-14]     

Comparative external morphology of cetacean spermatozoa

SUMMARY: To compare size and morphology of spermatozoa in cetaceans, sperm and epididymis samples were collected from 10 species in four families and spermatozoa were observed with phase-contrast and scanning electron microscopes. According to the average total length of the spermatozoa, the 10 species examined were classified into the following four groups in order of increasing size: (i) Baird's beaked (Ziphiidae) and Bryde's whales (Balaenopteridae); (ii) Dall's and finless porpoises (Phocoenidae); (iii) common, bottlenose, and Pacific white-sided dolphins (Delphinidae); and (iv) killer and short-finned pilot whales, and Risso's dolphin (Delphinidae). Spermatozoa head length of Bryde's whale and the finless porpoise were shorter than those of the other species. Spermatozoa head width was widest in the killer whale and thinnest in the Baird's beaked whale. The lateral aspects of sperm heads from the 10 species were characterized as the 'anterior region of the sperm head is thin and flat while the posterior region is thick.' The dorsal aspects of sperm heads were 'paddle-shaped' in Bryde's whales, 'bowling pin-shaped' in Baird's beaked whales, 'Japanese fan-shaped' in killer whales, an 'elongated ellipsoid shape' in Delphinidae except for killer whales, and 'ellipsoid shaped' in Phocoenidae. Size and morphology of the spermatozoa showed interspecific differences among the 10 species examined, which correspond to cetacean taxonomic classification.     

褐牙鲆精子超微结构观察

利用扫描电镜和透射电镜对自然成熟的褐牙鲆精子超微结构进行了观察。褐牙鲆精子的头部近似圆形,直径1.49±0.17μm,尾部鞭毛较长,达40.17±0.65μm。褐牙鲆精子由头部、中段和尾部(鞭毛)构成。头部的顶端无顶体,细胞核为圆形,染色质致密。核膜分由内核膜和外核膜构成,其间有核周腔。核膜与质膜间有较大间隙,其间分布有许多细胞质、囊泡和溶酶体,在细胞核后端,核膜与质膜之间除细胞质外,还分布有5~6个呈环形单层排列的线粒体。植入窝位于细胞核后端的凹陷处,中心粒复合体位于植入窝内。基体的头端由电子致密物质构成,基体的末端与鞭毛起始端相连,鞭毛从袖套腔中伸出。鞭毛中心结构是轴丝,轴丝为"9+2"微管结构。轴丝外侧有侧鳍。     

双斑东方鲀精子冷冻保存方法探究

双斑东方鲀(Takifugu bimaculatus)在福建已形成较大规模的养殖产业,但其精卵成熟同步率低、自然交配受精率低等繁殖特点已成为养殖规模化发展的最大制约因素。而精子超低温冷冻保存技术作为直接保存细胞遗传物质的一种有效方法,为双斑东方鲀规模化人工繁育问题的解决提供了方案。研究以复苏后的精子活力为选择指标,开展双斑东方鲀精子冷冻保存方法的研究,对抗冻剂、基础液、精子稀释浓度和降温程序等几个关键影响因素进行了筛选,获得了双斑东方鲀精子的最适冷冻方法:以含5%二甲亚砜(DMSO)的MPRS溶液与精子按1∶1比例稀释,样品在4℃冰箱中平衡30 min,液氮上方10 cm处熏蒸5 min,再下降到5 cm处熏蒸5 min,之后投入液氮。按此方法保存的双斑东方鲀精子在解冻激活后,其活力可达(83±3)%,与相应卵子受精,可得到平均70%的孵化率,可以满足双斑东方鲀规模化人工繁育的需求。研究结果也可为其他东方鲀鱼类的相关研究提供参考。     

Bioenergetics of fish spermatozoa during semen storage

This mini-review focuses on changes in ATP and creatine phosphate concentrations in fish sperm under storage conditions. The storage of catfish sperm at 4°C leads to ATP depletion and decreased sperm motility. The rate of intracellular ATP depletion can be diminished through the addition of energetic substrates to the sperm storage medium, with lactate + pyruvate being the most efficient substrates for maintaining ATP concentrations in catfish sperm. The decrease in ATP concentration is closely associated with increases in AMP and hypoxanthine content. In contrast to catfish sperm, carp sperm is able to maintain intracellular ATP concentration close to the physiological level during storage. Collectively, these results suggest that fish species differ in terms of the energy metabolism of their spermatozoa and that the semen storage medium must be carefully selected for a particular fish species so as to maintain the ATP concentration and adenylate energy charge close to physiological values as long as possible.     

Cryogenic preservation of spermatozoa from Prochilodus scrofa and Salminus maxillosus

This paper reports an initial trial to cryopreserve semen from two freshwater South American fishes, the curimbatá (Prochilodus scrofa) and the dourado (Salminus maxillosus). Motility and duration of motility were observed in curimbatá and dourado fresh sperm. Semen mixed with extender (0.8% NaCl) was frozen using vials (1 ml) with subsequent storage in liquid nitrogen. Samples were thawed in 1% NaHCO₃ or in 0.8% NaCl solutions. Post-thawing motility and duration of motility were verified. A simple extender consisting of 0.8% NaCl plus 10% DMSO was able to initiate motility in fresh spermatozoa. The percentage of motile cells and duration of motility were similar in both thawing solutions, but lower than in fresh sperm.     

瓦氏黄颡鱼精子的生理特性及其超低温冷冻保存的初步研究

对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)精子在不同盐度和pH下的精子活力进行观察,同时研究了精子在4种不同稀释液与2种不同浓度抗冻剂组成的保存液中的超低温冷冻保存,并开展了冻精的授精实验。结果表明,瓦氏黄颡鱼精子浓度为(2.035±0.179)×1012cell·mL-1,在盐度为5.8、pH为7.17时,精子的活力都高达95%。以A液作为稀释液、10%甲醇作为抗冻剂时,冷冻保存精子效果最好,解冻后精子活力为(81.7±0.9)%。用解冻后的精子进行人工授精,获得的受精率为(88.4±2.1)%,孵化率为(74.0±0.8)%;而鲜精受精率为(91.0±0.8)%,孵化率(82±1.6)%,冻精与鲜精均无显著性差异。人工授精实验证明了解冻后的精子能正常用于该鱼的人工繁殖。