长期继代培养的柳橙胚愈伤组织再分化能力和遗传性研究

长期继代培养的愈伤组织,不仅是建立细胞无性繁殖系和作为种质资源保存的一种材料,也是细胞突变育种的理想试材。这主要是材料一致,容易处理,不受季节和植物发育阶段的限制,任何时候都可以进行试验,给研究工作提供了很多方便,避免了对种子和接穗作辐射诱变和化学诱变时容易形成的大量嵌合体,提高了诱变频率。 但是,除必须提高长期继代培养愈伤组织的增殖能力外,还要解决愈伤组织再生植株的分化率,以及植株的染色体倍性和其它遗传性状是否发生变化的问题。本试验试图通过对长期继代培养的柳橙(Citrus sinensis Osbeck)胚的愈伤组织进行研究,以对上述问题进行探讨。     

葫芦科蔬菜单倍体育种技术研究进展——花粉辐射和离体胚挽救技术

花粉辐射和离体胚挽救技术是葫芦科作物获得单倍体胚和单倍体植株的一种重要方式。该技术在葫芦科作物育种上应用广泛,本文综述了影响该技术的一些重要因素,如基因型、辐射剂量、辐射剂量率、植株生长环境、花粉发育阶段、离体胚挽救时间、胚发育时期、染色体加倍、倍性鉴定和植株再生技术等,为该技术的开展和应用提供可参考的理论依据。     

君子兰未成熟胚四倍体诱导及染色体数鉴定

 以君子兰（Clivia miniata Regel.）品种‘胜利’为试材,采用一种新型外植体未成熟胚,利用秋水仙素与组织培养相结合的方法,研究秋水仙素浓度、处理时间和不同胚龄对未成熟胚诱导加倍的影响。结果表明：在MS + NAA 2.0 mg · L-1 + BA 1.5 mg · L-1培养基上,0.01%秋水仙素处理180 d胚龄的未成熟胚20 d诱变效果最佳,四倍体诱变率最高,达30.8%,形态变化率达36.5%,死亡率为34.1%。经0.03%秋水仙素处理120 d胚龄的未成熟胚30 d诱变效果也较好,四倍体诱变率较高,达24.0%,形态变化率达21.1%,死亡率为46.7%。经染色体数观察,加倍处理后代中存在2x、4x和混倍体植株。随机调查了267株加倍处理植株,得到30株四倍体（2n = 4x = 44）、194株二倍体（2n = 2x = 22）和43株混倍体,平均四倍体诱变率为11.2%。秋水仙素处理出现的植株生长缓慢,生根明显较晚,叶片变宽变短等形态变化可以作为加倍的初期有效判断指标。     

本地早蜜橘胚性愈伤组织的离体诱导

柑橘胚性愈伤组织诱导技术在柑橘种质资源离体保存、理化诱变、原生质体融合、外源基因转化等柑橘种质保存及新种质创制过程中有着重要的基础研究地位。目前随着柑橘分子生物育种技术的快速发展,胚性愈伤组织作为柑橘理化诱变、原生质体融合、外源基因转化的理想起始材料,其在柑橘种质创新研究中的基础应用作用更为明显。柑橘胚性愈伤组织目前主要可通过败育的成熟胚珠、未成熟胚珠、实生幼苗胚轴茎段、子叶以及花药培养等途径来诱导获得。     

利用胚性细胞悬浮系研究香蕉枯萎病抗性离体筛选技术

以香蕉(Musa spp. AAA group)胚性细胞悬浮系(Embryogenic Cell Suspension,ECS)为试材,进行抗枯萎病离体筛选技术研究。首先测试不同的γ射线(60Co)辐射剂量对ECS植株再生能力的影响;在此基础上,以不同浓度的枯萎病病原菌毒素粗滤液(FOC)为选择压力,研究FOC对ECS植株再生能力的影响,并进行离体抗性筛选。结果表明,ECS的植株再生能力与辐射剂量之间呈负相关,半致死剂量为70～80Gy。同样地,未经辐射处理的ECS其植株再生能力也随着FOC体积分数的增加而急剧下降,但经辐射处理过的ECS其植株再生能力与CK相比成倍地增加;当FOC体积分数达到12%后,只有从经80Gy辐射后的ECS获得了再生植株。这表明ECS耐FOC的能力随着辐射剂量的增加而增强。     

菜豆A18-1 60Co-γ 射线诱变和突变体库的构建

分别用辐射剂量为0、50、100、150、200、250 Gy 的60Co-γ 射线处理菜豆品种A18-1 的成熟干种子，根据辐射剂量和种子的相对出苗率建立线性回归方程，研究60Co-γ 射线对菜豆的辐射诱变效应。结果表明，辐射处理的半致死剂量为126 Gy。用辐射剂量为126 Gy 的60Co-γ 射线处理A18-1 的干种子，对M2 进行田间表型筛选，共筛选到279 株突变株，占M2 诱变群体总数的1.83%。构建了包括叶、茎、花和育性、荚、生长习性和株型、黄化、熟期等性状变异类型的突变体，可为今后菜豆遗传改良和功能基因组学研究提供新的材料。     

柑桔种胚分离培养试验小结

柑桔种子的多胚性和珠心胚的生长优势现象,给有性杂交的育种工作带来很大困难。多胚柑桔作为母本的杂交种子直接播种土壤,所能获得的真正杂种苗很少,多数为珠心胚发育而来的“伪杂种”。杂交母本的胚数愈多,合子胚的成苗率愈低,这是当前多胚柑桔杂交育种上所面临的迫待解决的问题。我所柑桔的选育种工作是1965年开始的。过去几年主要是进行温州蜜柑的营     

生长素和细胞分裂素诱导植物胚性愈伤组织研究进展

植物胚性愈伤组织在植物研究与应用中是一种重要的试材,有很多关于植物胚性愈伤组织诱导方法研究的报道。生长素和细胞分裂素被广泛应用于胚性愈伤组织的诱导,是胚性愈伤组织诱导的关键因子。阐述了生长素和细胞分裂素在植物胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生过程中的作用,讨论了其在植物胚性愈伤组织诱导中的作用、使用方法与原则,为愈伤组织诱导、愈伤组织胚性化诱导等研究中植物生长调节剂的使用提供依据。     

香榧体细胞胚发生、发育的形态与细胞学观察

将香榧(Torreya grandis‘Merrillii’)的未成熟合子胚置于SH+0.1 mg·L-1 NAA+500 mg·L-1AC+3%蔗糖+0.5 g·L-1 Gln培养基上暗培养45 d,诱导产生半透明颗粒状胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转入SH+20 g·L-1 PEG+10 mg·L-1 ABA培养基中暗培养3个月诱导体细胞胚。采用碘—碘化钾染色和石蜡切片技术对体胚起源、形态发育与细胞组织学进行了观察。结果表明:胚性愈伤组织起源于合子胚胚轴表皮或皮层细胞的对称分裂。胚性愈伤组织含有两类细胞,一种是细胞质浓厚、细胞核大、体积小的圆形胚性细胞,另一种是高度液泡化拉长的细胞。胚性愈伤组织包含由这两种细胞构成的原胚团Ⅰ、原胚团Ⅱ和原胚团Ⅲ,以及一些游离细胞。原胚团Ⅲ在无植物生长调节剂的SH基本培养基上形成原胚,原胚接入成熟培养基,历经球形、棒状、心形、鱼雷形胚后发育成子叶胚。将子叶胚转入萌发培养基后胚根伸长,胚芽发育长出针叶,形成完整的再生植株。同时在离体培养中合子胚胚柄处退化的裂生多胚也能重新发育形成胚体。在初生体胚发育过程中表面常伴有次生体细胞胚的形成。     

荔枝体胚发生过程中的细胞学观察

以荔枝三月红胚性愈伤组织为材料,采用改良的石蜡切片法观察荔枝胚性愈伤组织结构及体胚发生过程,结果显示荔枝的体胚发生经历球形、心形、鱼雷形、子叶形4个过程;荔枝在胚性细胞分裂发育形成体胚之前,出现与周围细胞明显不同的界限,形成细胞间隔离;比较荔枝胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织的细胞学特性,发现胚性愈伤组织具有核大、质浓、染色深、细胞排列紧密等特点,与非胚性愈伤组织明显不同。通过系统观察荔枝胚性愈伤组织结构以及胚性细胞分裂、生长方式和体胚发生过程,为胚性愈伤组织的利用提供细胞组织学依据。     

杏胚培诱导不定芽试验

诱发多倍体是果树育种的一条重要途径。石荫坪等(1982)为排除常规诱变中细胞嵌合体的干扰,采用试管诱导单细胞突变的方法,首先进行了仁果类中苹果与梨胚培诱发不定芽的研究,发现胚的各个部分都能发生不定芽。本研究以核果类的杏为试材,进行了胚培诱导不定芽的试验。结果表明,杏与苹果有很大的差异,现简报如下。 材料与方法 试材为水杏品种的成熟果实,6月8日采收,6月20日接种。接种前用肥皂水洗刷果实,自来水冲洗干净,70%酒精消毒3—5分钟,在超净工作台上,剖开果实,砸破果核,取出种仁,剥去种皮,去掉子叶,将胚接种于诱导不定芽的培养基上。 诱…     

朱顶红‘Red Lion’胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生

以‘Red Lion’朱顶红(Hippeastrum vittatum)的鳞片为外植体进行体细胞胚诱导和形态学与组织学的胚性鉴定。结果表明,鳞片在MS+2 mg·L~(-1) BA+1 mg·L~(-1) NAA+2 mg·L~(-1) TDZ+30 g·L~(-1)蔗糖培养基上胚性愈伤组织诱导率可达90.63%,而不添加TDZ的培养基上胚性愈伤组织诱导率为0。胚性愈伤组织可呈白色松散、透明膨松、透明致密、微棕色松脆和翠绿色松脆等类型;非胚性愈伤组织呈微棕色致密状。胚性愈伤组织中可明显观察到球形胚、心形胚和棒状胚3个发育时期。体细胞胚在不添加植物生长调节剂的MS培养基上可发育形成芽和根,长成完整小植株。     

芦柑,雪柑胚性愈伤组织的诱导

柑桔是世界重要果树之一，由于其所特有的多胚性，漫长的童期，遗传上的高度异质性及在部分品种的不育性限制了有性杂交在柑桔品种改良匕的应用，原生质体融合技术的出现，使柑桔品种问、种间、属问的基因重组成为可能，为柑桔品种改良，抗病有种提供了新的方法和手段。为完成芦柑、雪租等基香科植物的原生质体融合，首先必须建立芦柑、雪柑胚性愈伤组织。柑桔的珠心组织可产生无性胚，经组织培养获得的胚性愈伤组织，具有良好的分化、再生能力，可为其原生质体培养、体细胞亲交、种质的保存等方面研究提供材料来源。诱导胚性愈伤组织一般可…     

柑橘体细胞胚发生的组织细胞学研究

以伏令夏橙长期继代培养的愈伤组织诱导体细胞胚发生。切片观察表明:胚性愈伤组织由胚性和非胚性细胞组成,体细胞胚发生以单细胞外起源方式为主,也可能来自胚性细胞团。胚性细胞分裂产生两个细胞,进而分化发育成多细胞原胚、球形胚、心形胚及子叶胚。次生胚和畸形子叶胚的产生较常见。通过PAS反应发现,胚性细胞和球形胚时期有两次淀粉积累高峰,淀粉的消长与体细胞胚发生的能量供应密切相关。     

荔枝组织培养中胚状体产生的类型及分析

以荔枝２０—３０ｄ龄幼胚为外植体诱导产生愈伤组织，并筛选建立了幼胚胚性愈伤组织系。胚性愈伤组织在附加２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上诱导胚状体分化，在附加ＮＡＡ和ＩＢＡ的培养基中促进胚状体的发育和成熟。在体外胚胎发生过程中，形成大量各种类型的胚状体，其中出现不少异常胚；胚性愈伤组织继代培养过程中存在大量的染色体变异，这可能是产生异常胚的重要原因之一。     

柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究

选用‘Peng柑’、‘锦橙’、‘桃叶橙’、‘华农本地早’花后7周幼果胚珠进行培养，其胚状体发生的百分率分别是：48.5%、21.2%、19.8%、6.4%；胚性愈伤组织则为：28.2%、13.5%、15.8%、5.8%。各品种胚状体和胚性愈伤组织发生的百分率明显不同，与品种胚数多少相一致。不同激素和有机物对柑桔胚珠培养、胚状体的发生及胚性愈伤组织形成产生不同的影响，多单胚的‘华农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织。胚珠培养中，胚状体发生的方式，根据来源不同分为三种：第一种是由胚珠（或已黄的球形胚上）长出白色的胚性愈伤组织，继而产生胚状体；第二种是在已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚性愈伤组织和胚状体；第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体。     

柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究

选用‘椪柑’、‘锦橙’、‘桃叶橙’、‘华农本地早’花后7周幼果胚珠进行培养.其胚状体发生的百分率分别是:48.5%、21.2%、19.8%、6.4%;胚性愈伤组织则为:28.2%、13.5%、15.8%、5.8%.各品种胚状体和胚性愈伤组织发生的百分率明显不同.与品种胚数多少相一致.不同激素和有机物对柑桔胚珠培养、胚状体的发生及胚性愈伤组织形成产生不同的影响.多单胚的‘华农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织.胚珠培养中,胚状体发生的方式,根据来源不同分为三种:第一种是由胚珠(或已黄的球形胚上)长出白色的胚性愈伤组织,继而产生胚状体:第二种是在已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚性愈伤组织和胚状体;第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体.     

山核桃间接体细胞胚发生和植株再生

 以山核桃（Carya cathayensis Sarg.）自然授粉后10周的幼胚为外植体,对影响胚性愈伤组织和体胚发生的主导因子（基本培养基、植物生长调节物质等）进行了比较分析;对影响体胚萌发的脱水处理时间进行了比较;并采用石蜡切片法对幼胚脱分化产生胚性愈伤组织及体胚发生发育过程进行了组织细胞学观察。结果表明,幼胚胚轴和子叶接种在基本培养基1/2 MS上,胚性愈伤组织诱导率显著高于其它处理,达45.3%。接种于基本培养基DW中的幼胚体细胞胚诱导率显著高于其它培养基处理,达16.7%。显微镜下可观察到球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚。培养基添加1.0 mg · L-1 6-BA和0.01 mg · L-1 picloram（氨氯吡啶酸）组合时,胚性愈伤组织诱导率最高,为48.6%;而1.0 mg · L-1 6-BA与0.001 mg · L-1 picloram组合,体胚诱导率最高,为23.6%。体细胞胚发生方式属于间接体胚发生。用饱和Ca(NO3)2 · 4H2O对体胚进行脱水处理,脱水处理3 d后萌发率为39.03%,显著高于对照及其余处理。将脱水处理后的体胚接种至WPM基本培养基中,光照条件下培养,10周后可长成具3 ~ 4片真叶的完整植株。     

油松未成熟合子胚离体培养诱导胚性愈伤组织

研究了油松未成熟合子胚不同发育时期和不同植物生长调节剂组合对油松胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:在沈阳地区,油松未成熟合子胚诱导胚性愈伤组织的最佳采种时间为7月10日左右;以DCR为基本培养基,添加较低浓度的KT和较高浓度的2,4-D有利于油松胚性愈伤组织的诱导,其中以添加2,4-D 2mg/L和KT 0.5mg/L时诱导率最高,可达88.3%。     

柑桔胚培养技术的研究——Ⅱ、多胚性品种未熟幼胚的早期离体培养

本文是叙述多胚性柑桔品种未熟幼胚的早期培养技术,有可能为提高育种效率提供一条更有效的途径。使用的是椪柑( Citrus reticulata Blanco)和香水橙 ×枳( citrus sinensis × Poncirus trifoliata)的幼小种子。开花后105天的椪柑种子接种在附加IAA(1ppm)、BA(0.2ppm)、CH(400ppm)的MS培养基上,其中的幼胚能继续“胚性生长”并且增大,同时还形成了大量的胚状体。当这些增大了的胚及胚状体转移到含有NAA( 0.75 ppm)的MS培养基上后,能分化根、茎、叶,并发育成正常的植株。对授粉后75天的香水橙×枳的幼胚也作了诱导,并获得初步成功,它们的部分原胚形成了植株。