点带石斑鱼脑组织和视网膜中神经型一氧化氮合成酶的分布与定位

【目的】研究点带石斑鱼脑组织和视网膜中的一氧化氮（NO）含量及神经型一氧化氮合成酶（nNOS）分布与活性,为深入揭示NO在点带石斑鱼神经系统中的作用机制打下基础。【方法】采用NADPH-d组织化学染色法、免疫组织化学法、蛋白免疫印迹（Western blotting）及Griess试剂法,对点带石斑鱼脑组织和视网膜中nNOS的分布与活性及NO含量进行分析。【结果】经NADPH-d组织化学染色后,一氧化氮合成酶（NOS）阳性物质呈蓝色。在点带石斑鱼大脑中,NOS阳性物质位于神经元和神经纤维;在小脑中,NOS分布在颗粒层的颗粒细胞、分子层的神经纤维和浦肯野细胞层的浦肯野细胞;在视网膜中,NOS分布于色素上皮层、视锥视杆层、外核层、外网层、内核层、内网层、节细胞层和视神经纤维层。经免疫组织化学染色后,nNOS阳性物质呈深棕色。在大脑中,nNOS存在于神经元和神经纤维;在小脑中,nNOS分布在颗粒层、分子层和浦肯野细胞层;在视网膜中,nNOS分布在色素上皮层、视锥视杆层、外核层、外网层、内核层、内网层、节细胞层和视神经纤维层。Western blotting检测结果显示,点带石斑鱼脑组织和视网膜中的nNOS在显色后的硝酸纤维素膜上均出现3条免疫印迹条带,对应分子量分别为80、120和130kD。NO含量在点带石斑鱼脑组织和视网膜中分别为17.601±1.743和13.624±1.249μmol/L,nNOS活性在脑组织和视网膜中分别为38.070±3.047和23.748±2.860U/mg。【结论】在点带石斑鱼脑组织和视网膜中均存在nNOS,推测nNOS在点带石斑鱼脑神经及视神经系统生理活动中发挥重要作用。脑组织中的NO含量和nNOS活性均显著高于视网膜,是由于脑组织作为重要的中枢神经,对机体生理功能起重要调节作用。     

恒河猴卡耶哈岛一氧化氮合酶阳性神经元形态学观察

目的:研究恒河猴卡耶哈岛一氧化氮合酶阳性神经元的分布。方法:用尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶(NADPH-d)组织化学和免疫组织化学法。结果:卡耶哈岛各部均分布有NADPH-d组化和nNOS免疫组化反应呈阳性的NOS神经元,胞体呈锥体形和卵圆形,突起阳性,中等大小,胞体直径13.6μm。结论:恒河猴卡耶哈岛内分布有形态和大小较一致的一氧化氮合酶阳性神经元。     

恒河猴纹状体一氧化氮合酶阳性神经元的形态学观察

为研究恒河猴纹状体一氧化氮合酶阳性神经元的形态特征和分布特点,利用尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶(NADPH-d)组织化学和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫组织化学法。结果发现尾壳核内分布着大量形态多样的NADPH-d和nNOS阳性神经元,其胞体呈锥体形、多角形、纺锤形、梭形和卵圆形,直径9.6~27.2μm。在内囊中有少量的阳性细胞,形态多样。外髓板中有淡染的NADPH-d、nNOS弱阳性大细胞,直径27.2~54.4μm。恒河猴纹状体内有大量的形态大小不一的一氧化氮合酶阳性神经元。     

兔脑nNOS阳性神经元的形态、结构和分布规律

利用SABC免疫组织化学方法，对兔脑神经型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的形态、结构及分布规律进行了系统研究，结果表明：① nNOS阳性神经元呈深棕色，着色主要在胞质内，细胞核处较为浅淡；神经元胞体形态多种多样，有三角形、圆形、椭圆形、梭形等，神经元突起有一个或者数个；nNOS阳性神经纤维大多呈棕色串珠样，有些区域的阳性纤维交错分布，相互交织成网状。②家兔的各个脑区均有nNOS阳性神经元和神经纤维出现,其中在大脑皮质、小脑、丘脑下部、中脑和脑桥广泛分布，延髓分布极少。③nNOS阳性神经元，在仔兔时就已基本发育到成年兔水平，以后随着年龄增长逐渐发育成熟至衰老，到2岁龄（老年兔）时就出现了显著的衰老变化，即密度减小，表达强度减弱，第一级突起数减少，最长突起长度变短等。结果提示：nNOS阳性神经元及其催化产生的NO在家兔神经系统的发育和神经调控中起重要作用。     

GABA免疫阳性神经元在三黄鸡小脑内的分布

为探明三黄鸡小脑皮质各层的细胞构筑和GABA免疫反应神经元在其小脑内的分布情况,采用尼氏染色和免疫组织化学SABC技术,对10羽三黄鸡的小脑进行了研究。研究发现:三黄鸡小脑皮质各层的细胞构筑与北京鸭、乌鸡、鸽子和非洲鸵鸟的大体相似;GABA免疫阳性细胞位于小脑皮质的蒲肯野细胞层中,阳性较明显;小脑中央核也有大量阳性神经元,多数呈梭形或不规则多边形,多数神经元胞质呈强阳性染色。以上结果表明:GABA阳性神经元在三黄鸡小脑皮质各层均有分布,GABA可能在介导小脑复杂功能中发挥重要作用。     

兔脑和脊髓内开胃素A免疫阳性神经元和神经纤维的分布

采用免疫组织化学法研究了10只青紫蓝兔脑内开胃素（Orexin） A免疫阳性神经元和神经纤维的分布。结果显示，Orexin A免疫阳性神经元分布于下丘脑的视上核、室旁核、背内侧核、穹隆周核、外侧区、前区和后区以及底丘脑的未定带。Orexin A免疫阳性神经纤维广泛分布于中枢神经系统内，在端脑分布于大脑皮质、尾状核、隔核和杏仁核；在间脑分布于丘脑、下丘脑、上丘脑和垂体；在中脑分布于中央灰质、前丘、后丘、黑质、网状结构和中缝核；在脑桥分布于蓝斑、网状结构和中缝核；在延髓分布于极后区、孤束核和迷走神经背侧运动核；在小脑和脊髓也有分布。     

三七皂苷对大鼠缺血脑组织一氧化氮合酶表达的影响——免疫细胞化学与图像分析系统在免疫药理学研究中的应用

应用免疫细胞化学技术与图像分析系统研究三七皂苷的免疫药理学机制。正常组大鼠;实验组大鼠(左颈总动脉结扎并于术前4h肌注三七皂苷,7mg.kg~(-1))与对照组大鼠(左颈总动脉结扎用等量生理盐水取代三七皂苷)各分4h组、12h组与24h组。各组鼠大脑皮质、海马与尾壳核内神经元性一氧化氮合酶(nNOS)的含量用LSAB法与计算机数字图像分析系统检测。结果显示对照组大鼠海马、尾壳核与大脑皮质内nNOS含量显著下降,三七皂苷可恢复缺血脑组织的nNOS表达,并对缺血脑组织发挥保护作用。同时,本实验还提示免疫细胞化学技术与图像分析系统用于免疫药理学研究是可行的。     

山羊小肠内AchE和NOS阳性神经元数量分布的比较

应用乙酰胆碱酯酶(AchE)和NADPH-黄递酶组织化学方法,研究了15日龄、4月龄和12月龄山羊小肠中胆碱能神经元和NO能神经元的数量分布变化。结果显示:1)肌间神经丛和黏膜下神经丛含有丰富的AchE阳性神经元,神经元聚集成神经节,并由节间支连成网状。2)NOS(一氧化氮合成酶)阳性神经元主要分布于肌间神经丛,神经元构成的神经节也连成网状;黏膜下神经丛内NOS阳性神经元稀疏,散在分布。3)小肠肌间神经丛中,12月龄的AchE和NOS阳性神经元总数比15日龄的增加163%和137%,但阳性神经元密度降低39%(AchE)和40%(NOS)。4)比较各肠段,AchE和NOS阳性神经元密度在回肠中最高,但神经元总数以空肠最多。结果表明山羊小肠中分布有丰富的胆碱能和NO能神经元,但黏膜下神经丛中胆碱能神经元多于NO能神经元;随着山羊小肠的发育,胆碱能和NO能神经元的数量逐渐增多而密度却下降。     

Leptin长型受体与神经肽Y在猪前脑内共存

用原位杂交与免疫组织化学相结合的方法研究了 5头三元杂交仔猪前脑内leptin长型受体mRNA与神经肽Y(NPY)免疫反应阳性物质的共存关系。实验结果表明 ,leptin长型受体mRNA和NPY免疫反应阳性神经元分布于下丘脑漏斗核和前室周核、海马、杏仁核及大脑皮质。上述结构内一些表达leptin长型受体mRNA的神经元也含有NPY免疫反应阳性物质 ,即leptin长型受体与NPY共存于同一神经元内。提示leptin可能通过下丘脑漏斗核和室周核以及边缘系统的海马和杏仁核 ,甚至大脑皮质中表达leptin长型受体mRNA的NPY免疫反应阳性神经元调节动物的摄食、能量代谢、生长和繁殖等活动。     

D-半乳糖对小鼠初级感觉皮层M1受体表达的影响

[目的]对小型哺乳动物通过皮下注射D-半乳糖(D-galactose,D-gal)可快速有效建立脑衰老的动物模型,本试验旨在探讨长期注射D-gal对小鼠感觉皮层中胆碱能M1受体表达的影响,以揭示D-gal致衰老的神经机制.[方法]成年健康小鼠随机分为2组,对照组皮下注射生理盐水,试验组皮下注射D-gal(100 mg·mL-1),每天1次,连续8周.开颅,取初级感觉皮层制作组织切片,进行Nissl染色和M1受体免疫组织化学染色,显微镜下比较对照组和试验组皮层中总神经元密度、M1受体免疫阳性神经元密度,以及M1受体免疫阳性神经元与总神经元比率的变化.[结果]试验组小鼠皮层中神经元密度未有显著改变(P＞0.05),而M1受体免疫阳性神经元密度显著降低(P＜0.05),尤其在第Ⅲ(47.62％)和第Ⅴ(37.14％)层中.[结论]长期注射D-gal不影响皮层中神经元的数量,但能导致M1受体表达显著下降,特别发生在传出神经元层,这可能是D-gal致衰老动物感觉功能下降的重要原因之一.     

中药饮水剂对感染球虫后雏鸡血清一氧化氮及其合成酶的影响

为了进一步探讨中药饮水剂的抗球虫作用机制,将120只14日龄海兰褐蛋公雏,随机分为对照组(I)、感染组(Ⅱ)和中药饮水剂组(Ⅲ),每组40只。除I组外,其余每只鸡口服感染8.0×104个E.tenella孢子化卵囊,分别于感染0、3、6、9、12 d后,每组随机取鸡5只,心脏采血,用于血清一氧化氮(NO)及其合成酶(iNOS)的测定。结果表明,在感染后3 d,各组血清NO含量和iNOS活性无显著差异(P>0.05);在感染高峰期(6 d),Ⅲ组血清NO含量及iNOS活性较Ⅱ组分别降低了36.17%和14.25%,差异极显著(P<0.01),与Ⅰ组比较无显著差异(P>0.05);至感染后9 d,虽然Ⅲ组血清NO含量及iNOS活性与Ⅱ组差异不显著,但仍较其降低了12.53%和13.51%;至感染后12 d,Ⅱ组血清NO含量及iNOS活性基本恢复正常水平。结果提示:中药饮水剂通过抑杀球虫,以减少炎性因子的释放,抑制宿主细胞内iNOS活性及表达,降低血清NO含量。     

杂色鲍对底泥悬浮物胁迫的生理响应

研究了不同浓度的底泥悬浮物(100、200、300、400 mg/L)对杂色鲍Haliotis divericolor的急性毒性以及对其血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的影响。分别在处理后24、48、72、96 h从杂色鲍足部取血,测定其血清中NO含量和NOS、SOD、CAT活性,并记录了24、48、72、96 h时杂色鲍的存活情况。结果表明:在处理后96 h内,对照组和试验组的杂色鲍均未出现死亡,但300 mg/L和400 mg/L试验组鲍的活性明显下降;用悬浮物处理后,杂色鲍血清中NO含量及NOS活力显著高于对照组(P<0.05),且NOS活性的最大值出现的较NO最大值早;试验组SOD活性和CAT活性在24 h后显著低于对照组(P<0.05)。表明底泥悬浮物浓度对杂色鲍的生理生化存在一定影响。     

NO和水孔蛋白在小麦种子萌发中的互作效应

为探究一氧化氮(NO)和水孔蛋白(AQP)在种子萌发过程中是否存在互作效应,以小麦品种陕合6号（耐旱型）和郑引1号（干旱敏感型）为材料,研究H₂O、HgCl₂（500 μM）、PEG（PEG-8000,-0.35 MPa）、SNP（0.5 mM）、SNP+PEG、SNP+HgCl₂溶液浸种对种子萌发的影响。结果表明：SNP(NO供体)促进了抗旱品种种子的萌发,而抑制了干旱敏感品种种子的萌发;AQP在干旱敏感品种种子萌发中的作用大于抗旱品种;NO能够 解除干旱和水孔蛋白抑制剂HgCl₂对种子萌发的抑制作用;处理对吸胀种子萌发的抑制效应小于直接在处理液中萌发的抑制效应;NO对AQP的活性具有调节作用且NO和AQP的作用主要存在于种子最初吸水萌动的12 h内。     

一氧化氮在兔球虫感染中作用的研究

通过腹腔注射的途径给予感染斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai)的家兔不同浓度的NOS底物L-精氨酸(L-Arg)和iNOS抑制剂L-氨基胍(L-AG),对球虫感染家兔诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、血清中NO的浓度、每克粪便的球虫卵囊数(OPG)及肝的剖检和镜下病变进行了研究。结果表明:感染E.stiedai后,家兔肝匀浆的iNOS活性和血清中NO浓度逐渐升高,感染对照组、添加L-Arg组、L-AG组3组均在感染后第12 d达到最高值,而后逐渐下降,于23 d左右下降到感染前的水平;L-Arg可增强肝的iNOS活性,使其释放大量NO,产生对球虫的抑制或杀伤作用,减轻球虫感染引起的病变;而L-AG则抑制肝的iNOS活性,使生成的NO减少,对球虫的抑制作用减弱甚至消失,从而加重球虫感染引起的病变。结果提示:NO及iNOS确实参与了家兔E.stiedai的感染过程,并且NO具有一定的抑制或杀伤兔球虫的作用。     

一氧化氮对低温贮藏桃果实线粒体氧化损伤的影响

【目的】分析一氧化氮(NO)对冷藏过程中桃果实线粒体氧化损伤的影响。【方法】分别用15 μmol/L NO、5 μmol/L c-PTIO (NO清除剂)、对照(去离子水)浸泡30 min处理桃果实。测定0℃下桃果实的线粒体完整性、活性氧含量、抗氧化酶的活性及相关品质指标。【结果】在桃果实低温冷藏过程中,NO处理可以维持桃果实硬度、色差L值及可溶性固形物含量,降低线粒体耗氧量和减少活性氧的积累,调节线粒体呼吸控制率(RCR)、线粒体膜电势,线粒体细胞色素C含量以及线粒体抗氧化酶活性。【结论】NO通过减少线粒体氧化损伤,维持线粒体的完整性,延长桃果实的贮藏期。     

一氧化氮和一氧化氮合酶在兔斯氏艾美耳球虫感染时作用的研究

本试验以腹腔注射的途径给予斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)感染家兔不同浓度的一氧化氮合酶(NOS)底物L-精氨酸(L-Arg)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂L-氨基胍(L-AG),对家兔球虫感染时血清中NO浓度和肝的iNOS活性及各试验组家兔的病变进行了研究.试验结果表明:家兔感染E.stiedai后,血清中NO浓度和肝匀浆的iNOS活性逐渐升高,感染对照组、添加L-Arg组和添加L-AG组3组均在感染后第12 d达到最高值,而后逐渐下降,于23 d左右下降到感染前的水平;L-Arg可增强肝的iNOS的活性,促进体内大量生成NO,产生对球虫的抑制或杀伤作用,减轻球虫感染引起的病变;而L-AG则抑制肝的iNOS活性,使体内生成的NO减少, 对球虫的抑制作用减弱甚至消失,从而加重球虫感染引起的病变.结果提示:NO和iNOS参与了球虫感染过程,证明NO是抗E.stiedai感染的一种效应分子.     

IWF诱导小麦悬浮细胞产生NO及其与Ca2+的关系

 【目的】以感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260作为激发子,刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨悬浮细胞受激发子刺激引发的NO变化情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用Greiss试剂法及荧光分子探针DAF-2DA标记法检测胞内NO的动态变化,同时借助药物学试验探讨Ca2+和NO的关系。【结果】IWF-260能诱导小麦悬浮细胞产生NO,NO在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。药物学抑制剂试验证明NOS和NR及胞外钙离子内流均与IWF-260刺激小麦悬浮细胞产生的NO有密切关系,且在NO的产生途径中,NR途径为主要途径。【结论】IWF-260能够诱导小麦悬浮细胞产生NO,NOS、NR及胞外Ca2+内流参与了此过程。     

Effects of Nitric Oxide and Exogenous Ethylene Treatments on Ethylene Biosynthesis in Feicheng Peach

The effects of nitric oxide （NO） and exogenous ethylene on ethylene biosynthesis in harvested Feicheng peaches were studied. The antagonistic actions between NO and exogenous ethylene was also investigated. The Feicheng peaches were fumigated with 10μL L^-1 NO, 1 000 μL L^-1 ethylene, or 10 μL L^-1 NO plus 1 000 μL L^-1 ethylene for 3 h. The results suggested that application of exogenous ethylene promoted the biosynthesis of endogenous ethylene in peach fruit. The treatment with NO remarkably inhibited the biosynthesis of ethylene by significantly reducing the activities of ACC synthase （ACS） and ACC oxidase （ACO）. Ethylene biosynthesis in the fruits treated with both NO and exogenous ethylene was lower than that in fruits treated with exogenous ethylene alone but higher than that in fruits treated with NO alone, suggesting that there were antagonistic actions between NO and exogenous ethylene. NO could inhibit the biosynthesis of ethylene and the catalysis of exogenous ethylene during ethylene biosynthesis in peach fruits.     

NO在植物体内产生的途径及其作用

近年来的研究表明一氧化氮(nitric oxide,NO)是生物体内的重要的信号分子,参与多种生理功能的调控。文章主要介绍了在植物体内NO的产生途径、信号传导机制、与其他信号分子之间的相互作用及其与植物激素之间的作用。     

L-精氨酸对肺动脉高压肉鸡肺动脉NOS活性的影响

240羽商品代肉鸡于14d时随机等分为常温对照组(NT),低温组(LT)和低温加L精氨酸(L arg)组(LA)。自14d起,对LT和LA组肉鸡采用低温诱导肺动脉高压综合征(PHS)。此外,LA组自14d起在饲料中按100mg·kg-1剂量添加L arg。测定右心室/全心室(RV/TV)和血浆一氧化氮(NO)水平。肺组织切片经βNADPH组织化学染色后,检测直径在100～200μm的肺小动脉平均光密度(D)值,以D值代表NOS的活性。结果显示:LT组PHS发病率显著高于对照组(P<0.05);LA组与对照组相比无显著差异(P>0.05),但显著低于LT组(P<0.05)。LT组肉鸡RV/TV在45d时显著升高(P<0.05),血浆NO浓度总体上与NT组差异不显著(P>0.05);LA组肉鸡RV/TV值与NT组相比无显著差异(P>0.05),其血浆NO浓度自32d时起较NT和LT组显著升高(P<0.05)。LT组肉鸡肺动脉D值较NT组显著降低(P<0.05);LA组D值仅在24d时降低(P<0.05),在其余时间段与NT组相比无显著差异(P>0.05),但显著高于LT组(P<0.05)。上述结果提示,添加L arg可在一定程度上保护并激活肺动脉NOS活性,从而使内源性NO合成增加。