大黄鱼HPLC指纹图谱的建立及其在产地溯源和物种鉴别中的应用

通过优化实验条件,选择真空冷冻干燥的方法处理实验原材料,以乙酸乙酯为溶剂采用超声法(功率为250 W、提取时间2 h)制备原材料中的有效成分。运用Agilent 1260DAD-HPLC,采用Thermo ODS-C_(18)色谱柱,利用乙腈–0.1%磷酸水作为流动相,在流速0.5 m L/min、进样量20μL、210 nm条件下,建立了舟山养殖大黄鱼、福建养殖大黄鱼、小黄鱼、黄姑鱼和黑鳃梅童鱼的HPLC指纹图谱,以及具有18个共有峰的指纹图谱共有模式。相似度分析表明,其他几类样品和舟山大黄鱼的相似度排序为福建养殖大黄鱼小黄鱼黄姑鱼黑鳃梅童鱼。应用SPSS18.0数据分析软件,对18个共有峰的相对峰面积进行聚类分析、主成分分析和判别分析。聚类分析结果表明,大黄鱼、小黄鱼、黑鳃梅童鱼和黄姑鱼各自聚为一类,可用于鉴别不同的鱼类。经主成分分析,共选取到3个主成分PC1、PC2和PC3,涵盖了HPLC图谱数据信息的80.36%。根据3个主成分的得分绘制散点图,5种样品各自归于一定的区域,实现了不同产地大黄鱼以及大黄鱼与其他鱼类的鉴别。在此基础上,选择对主成分贡献较大的色谱峰的峰面积建立了5种样品的判别方程式,交互验证的正确率高达98.4%,可用于鉴别不同产地的大黄鱼及相同产地的相近鱼种。因此,本实验的研究结果为HPLC指纹图谱技术应用于大黄鱼产地溯源提供了理论和数据支持。     

不同盐度条件下鱼露发酵前期挥发性风味物质的指纹图谱

为探明一定盐度条件下传统鱼露发酵前期挥发性风味物质随时间变化的规律,建立鱼露发酵前期挥发性风味物质的指纹图谱及明确主要风味物质。采用气相色谱—质谱联用(GC-MS)方法分析了180和230两种盐度条件下日本鰒鱼露发酵液的挥发性风味成分。结果显示,有80%的鱼露样品相似度良好,与对照图谱相似度达到了90%;180盐度下发酵150 d的鱼露挥发性风味物质变化较大。盐度180发酵的鱼露样品组有51个共有峰,盐度230有58个共有峰,并在对照图谱中加以标定。通过对指纹图谱共有峰化合物指认,确定了乙醇、丙酮、异戊醛、1-戊烯-3-醇和2-甲基丁酸为鱼露前期发酵液的主要挥发性风味物质。研究表明,盐度180发酵的鱼露更早地进入基础物质转化阶段,有利于鱼露海鲜味的生成;230盐度发酵的鱼露整体发酵进程较为缓慢,但更有利于鱼露中乳酪味和肉香味的形成。在实际生产中可根据需要选择不同的盐度进行发酵。研究结果为揭示鱼露发酵前期主要基础挥发性风味物质及变化规律和鱼露品质控制等提供科学依据。     

养殖刀鲚与生长环境菌群PCR-DGGE指纹图谱及多样性分析

为了分析养殖刀鲚体内与生长环境菌群结构,利用PCR-DGGE技术,对养殖刀鲚鳃、胃、肠壁及肠内容物和养殖水体菌群结构进行了初步分析。PCR-DGGE指纹图谱分离显示,42条清晰条带,其中养殖水体(27)、鳃(9)、胃(13)、肠道壁(19)、肠道内容物(18)的香农指数分别为3.037、1.883、2.193、2.825、2.683;养殖水体与刀鲚鳃、胃、肠道壁及肠道内容物分别具有6、9、11、8共有带。UPGMA聚类分析显示,样品3个重复相似度都在95%以上,差异不明显;不同样品之间,养殖刀鲚鳃和胃聚为一支,具有较高的相似度(76%),同时与养殖水体相似度达29%;养殖刀鲚肠道壁和肠道内容物聚为一支,相似度为38%。回收测定所有显示条带,主要包含变形菌、放线菌、拟杆菌、柔膜菌、蓝藻细菌、厚壁菌、梭杆菌及少量未定义菌种。研究表明,PCR-DGGE技术能区分养殖刀鲚主要部位及水体微生物的结构差异和多样性,澄清养殖刀鲚及生长水体微生物区系,可为定植益生菌的开发提供参考。     

转基因鱼试验湖浮游生物群落DNA指纹与理化因子的关系

对转基因鱼试验湖7个采样点的浮游生物群落进行了PCR-DGGE指纹分析,并进而探讨了DNA指纹与理化因子的关系.结果表明:(1)PCB-DGGE指纹图谱中共含104谱带,其中原核谱带58条,真核谱带46条,其多态性位点分别为87.9%和82.6%.(2)各站点的理化因子中,Ⅰ站的TP含量最高(0.10 mg/L),TN含量在Ⅲ站最高(0.34 mg/L),且各站点波动较大,Ⅴ站的透明度最低(63.00 cm);NO3-N、NH4-N、pH、DO、COD及电导率在各站点变化不大.基于原核生物图谱的相似性聚类分析表明,浮游生物群落Ⅵ和Ⅶ、Ⅳ和Ⅴ、Ⅱ和Ⅲ相似度分别较高,Ⅰ站有别于其它各站,单独为1枝;基于真核生物图谱的聚类分析显示,Ⅰ、Ⅱ站聚为1枝,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ依次相聚后与Ⅲ站聚为另1大枝,Ⅰ、Ⅱ站与Ⅲ站相距较近;理化因子的主成分分析结果与之基本吻合.因此,浮游生物群落DNA多态性与环境理化因子是密切相关的,这类资料的积累将为在分子水平上建立水质预测预报体系奠定基础,为评价转基因鱼生态安全性提供依据.     

DGGE分析不同盐度仿刺参养殖环境中菌群多样性

采用16S rDNA的PCR-DGGE基因指纹技术对不同盐度仿刺参养殖水环境中的菌群多样性进行了分析。试验设置了22、26、30、34,4个盐度梯度,每隔10 d采样1次,通过PCR-DGGE指纹分析发现,仿刺参养殖环境存在着丰富多样的细菌。其中大多属于非可培养细菌,变形菌门和CFB门的种类是水体中的优势菌群,交替假单胞菌属是报道过的腐皮综合征的致病菌。根据DGGE指纹图谱的聚类分析发现,同等盐度条件下的样品之间存在一定的菌群相似性,并在聚类分析图中分别各自成簇。样品的多样性指数为1.7～2.3,不同盐度条件下,样品的多样性指数随着时间的推移变化不大。     

转基因鱼试验湖浮游生物群落DNA指纹与理化因子的关系

对转基因鱼试验湖７个采样点的浮游生物群落进行了ＰＣＲ－ＤＧＧＥ指纹分析，并进而探讨了ＤＮＡ指纹与理化因子的关系。结果表明：（１）ＰＣＲ－ＤＧＧＥ指纹图谱中共含１０４谱带，其中原核谱带５８条，真核谱带４６条，其多态性位点分别为８７．９％和８２．６％。（２）各站点的理化因子中，Ⅰ站的ＴＰ含量最高（０．１０ｍｇ／Ｌ），ＴＮ含量在Ⅲ站最高（０．３４ｍｇ／Ｌ），且各站点波动较大，Ⅴ站的透明度最低（６３．００ｃｍ）；ＮＯ３－Ｎ、ＮＨ４－Ｎ、ｐＨ、ＤＯ、ＣＯＤ及电导率在各站点变化不大。基于原核生物图谱的相似性聚类分析表明，浮游生物群落Ⅵ和Ⅶ、Ⅳ和Ⅴ、Ⅱ和Ⅲ相似度分别较高，Ⅰ站有别于其它各站，单独为１枝；基于真核生物图谱的聚类分析显示，Ⅰ、Ⅱ站聚为１枝，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ依次相聚后与Ⅲ站聚为另１大枝，Ⅰ、Ⅱ站与Ⅲ站相距较近；理化因子的主成分分析结果与之基本吻合。因此，浮游生物群落ＤＮＡ多态性与环境理化因子是密切相关的，这类资料的积累将为在分子水平上建立水质预测预报体系奠定基础，为评价转基因鱼生态安全性提供依据。     

刺参池塘底栖真核生物DGGE指纹结构与环境理化因子的相关性分析

采用基于18S rDNA PCR-DGGE技术对刺参池塘养殖系统底栖真核生物群落结构与环境理化因子进行分析.结果表明,刺参养殖池塘系统中附着基真核生物DNA指纹图谱均呈现出了丰富的多样性,成参养殖池塘分别获得26、25、25条扩增条带,幼参养殖池塘分别获得20、22条扩增条带；刺参养殖池塘中叶绿素、总磷、总氮、溶氧分别为2.037～5.383 μg/L、0.016～0.039 mg/L、1.863～3.562 mg/L、4.06～6.18mg/L,成参养殖池塘的各项理化指标值均高于幼参养殖池塘.通过指纹图谱和理化因子的聚类分析可以看出,附着基底栖真核生物DGGE指纹图谱与环境中理化因子聚类分析图相吻合,说明不同刺参养殖池塘底栖真核生物群落DNA指纹与养殖环境的理化因子密切相关.本研究通过DGGE技术分析刺参池塘附着基底栖真核生物指纹图谱,进而分析与环境中理化因子的关系,为建立底栖真核生物群落DNA指纹结构与水体理化指标之间的关系提供科学依据.     

皱纹盘鲍内脏脂质分析

对皱纹盘鲍内脏脂质进行了分析。采用Folch法提取内脏总脂,硅胶柱层析对中性脂及磷脂进行分离;TLC法对中性脂、磷脂不同组分进行分离与其主要组分的制备;10%硫酸—甲醇对样品进行甲酯化,通过气相色谱法对其进行脂肪酸分析比较。结果表明,皱纹盘鲍内脏中磷脂含量可达31.58%,不饱和脂肪酸在磷脂中含量显著高于中性脂中含量。磷脂中含有一定量的缩醛磷脂,磷酯酰乙醇胺(PE)中缩醛型磷脂含量可达50%。研究表明,皱纹盘鲍内脏中含有丰富的磷脂,多不饱和脂肪酸,并含有一定量的缩醛磷脂,具有较好的食用和药用价值,应得到充分利用。     

能快速分析饲料成分的红外光谱仪

美国贝迪尔勒仪器公司研制出一种能快速分析饲料成分的红外光谱仪。进行分析时,只须取 5~10 g饲料样品,将其调成浆糊状,并涂覆到一块10 cm×10 cm的载玻片上,仪器可发射出1 100~2 500nm的中长波红外线照射样品,样品透射出的红外光谱与饲料中有机成分对光谱的吸收系数不同,将这种光谱数据输入到连接的微电脑中,经过比较分析后则可打印出一份被测样品营养成分的含量表。全部分析过程只需10 min时间,而采用常规化学分析方法至少需要48 h才能得到结果,因而大大方便了饲料生产部门和养殖场所检测饲料成分。能快速分析饲料成分的红外光谱仪@张…     

不同产地鲍鱼特征元素分析与主成分评价模型的建立

为了找出不同产地鲍鱼(Haliotis Spp.Abalone)的区域性差异,并探究一种有效的鲍鱼产地的鉴别方法,采用主成分分析法对对广东、福建、山东、辽宁4个主要养殖省份鲍鱼样品肌肉中的特征元素(Na、K、Mg、Ca、Fe、Zn、Cu、Ni、As、Al、Mn、Cr、Se)进行分析。结果显示,鲍鱼样品的元素含量存在差异,Mn的变异程度最大,变异系数为74%,Ni次之,为65%,其次是Se (60%),其余元素的变异系数均高于10%。同时,通过对这些数据进行降维处理,有效地从13个特征元素中提取了6个元素作为主成分,累计方差贡献率达89.87%;同时发现Ca、Se、Na、Fe、Mn、K、Ni这7种元素是不同产地鲍鱼的特征元素,并建立了主成分综合评价模型:F=0.2777F_1+0.2652F_2+0.1295F_3+0.1066F_4+0.0656F_5+0.0541F_6。模型的建立可以为利用特征元素对不同产地鲍鱼的产地溯源提供一定的理论参考。     

海阳和烟台近岸口虾蛄群体的形态比较

于2017年4月，分3次采集山东海阳和烟台近岸的口虾蛄(Oratosquilla oratoria)样本，采用传统形态学直线测量的方法获取样本的11项形态学指标，运用独立样本t检验、CD检验、主成分分析和判别分析等统计方法，比较其15项比例性状指标。独立样本t检验和CD检验显示，海阳群体比烟台群体体型更细长，烟台群体的头胸甲、尾部和第2颚足在整体体型中占比较大，而海阳群体的腹部占比较大。2个群体在头胸甲部、胸节、尾部和第2颚足的掌节4个部位上形态差异显著(P<0.01)，但尚未达到亚种水平(CD<1.28)，为种内不同地理群体间的形态差异。主成分分析发现，雌性群体和雄性群体均分别构建了3个主成分，累计贡献率分别为87.571%和83.156%。而海阳和烟台群体在横向体型因子方面差异明显。通过判别分析，建立口虾蛄群体的判别函数式，综合判别准确率为74.0%。研究表明，口虾蛄具有雌雄二态性，烟台和海阳群体成体形态差异明显，雄性个体差异更为显著。     

低场核磁共振技术在水产品品质分析中的研究进展

低场核磁共振技术(LF-NMR)具有检测迅速、样品需要量少、对样品无损伤等特点,在食品中水分、蛋白质、脂肪测定,以及肉类的保水性、质构特性和食品品质检测方面得到了广泛应用,在水产品品质分析中也有很好的应用前景。LF-NMR技术可以检测水产品中的水分含量、水分活度、三种不同水分状态分布等,有利于水产品保鲜贮藏及水产品蛋白质凝胶特性等方面的研究。本文主要介绍了LF-NMR技术的基本原理,系统归纳了该技术在水产品中水分、蛋白质、脂肪组成分析及蛋白质乳化和凝胶特性及品质保藏中的应用,总结了其在水产品无损检测及相关特性中的应用,分析了其在水产品品质分析中的应用前景。     

盐碱水和海水养殖条件下的拟穴青蟹生长和营养成分比较分析

为探究不同水体条件下拟穴青蟹的生长和营养成分差异,本研究测定了黄河三角洲海水（DY）、盐碱水（ZD）及三门海水（SM）的水质离子组成,采用阿廖金分类法进行养殖水体分类;测量形态指标并计算肥满度,利用独立样本t-检验（t-Test）方法比较3种水体中养殖90和140日龄青蟹的生长;测定肝胰腺和肌肉氨基酸及脂肪酸含量,应用主成分分析和聚类分析方法分析各组青蟹氨基酸和脂肪酸的组成。结果显示,ZD组养殖水体碱度显著高于SM组（P<0.05）,与DY组无显著差异（P>0.05）;3个组90日龄青蟹肥满度在0.54~0.89之间,ZD、DY组青蟹肥满度显著高于SM组（P<0.05）,140日龄青蟹肥满度的组间差异不显著（P>0.05）;共测出20种氨基酸和26种脂肪酸,3个组青蟹的肝胰腺和肌肉总氨基酸含量（TAA）分别为3.94~6.87 g/100g和9.73~12.42 g/100g,SM组均为最高;3组青蟹的肝胰腺和肌肉总不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸含量（TUFA/TFA）比值分别为59.68~68.80%和70.08~73.79%,其中,ZD组青蟹肝胰腺中C20:5n-3（EPA）含量为各组最高;主成分分析和聚类分析分别显示,ZD组的青蟹的氨基酸与脂肪酸含量与其他组区分较为明显,但差异不显著（P>0.05）,各组青蟹的肌肉、肝胰腺氨基酸和脂肪酸含量的聚类结果均相似。研究发现,与正常海水相比,盐碱水养殖青蟹的生长速度、肥满度及氨基酸和脂肪酸含量差异不大,部分指标占优,为保证养殖青蟹的生长速度和产量,可在盐碱水中适量补充Mg2+和K+。研究结果为盐碱水青蟹养殖和新品种培育提供参考。     

应用主成分法和聚类分析法分析吕四渔场近岸海水水质

应用主成分法和聚类分析法对2005年5月吕四渔场近岸海水中16个水质指标的监测数据进行了分析研究。结果表明:D IN的超标率最高,达57.1%,Zn空间变异最为明显;D IN与水温相关性明显,这已被人们所认识;TPH与营养盐(D IN、PO43--P)有较好的正相关性;主成分因子(f1,f2,f3)中,f1的贡献率达37.76%,其可能代表的是外来污染源的影响;各水质因子可大致聚为三类,第一类由D IN、TPH、Cu、DO、As、PO43--P和Cd组成,表明它们与其它各因子相关性变化程度是基本相同的。此外,本文提出了三点建议,以供监测参考。     

珍珠蚌5个群体不同阶段生长性能及外部形态变异分析

采用温室大棚早繁技术,获得三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)选育群体、武义养殖群体、鄱阳湖、洞庭湖野生群体,池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)养殖群体的子代,对1龄和2龄蚌的生长性能进行分析,并利用三种多元统计分析方法对1龄蚌外部形态变异进行了研究。结果显示:珍珠蚌5个群体的养殖性能由高到低为:池蝶蚌群体选育群体鄱阳湖群体洞庭湖群体养殖群体。生长指标之间存在显著相关性,与体质量相关程度由大到小为:壳长、壳宽和壳高。1龄时,影响珍珠蚌体质量的生长指标主要为壳长,2龄时,为壳长和壳宽。珍珠蚌生长后期壳宽对体重的影响比重加大,壳高与体重的相关性降低。三种多元分析结果显示,1龄时,池蝶蚌群体与鄱阳湖群体、洞庭湖群体以及养殖群体的外部形态存在较大的相似性,综合判别率较低,选育群体外部形态较前四者存在明显差异。     

环渤海主要城市近岸海域水质状况综合评价

为客观评价环渤海13个城市近岸海域水质状况,验证雷达图指数、内梅罗指数和主成分指数在渤海近岸海域水质评价中的作用,基于渤海195个监测站位3、5月两次实测水质数据,选取化学需氧量、无机氮、总氮、活性磷酸盐、总磷和石油类物质作为评价因子,对环渤海主要城市近岸海域水质状况进行了综合评价和等级划分。结果显示,渤海近岸海域主要污染物为无机氮和总磷,其次为石油类物质;葫芦岛、秦皇岛、大连和烟台的近岸海域水质状况较好,而位于辽东湾北岸辽河口附近的盘锦、锦州、营口以及位于莱州湾西侧的滨州的近岸海域水质状况较差;3类水质综合指数对海水中盐度和悬浮物浓度敏感性较强,且相互之间及其与水质优良面积比例存在显著相关性,表明所选择的3类水质指数能够真实反映渤海近岸海域水质状况。本研究将为渤海水质评价与综合治理成效评估提供方法上的借鉴。     

缢蛏7群体的形态差异与判别分析

运用多变量形态度量学分析方法,对我国沿海庄河、汉沽、海阳、盐城、崇明、宁波、漳州7个地理群体缢蛏的12个形态性状进行了形态差异研究。聚类分析和主成分分析结果表明,汉沽群体和海阳群体首先与庄河群体聚类,之后依次与崇明群体和盐城群体聚类,最后与宁波和漳州群体聚为一支。主成分分析构建了3个主成分,其贡献率:主成分1为36.28%,主成分2为22.23%,主成分3为12.72%,累积贡献率为71.23%。判别分析结果表明,7群体间形态差异显著(P<0.01)。建立7群体缢蛏的判别函数,其判别准确率P1为66.67%~86.67%,P2为68.96%~100%。7群体的综合判别率为77.93%。     

不同地理种群泥蚶的形态差异与判别分析

泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)为印度椢魈洋海域的广温广盐性贝类,在我国主要分布于山东以南沿海,是我国沿海滩涂的主要经济养殖贝类.有关泥蚶人工育苗、繁殖与生长和生理生化等方面的研究已有较多报道[1-9],但种内形态特征的地理变异未见报道.本文利用多变量形态度量学方法对我国山东、浙江、广西和韩国4个地理种群泥蚶的形态变异进行了比较研究,探讨了泥蚶种内的形态变异特点与地理分化规律、并建立判别函数,为泥蚶地理种群的识别、种质保护和良种选育提供理论依据.     

四种不同引进群体的凡纳滨对虾种虾形态差异性分析

种虾资源的好坏影响着整个凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)产业的发展,从国外引进不同的种虾群体可以在一定程度改善我国的种虾资源。本研究以凡纳滨对虾种虾(所选种虾均为雌虾,在12~15月龄之间)为研究对象,运用聚类分析、主成分分析和判别分析等方法对4种不同来源的引进群体(PRIMO群体、SIS群体、厄瓜多尔群体和API群体)进行形态差异比较分析。结果显示,各性状的变异系数除了体质量外,其他均低于15.000%。单因素方差分析结果显示,在10个性状的比例参数中,头胸甲宽/头胸甲长和腹部宽/腹部长在4个种虾群体中无显著差异。聚类分析结果显示,PRIMO与SIS群体形态差异最小,与厄瓜多尔和API群体的趋异程度逐渐增加。主成分分析构建了4个主成分,累积贡献率为88.861%,其中,主成分1、2、3和4的贡献率分别为32.606%、23.982%、17.569%和14.704%。判别分析建立了4种不同来源的引进群体的判别函数,判别准确率P1为33.3%~67.1%,P2为30.8%~69.5%,综合判别准确率为52.1%。4个凡纳滨对虾种虾群体在某些性状比例参数上差异显著,在一定程度上产生了形态差异,但尚未达到亚种水平。     

水生食物网研究方法的发展和应用

水生生物在食物网中的相互关系及其变化是生态学研究的重要领域之一,其实质是研究生物之间的捕食与被捕食关系。传统的水生食物网研究方法是基于形态学观察的胃含物分析,具有较大的局限性。随着科学技术的发展,稳定同位素技术、特征脂肪酸组成分析和DNA条形码等分子技术的引入有效的弥补了胃含物分析的不足,并可以更深入的了解水生生物的摄食信息,因此得到了广泛的应用。本文采用文献计量法分析了水生食物网研究方法的发展动态,分别介绍了稳定同位素技术、特征脂肪酸组成分析和DNA条形码技术与胃含物结合应用的研究进展,着重归纳总结了其在水生生物食性研究中的应用现状及发展前景,详细地指出了4种水生食物网研究方法的优势和局限性、适用范畴和对实验样品的需求。胃含物分析作为传统食物网研究方法未来仍是不可缺少的一部分,其向我们传递了最为直接的摄食信息。在此基础上,稳定同位素技术、特征脂肪酸组成分析和DNA条形码等分子技术作为胃含物分析方法的补充手段,将更有利于重建复杂的水生食物网结构,进而为渔业管理提供必要的帮助。