中粒种咖啡新发砖红镰刀叶枯病病原菌鉴定及其病原生物学分析

针对引起海南省白沙农场中粒种咖啡成株叶片呈砖红色枯萎症状的一种未知病害的病原菌进行分离，分离得到菌株21BS02-1和21BS02-2。将分离菌株接种到叶片并观察症状，发现菌株21BS02-1的发病症状与田间症状一致，通过再分离获得的菌株发病症状也与初始病原菌症状一致，由此确定菌株21BS02-1即为致病菌。菌株21BS02-1的菌落主要呈白色，毡状，菌丝致密，菌落中央呈玫瑰色；其菌丝体细长，部分菌丝为有隔菌丝；大型分生孢子两端稍弯曲，形状似镰刀，其大小为(56.26~175.76)μm × (12.93~19.78)μm，有3~7个分隔；小型分生孢子较少，呈椭圆形，0~1个分隔；根据形态特征初步鉴定该病原菌为镰刀菌（Fusarium sp.）。进一步对菌株21BS02-1的ITS、β-tubulin、TEF基因序列进行克隆测序，经Blast搜索表明，其ITS、β-tubulin、TEF序列与Fusarium lateritium的同源性分别达到99.56%（MN686293）、100%（KJ00154）、99.68%（KF918550）。3个单基因聚类树均一致，表明菌株21BS02-1属于砖红镰刀菌（F. lateritium）。生物学特性测定表明，致病菌21BS02-1最适合的培养基为OMA和CMA培养基；碳源为蔗糖时的利用率最高；牛肉浸膏为致病菌最适生长的氮源；12 h光暗交替条件下菌丝生长最快；pH在7~9范围内最适合该致病菌生长。本研究是砖红镰刀菌（F. lateritium）侵染中粒种咖啡较为详细的报道。     

引起广西桑树“褐枯”的病原菌及致病机制研究

对广西地区的桑树发病初期叶片褐枯情况进行调查，通过收集桑树病株并进行分离。结果表明，得到优势菌株42株，各菌株形态基本一致。对分离到的菌株进行16S rDNA序列鉴定，比对后发现所有菌株序列均与劳尔氏青枯菌Ralstonia solanacearum（RS）相似度达99％，生化型分析结果显示主要为生化Ⅰ型。随机选择10个菌株进行致病力实验，结果表明，各菌株均具有致病性，部分菌株致病率达90％以上。其后利用扫描电镜观察青枯菌侵染桑苗过程，发现侵染后期桑根木质部导管内聚集大量菌体，堵塞整个导管。上述结果表明：广西地区桑树“褐枯”症状病害属于桑树青枯病，病原菌为劳尔氏青枯菌RS，其致病机制是通过在桑根木质部导管内大量定殖，堵塞导管阻止水分运输，最终导致植株枯萎死亡。     

暹罗芽孢杆菌ZHX-10的分离鉴定及其对花生白绢病的生防效果

为筛选可用于防治花生白绢病的生防菌株，采用稀释涂布平板法，从土传病害发生严重的花生田中分离 获得了1 株拮抗细菌ZHX-10，结合形态学观察、生理生化鉴定及16S rDNA、gyrB 序列分析对其进行了种类鉴定，并 初步测定了ZHX-10的菌悬液、挥发性气体、发酵液对白绢病菌的抑制效果。结果表明：ZHX-10菌株为暹罗芽孢杆 菌Bacillus siamensis，其菌悬液、挥发性气体和发酵液均能有效抑制白绢病菌菌丝的生长；同时离体叶片接菌实验发 现ZHX-10菌悬液产生的挥发性气体能够有效降低白绢病的发病情况。研究结果表明，ZHX-10 在白绢病菌生物 防治中具有较好的应用潜力和较高的研究价值。     

引发小麦赤霉病和茎基腐病禾谷镰孢菌的生物防治初探

禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)是小麦上的重要病原真菌。通过致病性测定从江苏小麦茎基腐病病害样本分离菌中筛选到了对小麦赤霉病和茎基腐病都有强致病力的F.graminearum菌株GF1117。为了对F.graminearum进行生物防治,利用稀释涂布平板法和平板对峙法从小麦不同生境中分离筛选到35株对GF1117具有明显拮抗效果的细菌菌株,分别在田间和温室进行了小麦赤霉病和茎基腐病的生物防治试验。结果表明,35株拮抗细菌对小麦赤霉病均有一定的防治效果,且在小麦感病品种和中抗品种上对茎基腐病的防效不同;菌株1-8对两种病害的防效都在45%以上。     

大豆根际细菌Ⅰ拮抗大豆根腐病菌研究

本研究从４１个土样中分离到大豆外根际细菌７２３株，根内细菌９４株。通过对病原菌Ｆ３，Ｗ１，Ｓ１的平板拮抗测定，得到拮抗菌２７９株对其中１５株根际细菌进行了温室防病试验，得到２株防病效果较好的菌株，其中ＢＨ１防病最高，对Ｆ３，Ｗ１，Ｓ２的防效分别为：６４。０％，６３．４％，３３．３％。     

大豆拟茎点种腐病菌Phomopsis longicolla荧光素酶标记菌株的制备及应用

大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis/Diaporthe longicolla)可侵染大豆引起种腐病和茎枯病等多种病害。本研究根据该病菌基因组的密码子偏好性，优化了外源的荧光素酶基因序列，通过酵母同源重组构建了荧光素酶表达载体，利用PEG介导的原生质体转化法获得了稳定表达荧光素酶的大豆拟茎点种腐病菌菌株PlYC2-1-Luc。结果显示：荧光素酶基因的引入不影响大豆拟茎点种腐病菌的生长速率和致病力。以PlYC2-1-Luc菌株进行示踪可直观发现：健康大豆中分离的3株内生镰孢菌能够显著抑制PlYC2-1-Luc生长，具有生防潜力；含苯醚甲环唑、精甲霜灵·咯菌腈和咯菌腈·噻霉酮的种衣剂均可抑制PlYC2-1-Luc向大豆种子扩展，表明这些药剂或其成分可用于病害防控；PlYC2-1-Luc对大豆品种Williams的致病力强于齐黄34,表明齐黄34更加抗病。该荧光素酶标记方法具有较好的有效性和稳定性，该研究为进一步开展大豆拟茎点种腐病菌的致病机理及病害防控技术研究提供了一种可视化、高效的菌株材料。     

芽孢杆菌BL-21、HNDF2对大豆胞囊线虫抑制效果的研究

从黑龙江大豆胞囊线虫病已发生衰退的地块中分离得到的2株生防菌株BL-21和HNDF2,试验考察了BL-21和HNDF2菌液及菌株发酵液处理对大豆胞囊线虫胞囊孵化和二龄幼虫产生的影响.结果表明:菌液处理的效果好于除菌发酵液处理,BL-21与HNDF2的混合菌液抑制作用最明显,对胞囊孵化的相对抑制率达到80.93％,对二龄...     

大豆镰刀菌病害生防菌的分离鉴定及防治效果验证

为解决镰刀菌病害对大豆种植业造成的损失,避免化学药剂对农产品质量和人体健康的风险,本研究分离针对大豆镰刀菌病害的生防菌,通过分子生物学和生物信息学手段鉴定生防菌类型,并通过温室试验验证生防菌对大豆尖孢镰刀菌病害的防治效果。研究共分离得到144株菌,其中1种Y8菌株对尖孢镰刀菌大豆专化型有较强的防治效果,这种菌经鉴定为假单胞菌属微生物。试验结果显示:Y8菌株能够有效保护大豆免受尖孢镰刀菌的侵染,使大豆的病情指数降低42.23%。相对于对照组,Y8菌株使大豆的生物量提高45.9%,使根生物量提高73.3%,大豆籽产量提高35.4%,叶绿素含量提高22.7%。这可能是由于Y8菌株成功的在大豆根际定植,抑制尖孢镰刀菌的生长,并且其次生代谢物能促进大豆的生长。本研究发现的假单胞菌属微生物可为大豆尖孢镰刀菌病害的防治提供一种有效的解决途径。     

茶树腐皮镰刀菌拮抗菌株的筛选鉴定及促生防病特性分析

腐皮镰刀菌（Fusariumsolani）是可以引起茶树茎腐和枯萎的致病真菌。为获得对茶树腐皮镰刀菌有拮抗效果的生防菌株，从河南省信阳市新县茶园收集的茶树（Camelliasinensis）健康叶片中采用梯度稀释法分离纯化得到内生细菌56株，通过平板对峙法筛选对腐皮镰刀菌抑制效果较好的菌株，并根据形态特征、生理生化特征和分子生物学技术对其进行鉴定，测定其防病促生指标并进行抑菌谱试验，通过发酵液试验和平板对扣法评估挥发性物质对腐皮镰刀菌菌丝生长的影响。结果显示，筛选得到的菌株YB-1476对腐皮镰刀菌菌丝生长抑制率达到63.31%，拮抗效果最佳，鉴定其为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。该菌株有产铁载体和吲哚乙酸、分泌β-1,3-葡聚糖酶和纤维素酶及溶磷的能力。抑菌谱试验表明，菌株YB-1476对平脐蠕孢菌（Bipolarissorokinana）、禾谷镰刀菌（FusariumgraminearumPH-1）、念珠状镰刀菌（Fusarium moniliforme）、尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporumf.sp.niveum）和茄链格孢菌（Alterna...     

茯砖茶中散囊菌的产毒性研究——Ⅰ.散囊菌培养液的毒性

用卤虫生物测试法对茯砖茶中分离的21株散囊菌进行产毒性筛选。在蔗糖酵母浸汁培养基上培养的散囊菌滤液用卤虫幼虫进行毒性测定,发现47.6%的菌株培养液对卤虫呈现毒性。其中毒性最大的是匍匐散囊菌032号,其培养液对卤虫的 LC_(60)是0.164μ1/m1,它的卤虫毒性单位是6098μ1/m1,并可引起小鼠急性中毒死亡。冠突散囊菌除1株菌外对卤虫幼虫不呈现毒性。文中还对散囊菌的培养性质、产毒特点作了分析和讨论。认为茯砖茶中除冠突散囊菌之外,其它散囊菌不应存正。     

一株对红棕象甲幼虫和卵有致病力的病原菌的分离鉴定

从自然死亡的红棕象甲卵和幼虫尸中分离得到一株产红色色素的昆虫病原菌HN-1菌株,经形态学鉴定、生理生化测定和分子鉴定,确定为:为粘质沙雷氏菌亚种(Serratia marcescens subsp)；16S rDNA通用引物扩增该菌得到了预期的1 408 bp条带,并与粘质沙雷氏菌亚种Serratia marcesce...     

从湖北青砖茶渥堆过程中分离真菌总状枝毛霉菌的鉴定与模拟发酵研究

对从青砖茶发酵堆中纯化分离的主要微生物进行鉴定。采用平板梯度稀释法对发酵茶渥堆中的微生物进行纯化分离;选取1株菌株LC-2利用分子生物学手段结合形态学鉴定等方法进行分类鉴定;并用高浓度冷冻菌粉对小鼠进行灌胃试验,检测急性毒理效果;最后对菌株LC-2进行青砖茶固态模拟发酵效果验证。结果表明,真菌LC-2菌落形态与显微形态与总状枝毛霉菌（Mucor racemosus Fres）相似,分子鉴定结果与总状枝毛霉菌（Mucor racemosus Fres）同源性最近,因此确定为总状枝毛霉菌（Mucor racemosus Fres）。菌粉灌胃未见对动物造成急性毒理损害。利用该菌株发酵生产的青砖茶汤色红黄,香气甜香略青,滋味绵软略甜,与传统工艺生产的青砖茶品质无大差异。由此证明该菌株确实是参与青砖茶渥堆发酵过程的重要菌株,并可以利用于未来青砖茶自动化发酵过程。     

向日葵列当的内生细菌分离筛选与初步鉴定

为获得对向日葵菌核病有较强生防效果的拮抗细菌,从向日葵根部一年生全寄生杂草向日葵列当植株内分离纯化得到135株内生细菌菌株。依次采用平板对峙法、生长速率法、离体叶片防效试验、菌核萌发抑制试验筛选得到2株对核盘菌拮抗活性较好的内生细菌LIEH 92和LIEB54,用内生拮抗细菌菌株发酵液无菌滤液进行离体叶片防效试验发现,2个菌株的离体防效分别达68.48%和62.33%;LIEH 92和LIEB 54滤液处理过的菌核均不萌发,在防治向日葵菌核病方面具有良好的生防潜力。除木糖利用和V.P试验(Vopes-prokauer test)外,菌株LIEH 92与粘质沙雷氏菌的生理生化特征一致。16S r DNA序列分析鉴定,与菌株LIEH 92相似性大于99%的菌株归于肠杆菌科的沙雷氏菌属。以16S r DNA序列为基础构建系统发育树,发现菌株LIEH 92与各粘质沙雷氏菌同源性最高,因此认为菌株LIEH 92可能为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的新亚种。     

盐碱地大豆根内促生拮抗细菌DCX的分离及鉴定

根系内生细菌资源的开发与利用是绿色农业发展的研究重点，而盐碱地大豆根内生细菌的分离与鉴定鲜有报道。本文以大庆盐碱地大豆根系为材料，分离纯化大豆内生细菌，采用平板对峙法和比色法测定内生细菌的抑菌能力和分泌IAA能力，选取抑菌谱广且分泌IAA能力强的株菌，通过检测形态学特征、生理生化性质、结构基因和功能基因序列的系统发育分析，明确细菌的分类地位。结果表明从大庆盐碱地大豆根内分离获得的一株内生细菌DCX，对10种植物病原真菌均具有拮抗作用，其中，对玉米新月弯孢菌、大豆菌核病菌、稻瘟病菌、禾谷镰刀菌的抑菌率分别为50.00%、78.12%、56.25%、43.75%，分泌IAA的能力为2.56±0.41μg·mL-1（n=6）。经形态学、生理生化试验及系统进化分析鉴定，DCX菌株属于解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），该菌株在pH11、NaCl浓度 10%的NA培养基中生长良好，可为盐碱地的作物病害防治提供资源。     

玉米茎腐病拮抗放线菌的筛选及抑菌促生活性鉴定

以禾谷镰孢菌为靶标,采用稀释培养法和平板对峙法从采集的玉米连作土壤中分离筛选出具有拮抗活性的放线菌菌株,选取1株拮抗效果最佳的菌株进行形态学、生理生化特征和系统发育分析,并对其进行抑菌活性试验,挖掘对玉米茎腐病致病菌-禾谷镰孢（Fusarium graminearum）有较高拮抗效果的根际促生菌资源。结果表明,玉米连作土壤中分离得到5株禾谷镰孢菌拮抗菌株,其中菌株G1为高效拮抗菌株。经形态学、生理生化结合16S rDNA将菌株鉴定为公牛链霉菌（Streptomyces tauricus）。拮抗菌株G1发酵液对禾谷镰孢的菌丝生长和孢子萌发均有明显的抑制作用,具有分泌吲哚乙酸和异羟肟酸型铁载体的能力。公牛链霉菌G1在由禾谷镰孢病菌引起的玉米茎腐病防治中具有良好的应用开发潜力。     

大豆内生细菌的筛选和鉴定

从黑龙江省不同地点采集大豆,从不同组织中分离内生细菌,并用分离得到的内生细菌对病原真菌做皿内拮抗试验,经过两次筛选有生物拮抗活性的内生菌菌株。结果表明,从大豆各种组织中分离得到137株内生细菌,其中2株对多种植物病原真菌具有拮抗作用,经初步鉴定2菌株均为芽孢杆菌(Bacillus sp.)。     

山茶炭疽菌对茶树的致病性及其对杀菌剂的敏感性研究

山茶炭疽菌（Colletotrichum camelliae）是引起茶树叶部病害的优势致病菌。从中国13个产茶省的茶树病叶中分离获得65株炭疽菌菌株，基于多基因系统发育树，结合菌落和分生孢子形态特征，对分离菌株进行鉴定，结果表明，分离菌株均属于山茶炭疽菌。采用离体叶片接种的方法进行致病力测试，结果显示，所有菌株均能导致茶树叶片发病，但不同菌株间的致病力存在显著差异。YCW1180、YCW1331、YCW1382、YCW1387、YCW1419、YCW1443、YCW1451、YCW1453、YCW1454、YCW1461、YCW1613和YCW2134等12个菌株致病力显著强于其他菌株，菌株YCW1378致病力最弱。采用菌落生长速率法测试65个山茶炭疽菌菌株对25%吡唑醚菌酯的敏感性，药剂敏感性结果显示，25%吡唑醚菌酯对菌株YCW1436的菌丝生长抑制率仅为36.00%，抑菌效果最差，而对大部分菌株的抑制率高于70.00%，表明大部分菌株对该药剂高度敏感。显微镜观察结果显示，25%吡唑醚菌酯影响了山茶炭疽菌分生孢子的萌发。以上研究结果为有效防治茶树叶部病害提供了理论基础。     

吉林省玉米穗腐病病原真菌中镰刀菌毒素的研究

先前的研究表明，在吉林省田间玉米穗腐病病原真菌中镰刀菌类占80％。本实验采用薄层层析法和气—质联用法对分离自穗腐病的9株镰刀菌进行了脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和串珠镰刀菌素的定性检测。结果在4株禾谷镰刀菌和一株木贼镰刀菌玉米培养物中检测到脱氧雪腐镰刀菌烯醇；在3株禾谷镰刀菌玉米培养物中检测到了玉米赤霉烯酮；在所有被检菌株中均未测到串珠镰刀菌素。     

一种野生大豆根际土壤细菌的分离及其防治大豆病害的研究

为筛选拮抗大豆根腐病的土壤微生物,以邻苯二甲酸为唯一碳源培养基,从野生大豆根际土壤中分离获得1株细菌,命名为HK26-21.通过平皿接种以及16s rDNA序列扩增,根据其生理生化特征和16s rDNA(GenBank Accession No.EF032879)序列相似性分析,将该菌株鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus).通过单因素试验法确定了最佳降解条件:温度为25℃,pH为7.0,降解速率与接种量呈正相关.平皿微生物对峙试验表明菌株可拮抗大豆菌尖孢镰刀菌和立枯丝核菌.初步认为所分离野生大豆根际芽孢杆菌HK26-21可以缓解大豆连作障碍.     

香蕉嗜铁内生细菌BEB99的分离鉴定及其抗病促生能力评价

从健康的香蕉根组织内分离获得一株对香蕉枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp. cubense）有拮抗作用的内生细菌菌株BEB99，经形态学、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析等方面的研究，鉴定该菌为劳尔氏菌（Ralstonia sp.）。铁载体检测结果发现，该菌株属于极高产铁载体菌株。盆栽试验结果表明，该菌株对香蕉枯萎病的防治效果达62.52％，并对香蕉植株具有显著的促生作用。