一株螺旋粉虱病原真菌发酵基质的筛选和发酵条件初探

在对螺旋粉虱病原真菌-蜡蚧轮枝菌最佳发酵基质筛选的基础上,研究几个因素对固体发酵产孢的影响,采用单因子分析法和正交设计(L943)进行组合基质筛选。结果表明,单因子分析法筛选出花生饼单一基质和花生饼+小米+磷酸盐组合基质为最佳发酵基质,选取花生饼、小米、磷酸盐和稻壳作为4个组分因子;正交设计优化组合筛选出产孢量最高的组合为2号配方,分生孢子产量达2.96×1010个/g,该菌固态发酵最适温度为30℃,发酵适宜时间为14 d,增长光照处理时间对蜡蚧轮枝菌产孢有一定的促进作用。正交2号配方固体发酵基质用量最少,且固体发酵成本低,为蜡蚧轮枝菌的规模化生产提供理论依据。     

虫生真菌粉虱拟青霉的培养性状和寄主范围

本文详细描述了粉虱拟青霉的形态及在多种培养基上的培养特征,对菌丝生长、产孢、大量培养条件及寄主范围进行了研究,结果表明,该菌在PDA、麦麸汁等培养基上生长速率较快,在察氏、萨氏等培养基上生长缓慢,培养19 d菌落直径分别为40-42 mm,29-35 mm。该菌产孢缓慢,增加光照与添加N源显著促进其产孢。液体扩大培养的最适培养基为10％麦麸+2％蔗糖。固体发酵(稻壳+麦麸)孢子产量较低,为1.6-6亿/克;浅盘静置培养孢子产量则较高,为6.4-30亿/克。该菌可以寄生黑刺粉虱、椰圆蚧和温室白粉虱,不能寄生茶尺蠖、假眼小绿叶蝉、茶橙瘿螨和茶蚜。     

以微生物发酵床养猪垫料为主要基质的哈茨木霉FJAT-9040固体发酵培养基优化

以微生物发酵床养猪技术带来的新兴农业副产物——微生物发酵床养猪垫料为主要培养基质,以产孢量为指标,通过单因素,响应面分析法优化生防菌哈茨木霉FJAT-9040固体发酵的培养基。单因素结果表明:发酵培养基主成份微生物发酵床养猪垫料与麸皮的比例为9∶1;最适疏松值、无机碳源和无机氮源分别为麦粒40.00%、蔗糖3.00%和硫酸铵2.00%。响应面分析结果表明,麦粒、蔗糖、硫酸铵对哈茨木霉产孢量存在显著相关性(p0.05)。通过求解回归方程可得:当微生物发酵床养猪垫料∶麸皮=9∶1、麦粒含量36.74%、蔗糖含量3.07%、硫酸铵含量1.75%时,孢子产量最高,可达2.98×109个/g,与实际值相近。     

响应面法优化绿色木霉H06产孢发酵培养基

采用响应面法对绿色木霉H06菌株产孢发酵培养基进行了优化。首先利用Plackett-Burman实验设计筛选出影响产孢的3个主要因素:玉米粉、大豆粕和KH2PO4。在此基础上运用最陡爬坡路径法逼近最大响应值区域,最后利用响应面分析法确定主要因子之间的交互作用及最佳条件。结果表明,蔗糖10 g/L、玉米粉12.75 g/L、NH4NO32 g/L、大豆粕4.65 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L、KH2PO43.32 g/L、H06最大理论孢子含量为3.29×109个/mL。经3次平行实验验证,实际平均孢子含量与预测孢子含量相近,比之前的孢子含量提高了197%。     

玉米灰斑病菌产孢特性的初步研究

应用玉米叶粉碳酸钙琼脂培养基(MLPCA)和高粱粒培养基,通过基质含量、培养基类别以及温度和光照条件不同处理,对玉米灰斑病菌产孢特性研究结果表明:(1)玉米叶粉含量相同时,病菌在CaCO3含量为1.5 g培养基上产孢量最高,表明玉米叶粉和CaCO3含量比为10∶1的玉米叶粉碳酸钙琼脂培养基为最佳产孢培养基;在CaCO3含量相同时,病菌在玉米叶粉含量为24 g的培养基上产孢量最高,产孢量与玉米叶粉含量成正比;(2)在高粱粒培养基上病菌只产生菌丝体和分生孢子梗,而不产生分生孢子,可能是由于基质营养含量较高、水分较少而仅利于病菌营养生长所致.(3)病菌在玉米叶粉碳酸钙琼脂培养基上适宜培养时间为5～7 d,产生分生孢子量达到高峰.     

油茶叶枯病菌的鉴定及生物学特性研究

从海南五指山油茶园区采集到油茶叶枯病叶,进行病原菌分离鉴定并对其生物学特性进行研究.通过对其培养特性、形态特征的观察及rDNA的转录间隔区(ITS)序列测定,与Genbank中同源性较高的菌株进行序列比对,将该病原菌OC-12确定为小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora).生物学特性研究结果表明:OC-12菌丝在PDA培养基上生长最佳,在crapek培养基上不产孢,在燕麦培养基上最适合产孢.菌丝生长和分生孢子产生的适宜温度分别为20～30℃和25℃,适宜pH值为4～11.供试碳源中果糖较利于菌丝生长,D-葡萄糖较利于孢子产生;供试氮源中蛋白胨和硝酸钾较利于菌丝生长,且蛋白胨较利于孢子产生.分生孢子致死温度为52℃,10 min.     

花生网斑病原菌孢子差异及其致病力分析

花生网斑病（peanut web blotch），由花生亚隔孢壳菌（Didymella arachidicola）引起，病原菌又称花生茎点霉（Phoma arachidicola）或派伦霉（Peyronella arachidicola），在我国南北的各大花生产区均有发生，已成为生产上严重的叶部病害。为筛选产孢效率高、致病力强的菌株，研究病原菌进化机制和环境适应性，从来自不同地区的花生网斑病叶片样本中分离病原菌菌株，研究分生孢子及致病力差异。结果表明，18个菌株中YY187的产孢时间最短，22℃黑暗条件下燕麦琼脂培养基培养7 d即可产孢；菌株YY187和NY206产生的分生孢子器数量显著多于其它菌株；采用孢子悬浮液接种花生叶片，供试所有菌株均可造成叶片发病，其中菌株LY128和YY187在供试18个菌株中致病力相对较强。因此，综合评价产孢效率更高、致病力更强的本地菌株YY187适合作为花生抗网斑病研究的材料。     

一株绿僵菌的分离、鉴定及其生物学特性的初步研究

利用PDA培养基+硫酸链霉素+虎红,对采自湖南沅江苎麻地的蛴螬绿僵菌进行了分离培养.经对菌落特征、菌丝、分生孢子梗及分生孢子的形态特征的观察.鉴定该虫生真菌为金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae),编号为Ma10.通过固体培养,比较了Ma10在三种不同培养上的特性.结果表明:Ma10的菌丝体在SDAY上生长最快;Ma10对碳源的选择性较高,在以葡萄糖为碳源时生长最快;在查氏培养基上的产孢量较大.     

茶树内生真菌菌株CSN-4产谷氨酸脱羧酶条件优化

从茶树中分离到一株相对较高谷氨酸脱酸酶活力的内生真菌菌株CSN-4,对该菌株产谷氨酸脱羧酶的发酵培养基及发酵条件进行优化。采用单因素—响应面法对以YPD为基础的发酵培养基及发酵条件进行优化。结果为每200 m L的发酵培养基:乳糖5 g,酵母膏1.6 g,蛋白胨5.4 g,NH4NO3 2 g,KH2PO4 0.9 g,Mg SO4 0.4 g,谷氨酸钠1 g。发酵条件为:装液量40 m L,转速180 rpm,p H值6.0,发酵温度28℃,发酵时间72 h。葡萄糖,酵母膏,KH2PO4为3个最显著因素。在优化后的培养基和培养条件下,谷氨酸脱羧酶酶活力达到98.63 U/m L,是优化前的2.26倍。单因素和响应面结合的方法优化发酵培养基组分和发酵产酶条件,是一种简单有效的方法,可以较大幅度地提高产酶量。     

白僵菌871菌株与菌粉生产工艺研究简报

本文研究了从茶丽纹象甲致病成虫体上分离的球孢白僵菌(Beauveria bassina Vuill)871菌株形态学及生物学上的一些特征;探讨其菌粉生产加工工艺,明确采用二级液体种与三级大床发酵相结合的工艺,比二级固体种提高成品率10％～20％、产孢率10％—30％;菌粉在常温下有效贮藏期为一年,冷藏可延长孢子寿命。     

Paddy Husk as Support for Solid State Fermentation to Produce Xylanase from Bacillus pumilus

To optimize culture conditions for xylanase production by solid state fermentation (SSF) using Bacillus pumilus, with paddy husk as support, solid medium contained 200 g of paddy husk with 800 mL of liquid fermentation medium [xylan, 20.0 g/L; peptone, 2.0 g/L; yeast extract, 2.5 g/L; K2HPO4 , 2.5 g/L; KH2PO4 , 1.0 g/L; NaCl, 0.1 g/L; (NH4)2SO4 , 2.0 g/L, CaCl2 ·2H2O, 0.005 g/L; MgCl2 ·6H2O, 0.005 g/L; and FeCl 3 , 0.005 g/L] at pH 9.0 was applied. The highest xylanase activity (142.0 ±0.47 U/g DM] was obta...     

Evaluation of different media and methods of cultivation on the production and viability of entomopathogenic fungi, Verticillium lecanii (Zimm.) Viegas

For mass production of V. lecanii, three types of cultivation methods including liquid, solid and diphasic production systems were investigated. In the liquid state of production, six media were tested in stationary culture conditions. Among the six media tested, Molasses Yeast Broth (MYB) supported maximum sporulation (8.33 x 10(8) spores mL(-1)) and biomass production (746 mg/100 mL). In the MYB, 4% molasses concentration was found to produce highest spore count (8.56 x 10(8) spores mL(-1)) and biomass (776 mg/100 mL) followed by 5 and 6% molasses. Among the six solid substrates tested, rice grains supported highest spore production (1.14 g/100 g). In diphasic state of production, combination of MYB and rice grains produced the greatest amount of spores, (1.70 g/100 g). Results of this study indicated that diphasic method using MYB as liquid medium and rice as solid substrate are the best method and media for mass production of V1-7 isolate of V. lecanii.     

产多酚氧化酶茶树内生真菌的筛选及产酶条件优化

以愈创木酚、α-萘酚、没食子酸、L-酪氨酸和单宁酸等5种酚类物质为底物,采用鉴别培养基筛选法从14株茶树内生真菌中初筛获得4株产多酚氧化酶的真菌。根据变色圈的大小、颜色深浅和摇瓶发酵的结果复筛获得产多酚氧化酶能力较强的菌株CSN-13。对菌株CSN-13产酶营养条件进行初步分析,结果表明,在供试的6种碳源物质中,以麸皮对菌株CSN-13产多酚氧化酶的促进作用最为明显;供试的5种氮源物质中,以硝酸铵的促进作用最为明显;在发酵培养基中添加茶水,对产酶有明显的促进作用。采用正交设计对CSN-13产酶发酵培养基进行初步优化,优化后的培养基配方为：麸皮（40βg·L^-1）、硝酸铵（15βg·L^-1）、茶水（4βg·L^-1）、KH₂PO₄（2βg·L^-1）、MgSO₄·7H₂O（0.5βg·L^-1）、无水CaCl₂（0.075βg·L^-1）、CuSO₄·5H₂O（0.01βg·L^-1）。采用优化后的培养基,菌株CSN-13在28℃下培养5βd,酶活力达到241βU·mL^-1·min^-1,比优化前提高8.5倍。茶树内生真菌菌株CSN-13及其发酵产酶培养基的研究为多酚氧化酶的进一步开发打下了基础。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CS27液体发酵条件优化

从提高细胞生物量并降低发酵生产成本的目的出发,本文采用单因素试验和正交试验方法,对已筛选出的枯草芽孢杆菌CS27菌株进行液体发酵培养基和工艺条件优化。得到最佳培养基配方为:1.5%黄豆粉、0.5%糖蜜、0.8%氯化铵、1.0%氯化钠、0.1%柠檬酸钠、0.5%碳酸钙、0.1%七水合硫酸镁;最佳发酵条件为:发酵温度32℃,最佳装液量50 mL/250 mL,最适接种量10%,初始pH7.0。在优化后的培养基发酵条件下细胞生物量可以达到1.75×10~9 cfu/mL,为枯草芽孢杆菌CS27菌株规模化生产及应用提供科学依据。     

金龟子绿僵菌液体深层培养研究

研究结果表明:金龟子绿僵菌液生分生孢子的形成与培养基组成密切相关,不同的碳、氮源对液生分生孢子形成具有显著影响。蔗糖是液体深层培养液生分生孢子的理想碳源,而花生饼粉、豆饼粉则是较理想的氮源,且液生分生孢子的产量与培养基氮源的性质有关,复杂的氮源比简单的氮源更有利于液生分生孢子的形成。在供试的8种碳源和6种氮源相互组配的培养液中,以蔗糖+花生饼粉的组合最佳,液生分生孢子产量达14.13×10~9个/L。同时试验结果还表明,液生分生孢子的产出率与培养液的碳氮比、温度、pH有关,在培养温度为28℃、培养液碳氮比为3:1、pH为6.8的条件下,可获得最大的液生分生孢子产量。     

茯茶冠突散囊菌发酵生产吲哚生物碱的研究

冠突散囊菌是茯砖茶"发花"过程中的优势菌,其体内含有丰富的吲哚类生物碱类代谢产物。吲哚生物碱类化合物具有抗菌、抗过敏、抗辐射、抗紫外和抗肿瘤等重要的生物活性,开发前景广阔。为提高吲哚类生物碱类代谢产物的产量,本研究考察了冠突散囊菌繁殖、生长与发酵的影响因素,并利用薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)对其发酵产物内含成分进行了分析。结果表明冠突散囊菌在察氏固体培养基上能快速繁殖,8 d内能产生大量的成熟孢子,液体培养的最佳条件与时长分别为pH 6.0、温度30℃、转速200 r·min~(-1)和培养时长6 d;鲜茶干粉、鲜茶提取物、茯茶粉、茯茶提取物和色氨酸等能显著诱导吲哚生物碱的合成,其中色氨酸诱导效应最强;内含成分分析表明,TLC可分离出至少10种冠突散囊菌代谢物质,HPLC与LC-MS检测分析其代谢产物的主要成分为吲哚类生物碱,产量达到2.45 g·L~(-1)。本研究为茯茶冠突散囊菌的高值化开发提供了技术支撑。     

玉米内生细菌YY1菌株高产抗菌物质的发酵条件优化

玉米内生细菌YY1菌株为枯草芽孢杆菌,对玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)有强烈的拮抗作用,通过产生抗菌物质发挥抑菌活性。以培养基的无菌滤液对玉米大斑病菌的拮抗活性为检测指标,确定其产生抗菌物质所需要的最佳碳源、氮源及无机盐,通过正交试验得到该菌株产生抗菌物质的培养基配方,并对其发酵工艺条件进行优化。结果表明,最佳培养基为可溶性淀粉3.0%,蛋白胨2.0%,KH2PO40.02%,MnCl20.01%。发酵工艺参数优化结果为培养基装液量30 mL/250 mL,接种量4%,培养基初始pH值为9.0,28℃条件下、120 r/min摇床振荡培养48 h。经发酵条件优化后,其抗菌活性有显著提高。     

内生解淀粉芽孢杆菌TB2液体发酵条件的研究

采用单因素试验和正交试验对具有广谱拮抗作用的内生解淀粉芽孢杆菌TB2菌株的摇瓶发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,最佳培养基组份为:玉米淀粉1.0%、豆粉1.0%、(NH4)2SO40.5%、MgSO4·7H2O0.1%、FeSO4·7H2O0.03%、K2HPO4·3H2O0.02%、KH2PO40.01%;培养条件为:初始pH值为7.5,温度35℃,接种量3%,装液量50mL/250mL三角瓶,摇床转速200r/min,发酵周期22～26h。优化条件下发酵水平活菌数达到8.52×1010cfu/mL。     

植物促生菌培养条件优化及其对尾叶桉幼苗接种效应的研究

以植物促生菌（PGPB）SZ7-1菌株为研究对象,首先,采用单因素试验设计及响应曲面分析法,优化SZ7-1的培养条件,并在5 L自动发酵罐中进行培养;其次,通过温室盆栽试验研究了该菌对桉树幼苗的接种效应。结果表明：（1）以菌体浓度（OD值）为目标值,在单因素试验的基础上,利用响应曲面法综合考虑3因素对SZ7-1生长的影响,得到了最优培养条件为：pH6.02、接菌量2.41％和装液量10％。由5 L自动发酵罐中培养可知,优化后的培养条件更利于菌株的生长,16 h后活菌数达到1.31×1010 CFU/mL,是优化前的1.62倍;（2）接种后植株有较好的生长表现,在株高、地上和地下部分干重以及全氮含量等方面较对照有明显地增加。研究结果可为该类促生菌的大量培养和应用提供参考。     

固态发酵高温豆粕制备多肽饲料的最优发酵工艺条件研究

以高温豆粕为原料,研究了枯草芽孢杆菌固态发酵法制备多肽饲料的最优发酵工艺.首先对影响固态发酵多肽得率的培养基组成进行了研究,采用正交试验确定了最佳的固态发酵培养基为:豆麸比2∶1,加水量110%,加蜜量4%.然后对影响固态发酵中多肽得率的发酵工艺参数进行了研究,采用响应面分析法(RSA)确定最佳发酵工艺条件为:接种量1...