β-伴大豆球蛋白酶解物抑制致病菌粘附Caco-2细胞

以黄大豆和黑大豆为原料调制了β-伴大豆球蛋白,用SDS-PAGE和PAS染色分析了黄大豆及黑大豆来源的β-伴大豆球蛋白各个亚基构成及糖含量,并通过体外模拟人体消化方法制备了胃蛋白酶及胰蛋白酶酶解物,利用动物细胞培养的方法分析了两种β-伴大豆球蛋白酶解物对肠道致病菌大肠杆菌(EScherichia coli stralns serotype 026)和沙门氏菌(Salmonella typhimuryum LT2)粘附Caco-2细胞的抑制作用.结果表明:黄大豆及黑大豆来源的β-伴大豆球蛋白均含有相同的亚基,糖含量上基本一致,为3.5%-3.7%;二者加热处理后再体外消化得到的酶解产物与未加热处理相比可以显著抑制大肠杆菌对Caco-2细胞的粘附,而对鼠伤寒沙门氏菌的抑制作用不明显.这一结果说明,摄取加热后的β-伴大豆球蛋白,在经胃蛋白酶、胰蛋白酶等消化作用后,其消化产物有可能具有保护肠道上皮细胞不被大肠杆菌致病菌粘附的作用.     

固相酶法分离大豆胰蛋白酶抑制剂研究

以硅胶-壳聚糖为载体,通过戊二醛偶联胰蛋白酶,制备固定化酶,分离纯化大豆中胰蛋白酶抑制剂.对戊二醛浓度、反应温度、酶浓度等影响固定化酶制备的因素进行了研究.戊二醛的浓度为2.0%,反应温度为20℃,胰蛋白酶与载体比为15∶ 1 000时,分离纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂活性最高,达1872.51 U·mg-1,比粗品高46.22倍.结果表明通过该法能够获得较高活性大豆胰蛋白酶抑制剂,为大豆胰蛋白酶抑制剂的开发利用提供了依据.     

大豆Kti基因ihpRNA种子特异性表达载体的构建及转化

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,Kti)是大豆品质的主要营养抑制因子之一,培育低Kti含量的大豆品种是提升大豆品质的关键。本研究采用RT-PCR技术克隆得到大豆Kti基因的核心保守序列,并构建成种子特异性表达的、具有Kti基因反向重复结构的RNAi载体,利用农杆菌介导法侵染大豆品种吉林30子叶节,通过潮霉素筛选和PCR检测,获得4株转基因阳性植株。RT-PCR检测表明,构建的种子特异性RNAi载体可以在转基因植株的种子中特异表达,且Kti基因表达量均有降低;通过胰蛋白酶抑制剂活性检测发现,转基因大豆籽粒中胰蛋白酶抑制剂活性平均降低了77.5%。为进一步评价RNAi技术对大豆Kti基因的表达调控效果奠定良好基础。     

不同大豆加工制品中主要抗营养因子免疫及抑制活性的比较

大豆经适当加工可减少或去除其中的抗营养因子,因而大豆制品所含的抗营养因子成分不同.通过竞争ELISA法和胰蛋白酶抑制法检测豆粕、膨化大豆、脱壳豆粕、大豆分离蛋白、大豆浓缩蛋白、全脂豆粉、脱脂豆粉和热处理大豆粉大豆加工制品中胰蛋白酶抑制因子、大豆凝集素、大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的活性,并进行SDS-PAGE分析,进而比较其主要抗营养因子灭活的程度.结果表明,在现取样的10种大豆加工制品中,膨化处理除去了绝大多数的主要抗营养因子,是一种较理想的加工工艺;去皮豆粕中胰蛋白酶抑制因子和大豆凝集素几乎被灭活,但仍存在一定量的大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白.此项工作为评价大豆加工工艺提供理论基础.     

大豆胰蛋白酶抑制剂与大豆抗大豆胞囊线虫的关系

对大豆胞囊线虫3号小种的抗病品种Hartwig和小粒黑豆,感病品种辽豆15和中黄28分别接种线虫,检测大豆根系中大豆胰蛋白酶抑制剂的表达量对大豆抗胞囊线虫的抗性.经过胰蛋白酶抑制剂活性测定结果表明,接种大豆胞囊线虫的抗感品种的大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)表达量明显高于未接种的品种,各个品种的STI表达量也不同.说明大豆胰蛋白酶抑制剂参与抗病过程.但是各个品种的变化趋势并不相同,表明抵御线虫的抗病作用机制存在品种间差异.     

糖基化大豆蛋白酶解物的分离纯化及耐消化稳定性的研究

以糖基化大豆蛋白为原料,经碱性蛋白酶酶解制得具有抑制致病菌粘附功能的糖肽,并分析功能性糖肽的消化稳定性。酶解物用Sephadex G-25层析可获得表观分子量分别为20 000 Da、6 500 Da和小于3 000 Da组分。对酶解物胃蛋白酶和胰蛋白酶体外模拟依次消化2 h后,20 000~6 500 Da的大豆糖肽分子量变化不大,较稳定,而分子量小于3 000 Da的大豆糖肽中有5%被消化,稳定性略有变化。说明糖基化大豆蛋白酶解物其功能性成分可以较稳定存在于消化系统。     

大豆糖蜜上清液中胰蛋白酶抑制剂的去除

胰蛋白酶抑制剂是广泛存在于大豆及大豆制品中的抗营养剂,主要有Kuntiz型和Bowman-Birk型两种,为了得到高品质的产品,需要在加工过程中将其灭活或去除。通过研究大豆糖蜜上清液中胰蛋白酶抑制剂的活性、鉴定抑制剂的种类,采用超滤法将其去除。经测定,固形物含量约10%的大豆糖蜜上清液中胰蛋白酶抑制剂活性约为5.05×105TIA·g-1蛋白,约为鲜豆奶的5倍。用截留分子量3 k Da的超滤膜将大豆糖蜜上清液中的大分子蛋白富集,通过还原-Tricine-SDS-PAGE分析,截留部分在图谱上显示为分子量约10 k Da的模糊的条带。通过用2%巯基乙醇还原再用NEM封闭游离巯基的方式处理样品,使得截留部分在电泳图上显示为分子量约7~8 k Da的两条清晰的条带。综合判断,大豆糖蜜上清液中主要含有Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂。通过对比超滤效果,选择用截留分子量10k Da的超滤膜截留胰蛋白酶抑制剂,能够得到无抑制活性的透过液。     

大豆疫霉菌诱导的β-1,3-葡聚糖酶与寄主抗病性的关系

为明确-1,3-葡聚糖酶与大豆抗大豆疫霉根腐病的关系,分别测定了具有不同抗性的3个大豆品种的真叶和第1片复叶被大豆疫霉菌侵染后β-1,3-匍聚精酶的活性,并分析其与抗病性的关系.侵染大豆真叶和第1片复叶后备品种的β-1,3-葡聚糖酶活性均明显升高.接种大豆真叶后抗病品种48 h出现酶活性高峰,酶活性增加105.9%;中感晶种和感病品种72 h出现酶活性高峰,酶活性增加量分别为66.3%和65.7%.接种大豆复叶后酶活性的变化与真叶反应一致.说明β-1,3-葡聚糖酶的活性与大豆品种的抗病性呈正相关,抗病品种较感病品种酶活性峰值出现早,酶活性增加量高.对酶的部分性质的研究结果表明:酶的最适反应温度为55℃,最适反应pH为5.0,在55℃以下,pH 4.5～7.5范匍内酶活性较稳定.Ca2+、Mn2+、K+、Al3+对酶均有激活作用,Mg2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Fe2+、Hg2+、Ba2+对酶有抑制作用.抑菌试验表明,β-1,3-葡聚糖酶粗酶液对大豆疫霉菌的菌丝生长和游动孢子萌发有明显的抑制作用.     

酶解法制备大豆小肽的工艺研究

以豆粕为发酵原料,利用复合酶酶解方法制备大豆小肽,筛选碱性、中性蛋白酶和胰蛋白酶进行复配酶解豆粕。结果表明:复合酶的最佳配比为碱性蛋白酶∶中性蛋白酶∶胰蛋白酶为3∶2∶1;酶解条件:p H8.5,反应温度50℃,反应时间4.5 h,水解度为94.55%,苦味值为3;小肽显示分子量分布范围:≤1 000 Da可达74.67%以上,其中≤500 Da占55.61%以上。综上试验结果可知,对比单酶、双酶及3种酶酶解豆粕的水解度和苦味值两项指标,3种酶组合使用更适合于制备水解度高、苦味低的大豆小肽。     

测定豆类胰蛋白酶抑制剂活性和种类的电泳方法改良

以赤豆胰蛋白酶抑制剂(ABTI)及绿豆的胰蛋白酶抑制剂(MBTI)为材料,采用明胶-PAGE技术对其进行活性和种类检测。同时对影响明胶-PAGE技术体系的明胶浓度、酶解时间、脱酶液及电泳的灵敏度等因素进行探讨。结果表明:改良后的明胶-PAGE技术,鉴定胰蛋白酶抑制剂活性和种类的时间大大缩短,成本低,技术操作可行性强,重复性好,且检测ABTI的种类达7种,灵敏度达到每孔1.0 BAEE、蛋白点样量为每孔0.154μg。     

双酶法提取肌肽的工艺研究

以牛肉为原料,采用胃蛋白酶、胰蛋白酶双酶法提取肌肽。结果表明,通过正交试验获得的最佳提取工艺为：胃蛋白酶用量为2.0%,其酶解时间为7 h;胰蛋白酶用量为2.0%,其酶解时间为4 h。     

大豆脂氧酶的热失活动力学与其二级结构的圆二色谱表现

应用大豆脂氧酶的变温圆二色谱图研究了大豆脂氧酶(LOX)的热失活与二级结构变化过程.结果表明:在50一65℃条件下,10 min内,LOX的酶活随热处理时间延长而下降,其热失活过程遵循一级动力学,活化能Ea值为217 kJ.mol-1.在相同的热处理条件下,LOX中二级结构a-螺旋和β-折叠的相对含量均在20%左右浮动...     

双酶解法提取大豆蛋白的工艺研究

以豆粕粉为原料,加入高效蛋白酶和胰蛋白酶进行水解研究,对反应温度、底物浓度、反应时间、pH值、酶的用量及酶加入间隔的时间等工艺参数进行优化,并分析了大豆多肽的含量及蛋白质的水解度与各影响因素之间的关系.经过优化得到的反应条件为温度45℃,pH 7.5,液固比7: 1,加酶量为高效蛋白酶和胰蛋白酶各0.2 g,反应时间8 h,加酶间隔时间3 h.在此条件下,酶解后的蛋白质含量达85%、水解度为17.72%.     

世界大豆生产和科研的进展(续五)

(接续四)Kunitz胰蛋白酶抑制剂是大豆胰蛋白酶抑制剂的一种,Mandarino和Bolotari分析了13个巴西大豆品种的胰蛋白酶抑制剂含量,结果为10·65~27·23mg/g;Vollmann等利用基因技术培育了一种低胰蛋白酶抑制剂含量的大豆品种。发芽也是调控胰蛋白酶抑制剂含量的有效途径。Bhatia和     

菠萝蜜种子淀粉体外消化酶解动力学及血糖值分析

以菠萝蜜种子为原料提取淀粉,以木薯淀粉、大米淀粉、玉米淀粉和马铃薯淀粉为参照,采用体外消化试验测定菠萝蜜种子淀粉的快速消化淀粉、慢消化淀粉和抗性淀粉含量,并进行酶解动力学实验。结果表明:菠萝蜜种子淀粉快速消化淀粉、慢消化淀粉和抗性淀粉的含量分别为4.50%、19.65%和75.85%,酶解速率为0.60 h-1,平衡浓度为36.93%,酶解指数为41.43,血糖指数为62.45,属于中等血糖食物;菠萝蜜种子淀粉消化性、平衡浓度、酶解指数与血糖指数均高于马铃薯淀粉,而低于其他三种淀粉,酶解速率比马铃薯淀粉、木薯淀粉快,比大米淀粉、玉米淀粉慢。      

酶法制备大豆寡肽的研究

以Promatex为工具酶对大豆分离蛋白进行水解,制备大豆寡肽.分别讨论了热处理温度和时间对DH值的影响,确定了热处理条件为90℃、10min.Promatex的水解条件为:pH值为7.0,酶用量为0.53ml,酶添加量为E/S:10.6%,温度50℃,水解6hr.制取的大豆肽的DH为28.23%,PCL在2-4之间为寡肽.     

改进大豆品质提高豆蛋白利用的新途径

大豆是人们食用植物蛋白的主要来源之一,在人类日常生活中起着重要的作用。 大豆粉中基本氨基酸含量量与总氮含量的比仅次于鱼,高于芝麻、花生和各种粮食作物,但豆蛋白的有效率却往往低于水稻、花生等。这是由于摄入体内的大豆蛋白不能被充分消化。影响蛋白在体内消化利用的主要限制因子被认为是各种蛋白酶抑制剂,特別是胰蛋白酶酶抑制剂。     

福建主要乌龙茶品种PPO酶活特性的研究

对四种乌龙茶茶树鲜叶的多酚氧化酶(PPO)进行粗提,测定并比较不同品种酶的特性。结果表明:在邻苯二酚与被测酶液的反应体系中,当底物邻苯二酚(C6H6O2)量为0.3~0.9ml时,毛蟹、铁观音、黄旦、肉桂酶活力随底物浓度的增加呈曲线增长,含量太高会产生抑制作用,当底物含量∶酶含量=1.5∶1时,酶活力表现最高;毛蟹、铁观音、黄旦、肉桂酶活力在45~65℃范围内均呈ω型变化趋势,依次在45℃、55℃、65℃时出现高峰。在50~90℃下水浴处理1h,毛蟹、铁观音、黄旦、肉桂酶活力分别丧失34.66%~55.91%,22.68%~50.89%,23.14%~53.57%,31.58%~57.89%;酶活力的适宜pH相对偏碱,在pH8.6时表现为一个活力高峰。相同浓度的五种抑制剂对酶均有一定的抑制效果,其中NaHSO3对酶活力的抑制作用最强,L-半胱氨酸其次,NaCl的抑制效果最差。     

豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性测定方法研究

利用紫外分光光度计，对豆制品中胰蛋白酶抑制剂在抑制牛胰蛋白酶活性反应前后的吸光值差异制作差值曲线，从而得出斜率与抑制剂活性之间关系的方法。并通过反复的实验对比，最终可以快速准确地测定大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性。     

缺失Kunitz胰蛋白酶抑制剂和脂肪 氧化酶2的大豆新品种中黄31的选育

大豆新品种中黄31是中国农业科学院作物科学研究所利用缺失Kunitz胰蛋白酶抑制剂的高产、优质、 抗花叶病毒病( SMV)的高代材料ti15176作母本,美国引进优良品种Century近等基因系、脂肪氧化酶缺失的优质 材料Century - 2. 3作父本进行有性杂交,采用未变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native - PAGE)技术及等电聚焦聚丙烯 酰胺凝胶电泳( IEF - PAGE)技术,对杂种后代胰蛋白酶抑制剂( Ti) 、脂肪氧化酶(Lox)进行缺失检测及多年辅助选 择育成。该品种于2005年通过北京市品种审定委员会审定。其突出特点是高产、稳产、优质(蛋白质品质优异% 缺失Ti和Lox2) 、抗病、抗倒、综合性状优良。