黑龙江省番茄根结线虫病病原鉴定及抗病种质资源筛选

对黑龙江省大庆市温室内的番茄根结线虫进行形态鉴定和苗期抗病性鉴定技术研究，结果表明该线虫为南方根结线虫；采用接种苗龄３０ｄ（天），接种深度１０ｃｍ，接种量５０００条·株－１，接种天数５０ｄ（天）为最佳组合。用该鉴定方法对１８份番茄材料进行苗期抗根结线虫病鉴定，筛选出免疫材料２份，高抗材料４份，强抗材料４份，中抗材料２份，微抗材料１份，其余５份为易感材料。     

不同西瓜品种枯萎病抗性鉴定方法比较

以20个不同类型的西瓜品种为试验材料,采用室内苗期人工接种鉴定方法和分子标记检测方法进行比对,研究不同西瓜品种对枯萎病的抗性差异及不同鉴定方法之间的关系。试验结果表明,人工接种鉴定与分子检测方法鉴定结果基本吻合,CAPS 标记（7716_fon）可以将西瓜抗、感枯萎病的界限有效定性为病株率70%。     

分子标记辅助聚合番茄抗病基因育种

利用番茄抗病基因Tm-2a、I-2、Mi-1、Cf-9的分子标记辅助选择,聚合抗烟草花叶病、抗枯萎病、抗根结线虫和抗叶霉病4个基因于番茄育种材料中。室内苗期接种鉴定和田间观察,获得的含4个抗性基因的株系L11、L19、L46和L51对4种病害都达到了抗级（R）水平,且具有较好的农艺性状,可作为抗病育种亲本。     

番茄抗黄化曲叶病ty-5基因的PCR快速检测

以番茄抗病材料CLN32120a-23(含ty-5基因)和感病材料Moneymaker(不含抗病基因)为试材,通过杂交、自交获得的F1、F2代,利用SSR分子标记技术筛选出了1个与抗病性状共分离的共显性SSR标记。结果表明:该标记在CLN32120a-23中可以扩增出550bp的条带,在Moneymaker中可以扩增出780bp的条带,在F1中可以扩增出上述2条条带,标记结果与田间鉴定基本一致,证明该标记能够区分抗病材料、感病材料及杂合抗病材料,是与番茄抗黄化曲叶病毒病基因ty-5紧密连锁的共显性标记。对27份番茄材料进行检测,鉴定出有15份材料基因型为ty-5/ty-5,分子标记检测与田间检测结果吻合率达80%。该标记可用于番茄抗黄化曲叶病毒ty-5基因的PCR快速检测,同时为ty-5分子标记辅助选择育种的应用提供一定的参考依据。     

番茄斑萎病毒病抗性种质筛选及人工接种鉴定方法优化

对154份番茄材料(包括普通番茄76份,樱桃番茄78份)进行两年两次田间番茄斑萎病毒病的病情指数调查,筛选出14份对番茄斑萎病毒病具有稳定抗性的番茄材料,利用sw-5-2共显性SCAR标记对田间表现抗病的材料进行分子标记鉴定,发现3份抗病材料携带抗番茄斑萎病毒病的Sw-5基因。为缩短番茄斑萎病毒病人工接种鉴定周期,以含有sw-5的抗病材料H8和感病材料M82为研究对象,设置4、6、8、10片真叶4个接种时期,分别在接种后14、21、28 d进行病情指数调查和抗性分级,结果表明,6片真叶期接种,接种后28 d进行病情调查即可有效鉴别植株番茄斑萎病毒病抗性,与8、10片真叶期接种效果相同,人工接种抗病性鉴定效率显著提升。     

不同甘蓝类蔬菜材料对根肿病的抗性鉴定及分子标记辅助选择

根肿病是十字花科蔬菜主要病害之一,严重影响十字花科蔬菜生产,选育抗病品种是防治根肿病的有效途径之一.本试验采用灌根法苗期人工接种根肿菌4号生理小种,对29份甘蓝类蔬菜材料进行根肿病抗性鉴定;并利用与抗病基因CRb连锁的SCAR标记(OA)和与抗病基因CRbKato连锁的SSR标记(B0902)对人工接种鉴定表现免疫、高...     

与洋葱雄性不育基因紧密连锁的SCAR标记及其应用

以10份已知育性的洋葱材料和20份未知育性的洋葱后代材料为试材,采用SCAR标记技术,研究了标记OC2175在洋葱雄性不育系和保持系中的扩增情况,以验证该标记在洋葱细胞质雄性不育系选择方面的应用前景。结果表明:该标记可在不育系统扩增出2 175bp和1 053bp的2条片段,而在相应的保持系中仅扩增出1 053bp的特异片段。随后对20份未知育性的后代材料进行了PCR检测,结果显示有4份材料为可育株,另外16份材料为不育株。进一步对这20份未知育性的洋葱后代材料进行田间检测,发现分子鉴定为可育株的材料中有1株在田间表现为不育。可见,分子鉴定与田间鉴定的吻合度为95%,该标记可用于洋葱细胞质雄性不育株的分子标记辅助筛选。     

大白菜抗根肿病基因Crr3的PCR快速检测与种质资源筛选

以抗根肿病大白菜自交系‘YM-7’和感病自交系"冠291"及其杂交F1、F2代和24份国内外引进的大白菜种质资源为试材,采用人工接种和分子标记方法,研究了2对与抗根肿病基因Crr3紧密连锁分子标记的稳定性及24份新材料中Crr3基因的情况。结果表明:引物OPC11-2S在‘YM-7’中扩增出1条1.3kb片段,在"冠291"中扩增出1条1.0kb片段,在其F1代中同时扩增出1.3kb和1.0kb的片段,该分子标记在F2代中的鉴定结果与人工接种鉴定结果一致,利用引物OPC11-2S能准确标记出大白菜种质资源中Crr3基因,而且能够区分出Crr3基因的纯合性和杂合性,共选出2份含有杂合Crr3基因的新种质资源。     

与番茄颈腐根腐病紧密连锁的SCAR标记开发

利用与番茄颈腐根腐病抗性基因Frl紧密连锁的CAPS标记C2-25,开发设计了新的SCAR标记,用于快速检测Frl抗性材料。使用C2-25引物,在25份已知表型的番茄材料中进行PCR,产物单克隆测序后发现,19份纯合抗病材料存在1条完全相同的抗病序列;4份纯合感病材料存在1条完全相同的感病序列;2份杂合抗病材料均存在前述的抗病序列和感病序列。根据抗病、感病序列SNP差异设计引物,最终筛选得到可扩增出370 bp抗病特异片段和520 bp感病特异片段的番茄颈腐根腐病连锁标记R-6F/2R、S-3F/4R。在500株F_2材料中进行验证,检测到122株纯合抗病单株、257株杂合抗病单株和121株纯合感病单株。F_2材料人工接种鉴定结果显示,473株单株抗性与分子鉴定结果一致,分子标记辅助鉴定的准确率达到94.6%。开发的SCAR标记准确度高、成本低、操作简便,可用于Frl基因的分子标记辅助育种。     

不结球白菜新组合的根肿病抗性鉴定

以4个不结球白菜新组合为试材,通过室内人工接种和分子标记辅助选择的方法,对其根肿病抗性进行了鉴定,以期为不结球白菜抗根肿病分子标记筛选和新品种选育提供依据。结果表明:不结球白菜组合‘5-3’对根肿菌4号生理小种表现为高抗,‘5-2’表现为耐病,‘5-1’和‘5-4’表现为感病;利用5对根肿病抗性相关的引物对材料进行检测,结果显示组合‘5-1’在3对引物标记下均扩增出条带,‘5-3’和‘5-4’在2对引物下扩增出条带,‘5-2’在1对引物标记下扩增出条带。人工接种鉴定结果与分子标记鉴定结果存在差异,高抗材料‘5-3’在引物TCR05和TCR09下均有单一条带,而接种鉴定为感病的‘5-1’也同样在这2对引物下扩增出阳性条带,说明应用于不结球白菜根肿病抗性检测的分子标记的有效性需进一步提高,实践中应采用多种抗病鉴定相结合的方法。     

利用PCR技术同时鉴定番茄抗根结线虫和抗斑萎病毒基因

 利用同一PCR反应体系，对分别与番茄抗根结线虫的 基因和抗斑萎病毒(1w V)的Sw一5基因紧密连锁的SCAR标记进行了同时扩增筛选，扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合，其中与基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记，抗感试材均产生750 bp的特异片段，纯合和杂合抗病基因型试材存在 I酶切位点，酶切后分别产生了570 bp、160 bp和750 bp、570 bp、160 bp的不同特异性片段，而感病基因型试材无 I酶切位点；与Sw一5基因紧密连锁的SCAR2标记为显性标记，只有抗病试材扩增出400 bD的特异性片段。经反复验证，结果稳定准确可靠，可用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。     

根结线虫侵染对不同抗性番茄品种叶片叶绿素含量及其荧光参数的影响

以番茄品种世佳101(高感根结线虫)和精选红桃(中抗根结线虫)为试材,采用温室盆栽苗期人工接种技术,研究了南方根结线虫侵染对不同抗性番茄品种叶片叶绿素含量及其荧光参数的影响。结果表明,线虫侵染导致番茄叶片叶绿素含量减少,叶绿素荧光参数光系统Ⅱ(PSⅡ)最大光化学效率(Fv/Fm)和光合电子传递效率(ΦPSⅡ)下降,非光化学猝灭系数(NPQ)先上升后下降,并且不同抗性品种之间存在明显差异,其中世佳101的叶绿素含量、Fv/Fm和ΦPSⅡ的下降幅度均大于精选红桃。在侵染10d时,两品种的NPQ出现显著差异,精选红桃NPQ的升高幅度明显大于世佳101。显然,线虫侵染对精选红桃叶片的影响低于世佳101。叶绿素荧光参数Fv/Fm、ΦPSⅡ和NPQ可以作为无损检测番茄品种根结线虫抗性的生理参考指标,其中NPQ更适合。     

野生番茄LA2157中热稳定抗根结线虫基因Mi-9候选基因的分离与过表达载体构建

根结线虫是番茄上的重要土传病害,选育抗根结线虫品种是最有效的防治方法,但是目前转育到栽培番茄中的抗根结线虫基因Mi-1在土温高于28℃时就丧失了抗性。本试验利用热稳定抗根结线虫野生番茄材料LA2157,根据Mi-1基因的序列信息,对其中热稳定抗根结线虫Mi-9基因进行同源克隆,在LA2157中共获得2个候选基因片段;通过In-Fusion克隆技术,将候选基因与过表达载体p BI121进行连接,经电泳检测和测序分析,最终构建Mi-9候选基因的过表达重组载体。     

A SCAR marker linked to the N gene for resistance to root knot nematodes (Meloidogyne spp.) in pepper (Capsicum annuum L.)

The root-knot nematodes (Meloidogyne spp.) are important nematode pests and cause serious diseases in pepper in the world. No molecular markers linked to the nematodes resistance N gene have been reported. In this paper, ‘Carolina Wonder’ (Capsicum annuum L.), a sweet pepper line resistant to root-knot nematode with N gene, ‘20080-5-29’ (C. annuum L.), an inbred line susceptible to root-knot nematode with good horticultural characteristics, and their F₂ progeny with 320 individuals were used as materials. Evaluation of resistance and susceptibility of parental lines, F₁ and F₂ progeny inoculated with root-knot nematodes (Meloidogyne incognita) were carried out. ‘Bulked segregant analysis’ method was used to search for polymorphic markers from 512 pairs of AFLP primers. Based on the assessment of resistance and susceptibility and polymorphism of the AFLP marker in F₂ population, the genetic linkage distance between the AFLP marker and the N gene was estimated. One AFLP marker E39/M41-339 was obtained and transferred to a SCAR marker amplifying a 315 bp DNA fragment linked to the N resistant allele and a 331 bp fragment linked to the N⁺ susceptible allele. The distance between the molecular marker and the nematodes resistance N gene is 6.3 cM. This research delivered a valuable tool for the marker assisted selection of nematodes resistance in pepper.     

苗期注射接种法快速鉴定番茄青枯病抗性水平的研究

为了验证注射接种法鉴定番茄苗期青枯病抗性的效果,对合作903、桂砧1号以及TZ-1这3种不同番茄材料利用注射接种法与传统伤根接种法进行苗期青枯病抗性水平鉴定。结果表明:注射接种法(接种浓度1×10~7 cfu/mL)接种后第7天鉴定结果与传统伤根接种法(接种浓度1×10~8 cfu/mL)接种后第14天鉴定结果基本一致,说明注射接种法更加快捷、有效,可作为番茄苗期青枯病快速鉴定方法应用。     

番茄Ty-1、Ty-2和Ty-3基因的多重PCR技术鉴定

试验探索在同一个反应体系中完成3个SCAR标记的多重PCR扩增,为利用分子标记辅助番茄黄化曲叶病抗性育种提供一种省时、省力、经济有效的方法。对分别与番茄黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-1、Ty-2、Ty-3紧密连锁的共显性SCAR标记同时进行扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段一致。     

番茄斑萎病毒TSWV 的鉴定及抗病种质的筛选

 在北京顺义地区番茄栽培温室中随机抽取了15份疑似感染番茄斑萎病毒（TSWV）的植株叶片和果实,利用TSWV试剂盒进行DAS-ELISA检测,结果均为阳性,表明其感染了TSWV。利用来自秘鲁番茄的抗TSWV基因Sw-5的共显性SCAR标记,对442份番茄材料进行分析,筛选出24份含有Sw-5的材料,其中4份为野生番茄,1份为杂交种,16份为高代育种自交系,3份为野生潘那利番茄渐渗系。4份野生番茄综合农艺性状较差,如果实小、产量低、品质和风味差等,不能直接应用于育种;其余20份含Sw-5的材料综合农艺性状较好,可作为番茄抗TSWV的育种材料。     

大白菜黑腐病鉴定的湿度试验及其苗期与成株期抗病性的相关分析

对北京新4号、北京新1号、北京大牛心、京翠70号、京翠60号、京秋65号6个大白菜品种进行苗期黑腐病鉴定的湿度试验及其苗期和成株期抗病性的相关性分析。结果表明：试验材料之间对黑腐病的抗性存在显著差异,其中北京新1号抗性最强。比较不同保湿处理下的病情指数,表明湿度是影响黑腐病发病的关键因素。用DPS软件对6个大白菜品种的苗期和成株期抗性的相关性进行回归分析,表明苗期人工接种（接种前不保湿,接种后保湿24 h）和成株期的病情指数存在显著线性相关,说明用苗期人工接种鉴定大白菜黑腐病抗性的方法是可靠的。     

抗南方根结线虫黄瓜—酸黄瓜渐渗系的筛选及鉴定

 采用温室盆栽苗期人工接种鉴定技术,通过对黄瓜—酸黄瓜种间杂交后代群体进行抗南方根结线虫鉴定、形态学观测和分子生物学鉴定,筛选出抗南方根结线虫的黄瓜—酸黄瓜渐渗系ILs-10-1。抗性鉴定结果表明,渐渗系ILs-10-1对南方根结线虫的抗性表现稳定;田间农艺性状和形态学观测发现,其具有小叶、短果、棕色瘤刺、多分枝的特点,性状表现介于双亲之间;SSR分子标记分析结果表明,从302对SSR引物中筛选出的1对引物SSR18648,能够在渐渗系ILs-10-1中稳定重复地扩增出野生亲本酸黄瓜的特异DNA片段,从分子水平上证实了渐渗系ILs-10-1为野生黄瓜与栽培黄瓜发生渐渗杂交的种间杂交后代。