抗禽流感、新城疫、法氏囊三联高免卵黄抗体的研制及应用

采用免疫学技术将禽流感(AI)、新城疫(ND)和传染性法氏囊(IBD)疫苗多次免疫产蛋鸡,获得高免蛋,并制成AI-ND-IBD三联高免卵黄抗体液,应用HI和AGP等血清学方法测定AI、IBD及ND抗体滴度。结果证明:AI,HI和IBD,AGP抗体滴度为1 : 128～1 : 512,ND,HI抗体滴度为1 : 256～1 : 1 024,在发病初期给病鸡肌注高免卵黄液,总有效率达89 %。该抗体液制作简单,价格低廉,效果可靠。     

高免卵黄液对法氏囊强毒感染鸡防治试验

应用鸡传染性法氏囊病(IBD)地方流行毒株(郑毒)人工感染30日龄的IBD阴性鸡,于感染前、后不同时间注射IBD高免卵黄液的试验结果表明,随高免卵黄液注射时间的推迟,防治效果随之下降。但即使在感染后72小时全群发病高峰时进行注射,死亡数仍比对照组减少20%。卵黄抗体与种鸡血清抗体关系基本一致。高免卵黄液来源丰富,制备简单,含有针对变异株或亚型的母源抗体,因此推广高免卵黄液被动免疫,对迅速控制流行有很高的实用价值。     

心包积液-肝坏死综合征高免卵黄抗体的研制

采取心包积液-肝坏死综合征病鸡的肝脏匀浆冻融,接种SPF鸡胚,制备尿囊液灭活水苗,用两种免疫程序对产蛋鸡进行免疫,用琼脂扩散试验检测其卵黄抗体水平,制备高免卵黄抗体。经中和试验和临床试验,结果显示高免卵黄抗体对该病的预防和治疗效果明显。     

抗新城疫-禽流感二联卵黄抗体冻干粉剂的制备及应用

采用新城疫-禽流感(H9)二联灭活苗和重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)免疫健康蛋鸡,制备新城疫-禽流感(H5、H7、H9)多价二联高免Yolk antibodies against lyophi lized powder卵黄抗体冻干粉剂,应用该抗体开展了新城疫和禽流感预防和治疗试验。结果表明:临床上以饮水或拌料方式添加使用,安全有效,发病初期鸡新城疫和禽流感治愈率均在95%以上、发病中期治愈率为85%以上、发病晚期治疗效果不明显。使用剂量为0.10 g^0.25 g之间。试验表明:新城疫-禽流感(H5、H7、H9)多价二联高免卵黄抗体冻干粉剂对防治ND、AI具有良好的效果。     

正确使用高免卵黄液

高免卵黄液通常是通过强化免疫普通商品代母禽,收集、处理其高免蛋制备而成的,在此过程中,有两个问题很难避免.     

法氏囊发病鸡治疗时需注意的八个问题

法氏囊发病鸡在治疗上采用高免卵黄抗体 聚肌胞进行肌肉注射的方法,可取得较好疗效,但需要注意以下8个问题。1.高免卵黄抗体应做到低温保存和运输,以4～8℃为宜。2.高免卵黄抗体的疗效与其使用时间有关。发病初期的鸡群配合聚肌胞注射高免卵黄抗体,能明     

鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制

用DVH弱毒疫苗和DVH油乳剂苗免疫健康高产蛋鸡制备高免卵黄抗体,研究了高免卵黄抗体治疗雏鸭DVH的疗效。结果表明,高免卵黄抗体治疗DVH的疗效取决于卵黄抗体的中和效价、治疗时间和免疫途径。卵黄抗体的中和效价应达28.5以上,并且在感染DVH 24 h以内对雏鸭进行肌肉注射,免疫效果最好。     

鸡法氏囊和腺病毒精制卵黄抗体制备与应用

利用当地分离的禽法氏囊和腺病毒流行株制备二联油乳剂灭活疫苗后制备高免精制卵黄抗体,通过多次加强免疫,以PEG6000沉淀提取和微滤孔滤膜过滤获得精制卵黄抗体,并对卵黄抗体的质量进行检验和临床试验,结果表明,卵黄抗体的预防和治愈效果较好。     

抗IBD高免卵黄抗体的研制

应用ＩＢＤ二价弱毒细胞苗和二价油乳剂灭活苗对鸡进行加强免疫，待高免鸡血清ＩＢＤＡＧＰ抗体效价达１：２５６以上时，收集高免蛋，用于制备抗ＩＢＤ高免卵黄抗体，制出的高免卵黄抗体ＩＢＤＡＧＰ效价为１：６４～１：１２８，用这种高免卵黄抗体对万余只ＩＢＤ病鸡进行治疗，剂量为每只鸡肌注１ｍｌ，总有效率在９０％以上。由此可见，ＩＢＤ高免卵黄抗体具有特异性好、治愈率高、取材方便、制造简便和使用方便等优点，适用于基层推广使用。     

高免卵黄抗体提纯及提取液冻干的研究

针对高免卵黄抗体的缺陷,采用聚乙二醇法提纯卵黄抗体IgG,IgG稀释为原卵黄液体积时效价不变,为11∶28,细菌和病毒学检验均为阴性。将IgG稀释液制成冻干制剂,实验表明冻干后效价不变且对温度的抵抗力大大提高,冻干制剂防治效果良好。说明此种方法可避免常规卵黄抗体临床传播疫病的危险,运输和保存更加方便,真正做到了安全、高效。     

蛋鸡重组高致病性禽流感H5N1(Re-4+Re-5)2价灭活疫苗免疫效果的评价

参照农业部既定的蛋鸡高致病性禽流感免疫程序,对100只蛋鸡雏免疫重组高致病性禽流感H5N1(Re-4+Re-5)2价灭活疫苗,300只蛋鸡雏分3组分别免疫重组高致病性禽流感H5N1(Re-4)株、(Re-5)株灭活单苗作为对照,通过免疫应激反应观察、抗体效价检测,以评价该疫苗的免疫效果。     

抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定

制备抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体并对其进行鉴定.采用纯化抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗AIV-H5N1的单克隆抗体细胞株,将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚类,并对其抗原结合位点进行分析.共获得了5株单克隆抗体杂交瘤细胞株,均为抗AIV-H5N1的特异性单克隆抗体,而且与H9N1型禽流感病毒,H13型禽流感病毒,鸡新城疫病毒,产蛋下降综合征病毒,鸡传染性支气管炎病毒均无交叉反应.     

黑龙江大庆地区禽流感流行病学调查

为了了解禽流感病毒在黑龙江大庆地区禽类中的流行情况,我们在大庆地区五区四县采集了1180份样品,采用常规鸡胚尿囊腔接种方法分离病毒,利用微量血凝试验（HA）及RT—PCR鉴定。结果在大庆地区所采集的样品,未检测出有血凝活性;而在绥化地区采集样品中检测出3株禽流感病毒。虽然大庆地区未检测出禽流感病毒,但在周边的绥化地区检测出禽流感病毒,大庆市有被禽流感传染的威胁,提示应加强对禽流感的预防。     

Immune Efficacy of a Recombinant Fowlpox Virus Co-Ex-pressing HA and NA Genes of Avian Influenza Virus in SPF Chickens

A recombinant fowlpox virus co-expressing Haemagglutinin(HA)and Neuraminidase(NA)named as rFPV-HA-NA was produced by HA and NA gene of A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)isolate of avian influenza virus recombined into the genome of fowlpox virus. In this study,to evaluate its ability of protecting chickens against challenge with a lethal dose of highly pathogenic isolates of avian influenza virus,eight-week-old specificpathogenic-free(SPF)chickens were vaccinated with recombinant virus or the wildtypefowlpox virus by wing-web puncture. After challenge 4 weeks with 10 LD50 highly pathogenic avian influenza virus H5N1 and H7N1 isolate,all chickens vaccinated with recombinant virus were protected,while the chickens vaccinated with the wildtype fowlpox virus or unvaccinated controls experienced 100% mortality respectively following challenge. This complete protection was accompanied by the high levels of specific antibody response to the respectivecomponents of the recombinant virus.     

无锡地区鸡群禽流感疫苗免疫效果

对江苏省无锡地区鸡群使用禽流感H5和H9灭活疫苗或活疫苗后的免疫水平进行了监测。结果显示：母源抗体水平越低,抗体上升幅度越大,且抗体达到最高时所需的时间越短;H5单价灭活苗与H5＋H9二联灭活苗产生H5的抗体效果差异不大。通过对其他禽类和鸟类的临床样品检测发现：应加大对野禽及鸟类的监测力度,防止携带该病毒传播给家禽。这一监测结果对有效防控该病具有重要的实践价值。     

抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究

利用禽流感H9亚型病毒(AIV-H9)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经免疫荧光试验(IFA)检测,以研制抗禽流感病毒(AIV)单克隆抗体。结果获得了5株特异性抗AIV核蛋白(NP)的单克隆抗体细胞株,分别命名为AIV-NP-2C3、AIV-NP-6A5、AIV-NP-3H9、AIV-NP-7B4、AIV-NP-2H4。这5株单克隆抗体能与所有试验的AIV-H9病毒反应,Western blotting方法鉴定结果表明,单克隆抗体仅识别60 ku的蛋白抗原,而不与新城疫病毒、禽网状内皮组织增殖症病毒、传染性法氏囊病毒等反应。初步应用结果显示,以这些单克隆抗体建立的间接免疫荧光试验或ELISA方法可迅速检测出禽流感病毒,这些单克隆抗体在禽流感的预防监测中将发挥重要的作用。     

鸡白细胞介素-18对H9亚型禽流感灭活油乳苗的免疫增强作用

[目的]探索鸡白细胞介素-18（IL-18）在H9禽流感（AI）灭活油乳苗免疫中的免疫佐剂作用.[方法]从鸡脾淋巴细胞中克隆鸡IL-18基因,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建真核表达质粒pIL-18.将重组真核表达质粒pIL-18、H9亚型AI灭活油乳苗及其二者联合分别免疫14日龄SPF鸡,检测其细胞免疫和体液免疫水平,评价鸡IL-18在H9亚型禽流感灭活油乳苗中的免疫增强作用.[结果]成功克隆了鸡IL-18全基因,大小为597 bp.质粒pIL-18和H9亚型AI灭活油乳苗联合免疫的SPF鸡所产生的HI抗体效价在接种第4周后明显高于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组;其T淋巴细胞的增殖反应也强于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组.[结论]质粒pIL-18能提高H9亚型禽流感灭活油乳苗诱发的免疫应答,为研究防制禽流感的新型疫苗提供了新思路.     

AA鸡禽流感母源抗体和免疫抗体消长变化的研究

[目的]为AA鸡的禽流感预防提供依据。[方法]用不同剂量的2种禽流感疫苗免疫8日龄AA鸡,通过血凝抑制(HI)试验研究AA鸡禽流感母源抗体和免疫抗体的消长变化。[结果]AA鸡禽流感母源抗体在1~7日龄时缓慢下降,之后迅速下降,表明其半衰期约为2 d。2种禽流感疫苗均可用于AA鸡的预防接种,免疫后15 d,免疫抗体HI效价达到保护临界值,20 d时达到峰值,然后缓慢下降,43日龄时仍在临界值以上。2种不同剂量的禽流感灭活油乳剂疫苗接种后所产生的HI抗体效价的峰值差异极显著。[结论]选用禽流感灭活油乳剂疫苗,免疫剂量为0.5 ml/只,免疫时间为8日龄,整个饲养期免疫1次,即可预防商品代AA鸡禽流感。     

重组鸡γ-干扰素对H5亚型禽流感灭活苗的免疫增强作用

为研究重组鸡γ-干扰素(Chicken interferonγ,ChIFN-γ)对禽流感灭活疫苗的免疫增强效果,使用重组鸡γ-干扰素作为免疫佐剂,联合禽流感灭活疫苗采用胸部肌肉注射的方式免疫SPF雏鸡,免疫后每周测定血清抗体效价、免疫器官T、B淋巴细胞转化水平,攻毒后计算攻毒保护率。结果表明,鸡γ-干扰素提高了血清抗体水平,免疫器官T、B淋巴细胞转化水平和攻毒保护率,与疫苗组相比多数指标差异显著(P0.05)。鸡γ-干扰素对H5亚型禽流感灭活疫苗具有免疫增强作用。     

不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)\[GS/GD/96\]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8 μg HA/0.3 mL（肌肉注射）、103PFU/100 μL（刺种）、106EID50/100 μL（滴鼻、点眼）、15 μg/200 μL（肌肉注射）等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒（HPAIV） GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护（不发病、不致死、不排毒）;在病毒攻击前,灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）所诱导的HI抗体平均水平分别为875log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。