三种提取酿酒葡萄不同组织总RNA的方法比较

通过对比改良SDS-酚法、改良CTAB法和改良Trizol法3种RNA提取方法,提取"赤霞珠"(‘Cabernet Sauvignon’)葡萄芽、叶片和果皮RNA的质量及浓度,并进一步分离、纯化得到较高质量的RNA。结果表明:改良SDS-酚法与改良CTAB法适用于芽和叶片的提取,可以获得较好质量、高浓度的总RNA,其28S与18S亮度极高,5S清晰可见,完整性较好;改良Trizol操作环节较少,省时,质量好,条带锐利,可清晰看出28S与18S亮度比为2∶1,虽提取的样品浓度较低,但足以供下一步研究使用。     

3种方法提取辣椒根总RNA的效果比较

针对辣椒根中富含多糖多酚的特点,比较了Trizol法、改良Trizol法和改良CTAB法3种方法对辣椒根总RNA提取的效果。结果表明,Trizol法、改良Trizol法能提取到辣椒根总RNA,但效果不理想;改良CTAB法提取到的辣椒根总RNA,28 S rRNA的亮度是18 S rRNA的2倍,OD260/OD280和OD260/OD230值分别为1.88和1.80,RNA质量浓度为254.0 mg·L-1;用提取到的RNA进行RT-PCR后可扩增出acting基因特异片段。因此改良CTAB法提取辣椒根总RNA的效果好、质量高、完整性好,能够满足后续试验要求。     

新疆阿魏RNA提取的不同方法比较

以新疆阿魏叶片为材料，采用3种不同的方法分别提取其总RNA，用核酸蛋白检测仪、琼脂糖凝胶电泳方法检测其浓度、纯度及完整性，旨在建立提取新疆阿魏总RNA的最适方法，为后续深入研究新疆阿魏生物合成途径及机制奠定基础。结果表明：3种方法均能提取出新疆阿魏叶片总RNA。试剂盒法提取的总RNA质量最好，28S RNA亮度是18S RNA的2倍，条带清晰，操作简单，耗时短；Trizol法提取的RNA质量次于试剂盒法，且过程中无法判断次级代谢产物对RNA提取的影响，Trizol裂解液存在毒性物质；改良CTAB法提取的总RNA质量较差，无法满足下一步试验的要求，操作复杂，耗时较长。因此，试剂盒法为提取新疆阿魏RNA最佳方法。以试剂盒法提取的总RNA为模板进行PCR检测，得到的扩增条带清晰，与目的片段大小一致，进一步证明此方法提取的总RNA质量能够满足后续试验的要求。     

番茄叶片总RNA提取方法的比较

番茄叶片富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质，用普通方法提取番茄叶片总RNA时很难将其去除，试验比较研究了RNAplantReagent、UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒和改进Trizol三种方法的提取效果。结果表明，改进的Trizol法能从番茄叶片中提取纯度较高的RNA，     

分蘖洋葱叶片RNA提取方法的比较和分析

以新鲜的分蘖洋葱叶片为材料,比较了Trizol法、Trizol改进法、SDS法、SDS改进法以及柱式植物RNA提取法提取总RNA的效果。结果表明:Trizol法和Trizol改进法所提取的RNA得率很低,且不能有效除去叶片中的多糖成分;SDS改进法能够有效的去除分蘖洋葱叶片中的多糖,提取的RNA中28S RNA亮度约为18S RNA的2倍,OD260/OD280值介于1.7~2.2之间,但RNA的得率偏低,约为56.32μg/g;柱式植物RNA提取法提取的RNA 28S、18S、5S条带清晰,完整性好,RNA的得率最高,为123.58μg/g,完全适合于分蘖洋葱进一步的分子生物学研究。     

刺五加总RNA提取方法的比较

为了获取到高质量的刺五加总RNA,以叶片为试材,比较不同提取方法的提取效果。结果表明,改良的异硫氰酸胍法效果最优,方法简单、经济,通过该方法获得的总RNA能够很好的满足后续分子生物学实验的要求,试剂盒方法效果次之,CTAB法效果第三,Trizol法最差。     

李果实果肉组织RNA提取方法的比较分析

以中国李品种‘槜李’的果肉组织为试材,比较了Trizol法、RNA提取试剂盒和改良的CTAB法提取RNA的效果,筛选出适合李果实果肉组织总RNA的提取方法。结果表明:Trizol法和RNA提取试剂盒均不能得到完整的RNA;改良的CTAB法能有效去除多糖,28S条带的荧光亮度是18S条带的1.5~2.0倍,D260/D280值都在1.8~2.1,样品的平均得率为770.96~1 029.04ng/μL,RT-PCR结果扩增出了特异性条带,说明改良CTAB法从李果实果肉组织中提取的RNA质量高、完整性好、产率高,完全可以用于后续的分子生物学试验。     

一种适宜于RT—PCR检测的辣椒病毒RNA微量提取方法

以感染病毒病的辣椒叶片为材料,分别用改进的Trizol试剂提取法、异硫氰酸胍提取法、改进的酚一SDS提取法提取总RNA,经过RT—PCR,利用CMV和TMV的病毒外壳蛋白设计特异引物检测。结果表明：改进的Trizol试剂提取法能获得较高质量和产量的总RNA,可以单人大批次提取,并在辣椒病毒病检测中能稳定而准确地进行规模化RT—PCR检测。     

梨组织RNA提取方法研究

借鉴荔枝果实总RNA提取方法,针对梨本身的特点利用改良 Bugos法分别对叶片、花瓣、果肉中总RNA进行提取研究.结果表明:改良Bugos法对梨不同组织中RNA的提取效果较好,花瓣中RNA的相对含量最高,叶片次之,果肉最少.     

枸杞叶片RNA提取方法优化

以"宁杞1号"枸杞叶片为试材,采用优化的CTAB法、异硫氰酸胍法、Trizol法以及SDS法提取叶片RNA,以期筛选出适合枸杞叶片的总RNA的提取方法。结果表明:常规方法不能提取到完整的RNA,且条带不清晰、杂质多。经优化后,异硫氰酸胍法较为理想,并且可以用于RT-PCR试验。     

罗布麻总RNA提取方法比较研究

以Trizol法、改进SDS法及RNA plant plus Reagent试剂盒法提取罗布麻的总RNA,并通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测对其提取效果进行比较分析,以筛选出罗布麻总RNA最佳提取方法。结果表明:Trizol法无法有效获得罗布麻总RNA,有较为显著的降解现象;改进SDS法提取的罗布麻RNA总量较少、浓度低,且试验重复性差;RNA plant plus Reagent试剂盒法提取的RNA质量好,纯度高,完整性强,可直接作为后续相关分子生物学试验材料。     

树莓果实总RNA提取方法的比较研究

比较了SDS法和Trizol法提取树莓果实总RNA的效果。结果表明:Trizol法提取的RNA经电泳检测,未见条带,说明Trizol法并不适合富含多糖多酚的树莓。SDS方法提取树莓果实总RNA完整性好,28S和18S条带清晰,OD260/OD280值为1.83,在1.7～2.0之间,OD260/OD230值为2.01。结果证明,SDS法提取的总RNA可直接用于分子克隆等分子生物学实验。     

植物RNA提取方法的研究进展

高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的重要前提,由于植物组织细胞内组成成分的复杂多样性,使得植物组织RNA的提取方法具有多样性。现对已报道的异硫氰酸胍法、苯酚-SDS法、CTAB法、改良CTAB法、Trizol法等RNA提取方法在各种植物组织中的研究结果进行概括,旨在为进一步开展RNA提取工作提供参考。     

彩色马铃薯试管苗总RNA提取方法的改进与分析

以彩色马铃薯品系03-1的试管苗为材料,分别采用苯酚法和Trizol法提取马铃薯总RNA,通过对前人的操作和提取方法进行改进,旨在寻求一种低成本、操作简单、省时,适宜彩色马铃薯试管苗总RNA提取,且RNA质量能直接用于后续病毒检测研究的方法。结果表明:2种方法在操作改进后依然均能得到马铃薯试管苗的总RNA,经琼脂糖凝胶电泳检测,都可获得28S1、8S和5S rRNA 3条带,并对所得的总RNA进行马铃薯PVY病毒的检测,均可特异扩增出目标片段;Trizol法较苯酚法更简单省时,且所得总RNA完整性更强、纯度更高。     

简便高质量的食用菌总RNA提取方法

STE法是针对食用菌多糖含量高而设计的一种提取食用菌总RNA的有效方法。本研究以灵芝、香菇和白腐真菌TR16菌株的菌丝体为材料，采用STE法提取其总RNA，同时以Trizol法作对照。结果表明：采用STE法提取的三种菌丝的总RNAA260／A280比值在1．80～2．10范围内，A260／A230略大于2．00；而Trizol法提取的总RNAA260／A280比值小于1．80，A260／A230小于1．90，明显比STE法效果差；总RNA电泳检测表明：STE法的3条带（28S rRNA、18SrRNA和5SrRNA）清晰，无拖尾，无杂带，效果比Trizol法好；将STE法提取的总RNA进行反转录后合成双链cDNA，进行预扩增，电泳显示呈弥散状；再进行选择性扩增，有相同或相异的条带。进一步表明STE法提取的总RNA质量较高，可以满足后续分子生物学研究的要求。     

巨大口蘑子实体总RNA提取方法的比较

为给巨大口蘑cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)等后续试验提供高质量的RNA,以巨大口蘑子实体为试验材料,筛选最适的巨大口蘑总RNA提取方法。采用Trizol法、CTAB-LiCL法和试剂盒法提取巨大口蘑总RNA,并对所提取的总RNA浓度、A260/A280、A260/A230以及凝胶电泳效果等指标进行比较分析。结果表明,3种方法都可以提取巨大口蘑子实体总RNA,CTAB-LiCl法提取总RNA的A260/A280为1.92,A260/A230为2.25,质量浓度为235μg/g,说明其完整且纯净;而Trizol法和试剂盒法提取总RNA的A260/A230均小于2.0,说明提取RNA中存在蛋白质、酚类等杂质,且RNA纯度低,其质量浓度分别为147μg/g、89μg/g。CTAB-LiCl法提取的巨大口蘑总RNA浓度高,纯度也较理想,凝胶电泳效果好,是进行后续相关研究的较佳选择。     

不同方法提取木薯茎总RNA效果的比较研究

以木薯为试材,采用异硫氰酸胍法、热硼酸盐法、Trizol法、TransZol Plant试剂盒法4种不同方法分别提取木薯茎中总RNA,并对其提取效果进行了比较分析,探讨木薯总RNA的有效提取方法.结果表明:除了热硼酸盐法不能有效地提取木薯茎中总RNA以外,其余3种方法均能有效地提取木薯茎中总RNA.其中异硫氰酸胍法提取效果最好,不仅提取耗时最短,仅为1.5h,而且提取的总RNA质量和纯度相对最好.该方法是一种适合于木薯茎中总RNA提取的简单高效的方法.     

柑橘组织RNA提取方法研究

从操作耗时、所得RNA产量和质量等方面比较了5种RNA提取方法提取甜橙叶片、幼果、成熟果实果皮和汁囊组织RNA的效果。结果表明,改良Bugos法能从上述4种组织中获得较高产量和质量的RNA。用该方法提取的温州蜜柑成熟果实果皮RNA经RT-PCR扩增成功得到了蔗糖磷酸合成酶cDNA片段。该方法还可适用于猕猴桃、梨、甜瓜、龙眼、苹果和桃果肉RNA的提取。     

不同时期盆栽牡丹叶片RNA的提取研究

以牡丹品种‘洛阳红’为试材,采用CTAB-LiCl改良法,对小风铃期、大风铃期、圆桃期、平桃期、破绽期、初开期和谢花期的牡丹叶片进行总RNA提取。利用琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,紫外分光光度计检测RNA纯度。结果表明:7个时期提取的总RNA经电泳均检测到28S、18S和5SrRNA条带,吸光度比值A260/A280均介于1.8~2.0之间,其中大风铃期、圆桃期、平桃期、破绽期和初开期的rRNA条带整齐清晰,并且28SrRNA亮度高于18SrRNA;上述表明CTAB-LiCl改良法适合从牡丹叶片中提取总RNA,且大风铃期、圆桃期、平桃期、破绽期和初开期是最适合提取总RNA的5个时期。     

适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。