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1.
蝉拟青霉原生质体形成与再生 总被引:5,自引:0,他引:5
比较了不同酶液,菌丝生长增减基,渗透稳定剂,酶解温度及菌龄等因素对原生质体形成的影响。用1.5%的溶壁酶,菌丝生长培养在为淀粉琼脂培养基,0.6MKCl为渗透稳定剂,温度28℃,菌龄16h,可从所试菌株的菌丝获得大量的原生质体。0.6MNaCl为稳定液,黄豆粉培养基上原生质体再生率可达7.97%。原原生质体释放和再生的形态学过程进行了描述和显微摄影。 相似文献
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探讨了在森林资源综合利用中具重要意义的林腐性用菌香茹的原生质体制备及再生条件。对用MYG培养的菌丝,采用以0.6mol甘露醇为稳渗剂的1.5%溶壁酶Lywallzyme进行酶解脱壁,在菌龄7d,酶解液PH值4.5、湿度28℃,酶解4h时原生质体产量最高(6×10^6/ml,每0.1g鲜菌丝)。酶解温度≥31℃时原生质体产量和再生率都明显降低。用SO培养基代替MYG可使原生质体产量提高1倍,但再生率 相似文献
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研究报道了制备禾谷镰孢(FusariumgraminearumSchw.)原生质体的方法及影响原生质体再生的条件。PDS培养液中培养的菌丝和5%绿豆汁中产生的分生孢子,在28℃下通过蜗牛酶(3%)、蜗牛酶+纤维素酶+溶菌酶(1.5%+1.5%+1.5%)酶解,2h开始有原生质体释放,5h左右达释放高峰,后趋于稳定。而以纤维素酶(3%)、溶菌酶(3%)、蜗牛酶+纤维素酶(1.5%+1.5%)、蜗牛酶+溶菌酶(1.5%+1.5%)、纤维素酶+溶菌酶(1.5%+1.5%)处理,原生质体形成效果较差。原生质体在PDAS高渗培养基上再生频率较高(20%~30%),在MMS上再生频率较低,而在NMS上原生质体则不能再生。在PDAS中加入KClO3和MNNG对原生质体再生有一定影响 相似文献
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禾谷镰孢原生质体的形成与再生 总被引:2,自引:0,他引:2
研究报道了制备禾谷镰孢原生质体的方法琢影响原生质体再生的条件。PDS培养液中菌丝和5%绿豆汁中产生的分生孢子,在28℃下通过蜗牛酶(3%),蜗牛酶+纤维素酶+溶菌酶(1.5%+1.5%+1.5%)酶解,2h开始有原生质体释放,5h左右达释放高峰后趋于稳定,而以纤维素酶(3%)、溶菌酶3%)、蜗牛酶+纤维素酶(1.5%+1.5%)、蜗牛酶+溶菌酶(1.5%+1.5%)、蜗牛酶+溶菌酶1.5%+1.5 相似文献
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菌丝培养条件的改进对香菇原生质体释放的促进效果 总被引:2,自引:0,他引:2
原生质体制备技术是通过体细胞杂交或基因转导进行种质改良的基础。探讨了菌丝培养条件对食用担子菌香菇原生质体释放的影响。在采用1.5%国产酶Lywallzyme的条件下,对接处物进行预切碎处理后,用MYG培养基培养可使原生持产量提高7倍,而对再生率影响有大。大MYG中添加1μg·g^-^1α-萘乙酸(NAA)使原生质体产量进一步提高1倍,酶解4h时产量达72×10^6/mL(0.1g湿菌丝),显著高于 相似文献
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以大白菜成青2号为材料,从萌发5天的无菌苗下胚轴分离原生质体,然后以附加8.2%葡萄糖,0.4mg/L2,4-D,0.4mg/LNAA和0.5mg/L6-BA的改良的KM8p液体培养基进行浅层培养,培养13天后,用含5.8%葡萄糖的KM8p培养基以1:1进行稀释,4~6周后,再生细胞分裂并形成愈伤组织,直径约0.4~0.5mm的愈伤组织经MS培养基(附加2%蔗糖,0.8%的琼脂,1.5mg/L6- 相似文献
7.
在成功建立麻悬浮细胞原生质体再生植株技术体系的基础上,对麻子叶原生质体的分离和培养进行了研究。以2℃冷藏或不冷藏的真叶初露期的绿色子叶,用3%CellulaseR-10,0.5%MacerozymeR-10的CPW0.6mol/L甘露醇混合溶液处理5h,原生质体产量最高,可达5×106个/g鲜重,原生质体以海藻酸钠包埋培养在附加2,4-D0.5或1.0mg/L,KT0.5mg/L的KM8p培养基上,仅发生少数几次分裂。 相似文献
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以大白菜成青2号为材料,从萌发5天的无菌苗下胚轴分离原生质体,然后以附加8.2%葡萄糖,0.4mg/L2,4-D,0.4mg/LNAA和0.5mg/L6-BA的改良KM8p液体培养基进行浅层培养.培养13天后,用含5.2%葡萄糖的KM8p培养基以1∶1进行稀释.4~6周后,再生细胞分裂并形成愈伤组织,直径约0.4~0.5mm的愈伤组织经MS培养基(附加2%蔗糖,0.8%的琼脂,1.5mg/L6-BA,0.5mg/LNAA和0.2mg/L2,4-D)诱导植株分化.59%的愈伤组织可分化形成芽,分化的芽经诱导生根发育成完整的植株.0.8mg/LIBA和400mg/L的羧苄青霉素对分化再生有促进作用. 相似文献
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利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌 总被引:4,自引:1,他引:4
报道了农抗5102产生菌同源菌株90-11、FR-008及WH-1相互之间融合的前期结果。3菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为32℃和1.0-1.5h,但所需溶菌酶量则有异;90-112-4mg/ml,FR-008为6mg/ml,WHoo 2mg/ml。将各菌株的原生质体在-20℃下冻存1个月内的再生率可维持在70%以上,2个月以内仍可达60%以上。以50%PEG1000诱导融合组合的融合频 相似文献
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报道了农抗5102产生菌同源菌株90-11、FR-008及WH-1相互之间融合研究的前期结果。3菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为32℃和1.0~1.5h,但所需溶菌酶量则有异:90-11为2~4mg/ml,FR-008为6mg/ml,WH-1为2mg/ml。将各菌株的原生质体在-20℃下冻存1个月内的相对再生率可维持在70%以上,2个月以内仍可达60%以上。以50%PEG1000诱导融合各组合的融合频率是,90-11×WH-1为10-2,FR-008×-90-11以及FR-008×WH-1均为10-3。 相似文献
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[目的]对金耳原生质体制备与再生体系进行研究。[方法]采用正交试验法筛选金耳原生质体制备和再生体系中酶体系、菌龄、温度、时间、渗稳剂的最佳用法。[结果]金耳原生质体的释放方式有三种类型:酶解初期的顶端释放、侧位释放和后期的原位释放。其最佳制备条件为:液体静置培养3d的菌丝体,在1%纤维素酶+1%蜗牛酶+1%溶壁酶的混合酶液中,以0.6mol/L蔗糖为渗稳剂,36℃酶解4h,得到原生质体制备率达1.76×107个/ml;最佳再生条件为:液体静置培养5d的菌丝体,在1.5%溶壁酶的酶液中,以0.6mol/L蔗糖为渗稳剂,33℃酶解3h,得到原生质体再生率达0.22%。[结论]为金耳的原生质体融合、紫外线诱变育种、基因工程研究等提供了有益支持。 相似文献
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[目的]对金耳原生质体制备与再生体系进行研究。[方法]采用正交试验法筛选金耳原生质体制备和再生体系中酶体系、菌龄、温度、时间、渗稳剂的最佳用法。[结果]金耳原生质体的释放方式有3种类型:酶解初期的顶端释放、侧位释放和后期的原位释放。其最佳制备条件为:液体静置培养3 d的菌丝体,在1%纤维素酶+1%蜗牛酶+1%溶壁酶的混合酶液中,以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,36℃酶解4 h,得到原生质体制备率达1.76×107个/ml;最佳再生条件为:液体静置培养5 d的菌丝体,在1.5%溶壁酶的酶液中,以0.6mol/L蔗糖为渗稳剂,33℃酶解3 h,得到原生质体再生率达0.22%。[结论]为金耳的原生质体融合、紫外线诱变育种、基因工程研究等提供了有益支持。 相似文献
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采用正交试验法,对菌核侧耳原生质体制备再生条件进行优化。结果表明,菌核侧耳原生质体制备最佳条件为:取培养3d的菌丝体,以0.6mol·L-1甘露醇作为渗稳剂,在1.5%溶壁酶的酶液中,30℃酶解1h,其原生质体得率最高,可达1.19×107。最佳再生条件为:取培养9d的菌丝体,利用0.6mol·L-1的蔗糖作为渗稳剂,在1.0%L+2.0%C+1.0%S的酶液中,36℃下酶解4h,其原生质体的再生率最高,可达2.43%。 相似文献
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研究菌丝体培养时间、酶组合、酶浓度、酶解时间、酶解温度、稳渗剂类型、再生培养方式等对绿色木霉原生质体制备及再生的影响。结果表明,绿色木霉原生质体制备的优化条件为:菌丝体培养60h,用1.5%溶菌酶+0.5%蜗牛酶的混合酶液,在pH值6.0~6.5,30~35℃,酶解4h,以0.7mol/L甘露醇为稳渗剂,原生质体的产量可达1.68×107个/ml;原生质体再生的优化条件为:PDA为再生培养基,以0.5mol/L蔗糖为稳渗剂进行双层固体培养,原生质体的再生率为6.05%~6.12%。 相似文献
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高大环柄菇原生质体制备的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以高大环柄菇为出发菌株,对其原生质体制备条件进行研究,具体分析了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解时间和温度等因素对高大环柄菇原生质体产出量的影响。结果表明:采用液体发酵培养第5 d的菌丝体,以0.5 mol/L NaC l作渗透压稳定剂,加入1.5 g/L混合酶(即纤维素酶与蜗牛酶按1∶1混合)在30℃下酶解3.5 h,制备原生质体效果最佳,原生质体产出量可达6.1×107个/mL。 相似文献
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[目的]为蛹虫草各种药理机制及有效成分的研究提供试验依据。[方法]在其他条件不变的情况下,分别研究不同酶解液(单一酶和不同的组合酶)、不同菌龄(3、5、7、9、11 d)、不同酶解时间(1、2、3、4、5 h)、不同酶解温度(23、28、33、38、43℃)、不同酶解pH值(pH值4.92、5.29、5.91、6.47、6.98)以及不同渗透压稳定剂(浓度0.6 mol/L的MgSO4、KCl、甘露醇和葡萄糖)对蛹虫草原生质体制备结果的影响,确定制备蛹虫草原生质体的适宜条件。[结果]用浓度0.6 mol/L KCl配制成含1.0%纤维素酶和0.5%蜗牛酶的复合酶,在28℃、pH值5.91时,对培养9 d的菌丝体酶解3 h,得到的原生质体数量最多。[结论]为以后进行蛹虫草原生质体技术的深入研究和应用奠定了基础。 相似文献
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层出镰孢菌原生质体制备条件的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]研究层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)原生质体的最佳条件,建立高效制备层出镰孢菌原生质体制备的方法.[方法]通过对菌丝体菌龄、酶解液组合、酶解反应温度及酶解时间等影响因素进行优化,对层出镰孢菌原生质体的制备条件进行研究.[结果]菌块在CMC液体培养基中25℃培养分生孢子3 d后,过滤离心后转移至YEPD液体培养基中培养12 h,该菌丝最适于层出镰孢菌原生质体的制备;用1.2 mol/L KCl溶液配制含有5 mg/m L裂解酶、25 mg/m L崩溃酶、0.05 mg/m L溶壁酶的酶解液在30℃下对菌丝酶解1.5 h,此时原生质体的数量最大,为2.47×10~9个/m L.原生质体再生培养时,使用40%PTC溶液恢复细胞壁,在TB3液体培养基中30℃过夜培养,离心后与TB3固体培养基混合后倒入平板培养,原生质体再生率可达39.75%.[结论]通过对菌丝体菌龄、酶解液浓度、温度、酶解时间等条件的优化,可提高层出镰孢菌原生质体的产量及再生率,为进一步研究层出镰孢菌致病分子机制提供理论依据. 相似文献
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采用正交试验方法对美味蘑菇原生质体制备与再生最佳体系进行筛选,包括酶条件、渗透压稳定剂、菌龄、酶解的时间及温度。结果表明,原生质体最佳制备条件为液体静置培养12d菌丝体,0.6mol·L-1NaCl作为渗透压稳定剂,在2%溶壁酶和3%蜗牛酶作用下,28℃酶解3h,原生质体制备率为3.6×106个·mL-1;最佳再生条件为液体静置培养12d菌丝体,0.6mol·L-1MgSO4·7H2O作为渗透压稳定剂,在2%溶壁酶和1%蜗牛酶作用下,35℃酶解1.5h,原生质体再生率为3.01%。 相似文献
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茶薪菇原生质体制备条件的分析 总被引:2,自引:0,他引:2
以茶薪菇为出发菌株,对其原生质体制备条件进行研究,具体分析了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解时间和温度等因素对茶薪菇原生质体产出量的影响。结果表明:采用液体发酵培养第5 d的菌丝体,以0.4 mol/L KC l作渗透压稳定剂,加入0.20%混合酶(纤维素酶与蜗牛酶按1∶1混合)在25℃下酶解3 h,制备原生质体效果最佳,原生质体产出量可达2.5×107个/mL。 相似文献