鸡柔嫩艾美耳球虫对宿主细胞凋亡的影响

为了研究柔嫩艾美耳球虫入侵与宿主细胞之间的相互关系,用纯化的柔嫩艾美耳球虫子孢子与MDBK细胞共培养,使球虫子孢子入侵MDBK（Madin-Darby bovine kidney）细胞,用终浓度6%乙醇进行凋亡诱导,通过Annex-in V/PI双荧光染色法和流式细胞术（FCM）对MDBK细胞凋亡水平进行检测。试验结果证明子孢子入侵细胞后,有子孢子入侵的细胞凋亡诱导显著被抑制（P〈0.05）,而未有子孢子入侵的细胞相继被凋亡诱导剂诱导凋亡。进一步揭示柔嫩艾美耳球虫子孢子具有独特的机制来延长宿主细胞的存活时间来确保它们能在细胞中存活并发育。     

抗堆型艾美耳球虫子孢子单链抗体的构建及表达

应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子抗原的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,通过在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至表达载体pET28a( )载体中进行表达,用Ni-NTA的金属亲和层析法进行纯化,通过SDS-PAGE和ELISA测定其纯度和生物学活性.电泳结果分析表明重组蛋白的相对分子量为32kDa,纯度为94%;ELISA反应结果证明该单链抗体保持了单克隆抗体的生物学特性,并能与堆型艾美耳球虫子孢子抗原发生特异性反应.     

几种常见试剂对柔嫩艾美耳球虫卵囊的漂浮效果

为了研制经济环保的新型鸡球虫卵囊漂浮剂,试验配制了不同浓度的蔗糖溶液,对柔嫩艾美耳球虫卵囊进行漂浮试验。结果显示:0.9～1.2 mol/L的蔗糖溶液对球虫卵囊的漂浮效果较好,漂浮率达92%以上,卵囊沉淀时应将蔗糖溶液稀释至0.3 mol/L以下。试验还选择了几种实验室常见试剂,配制成密度在1.15～1.20 g/mL之间的溶液进行柔嫩艾美耳球虫卵囊漂浮回收及孢子化试验,结果显示40%磷酸氢二钾溶液可以替代饱和食盐水和蔗糖溶液用于鸡球虫卵囊的漂浮纯化。     

细胞凋亡对柔嫩艾美耳球虫入侵的影响

为了研究球虫与宿主细胞间相互关系,利用含有6%乙醇的DMEM完全培养基培养对MDBK细胞进行凋亡诱导,通过膜联蛋白V(Annexin V)/PI染色法、HE染色法和吖啶橙染色法来鉴定MDBK细胞的凋亡情况。蔗糖密度梯度离心法获得的柔嫩艾美耳球虫子孢子与诱导凋亡的细胞共培养1 h后,利用HE和吖啶橙染色法来研究子孢子入侵细胞的状况。结果显示,在诱导凋亡的细胞中,没有发现柔嫩艾美耳球虫的子孢子,对照组未诱导凋亡的细胞中有子孢子入侵。表明球虫无法入侵诱导凋亡的细胞,进一步揭示了球虫在入侵过程中可能存在的识别机制和入侵机制,为将来开发新疫苗和新药物提供了基础数据。     

科技动态

探索防治球虫病的新途径 日本生物科学研究所的大永博资和石井俊雄,发现雏鸡艾美耳球虫免疫血清,能增强雏鸡腹腔巨噬细胞,对艾美耳球虫子孢子和裂殖子的吞噬功能。 给两周龄的雏鸡接种鸡艾美耳球虫卵囊,制备免疫血清。在含有20％热灭活免疫血清的119号培养基中,子孢子接种后     

堆型艾美耳球虫早熟减毒株子孢子体外脱囊试验

堆型艾美耳球虫早熟减毒株子孢子体外脱囊条件为0.75％胰酶,5％鸡胆汁,在38—40℃水浴箱内孵育2小时,脱囊率为94％。     

柔嫩艾美耳球虫各阶段虫体纯化方法的改进

本文报道了改进的柔嫩艾美耳球虫各阶段虫体纯化方法。用胃蛋白酶消化盲肠道组织，铜筛过滤除去大颗粒杂质后，以1．1mol·mL－1蔗糖离心漂浮卵囊，然后用小于0．5mol·mL－1蔗糖溶液反复漂洗，最后以5％次氯酸钠消毒处理，获得了大量纯化柔嫩艾美耳球虫卵囊。孢子化卵囊经研磨，消化，游离出子孢子后，过DEAE-纤维素52层析柱，以0．05mol·mL-1，Tris－HCl，（pH＝80，0．15mol·mL1-NaCl）洗脱，层析往高5cm，洗脱液水柱高3cm，流速为2mL·min－1，纯化出了子孢子。取人工感染球虫鸡的120h后的盲肠，游离出第二代裂殖子，铜筛过滤后，过柱方法同前，纯化出了第二代裂殖子。结果证明本法分离的子孢子和第二代裂殖子活性好，回收率达87％。     

柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫在鸡胚培养和鸡肾细胞中的发育

采用体外脱囊的方法,将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和堆型艾美耳球虫(E.aceroulina)的子孢子分别接种于9日龄 SPF 鸡胚的尿囊腔和鸡肾原代细胞中,置40～41℃恒温箱中培养.E.tenella 子孢子接种 SPF 鸡胚尿囊腔后,24h 后发现早期的第一代裂殖体;34h 后可观察到成熟的第一代裂殖体和裂殖     

亚硝基谷胱甘肽对鸡球虫脱囊的影响

为了解胆酸盐浓度、作用时间两种因素对亚硝基谷胱甘肽——GSNO处理鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊脱囊的影响,试验采用L9(34)正交试验方法,通过镜检子孢子脱囊率来确定鸡球虫卵囊经GSNO处理后体外脱囊的最佳条件。结果表明,在胆酸盐浓度为0.75%,作用时间为2 h时,GSNO处理孢子化卵囊的脱囊率最高。     

饱和食盐水漂浮鸡球虫卵囊的用量和处理时间研究

饱和食盐水是球虫卵囊分离纯化常用试剂,为降低鸡球虫病活疫苗生产成本,试验比较了不同用量的饱和食盐水对柔嫩艾美耳球虫卵囊的漂浮效果,同时研究了饱和食盐水处理柔嫩艾美耳球虫卵囊对其孢子化的影响。结果表明:饱和食盐水的使用量并非越多越好,4～6倍体积的饱和食盐水可获得最佳漂浮效果,且饱和食盐水处理卵囊的时间不宜超过30 min。     

三倍体毛白杨叶片再生体系建立研究

以三倍体毛白杨叶片为外植体,筛选适宜遗传转化叶片的诱导分化培养基和生根培养基,确定转化体最佳选择压浓度和抗生素浓度。结果表明:叶片诱导分化培养基以MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L附加1.5%蔗糖、0.6%琼脂效果最好,最佳生根培养基为1/2MS基本培养基附加IBA 0.4 mg/L、1.5%蔗糖、0.6%琼脂。选择压浓度以50 mg/L卡那霉素对叶片分化和嫩茎生根效果显著。培养基中附加300 mg/L的羧卞青霉素不仅有效的抑制农杆菌的生长,而且还对分化起促进作用。     

海枫藤花粉块的离体萌发试验研究

通过对海枫藤花粉块的离体萌发试验研究结果表明：不同蔗糖浓度、不同激素、不同花期海枫藤花粉块的萌发率不同,以蔗糖浓度为10％,含15mg／L6-BA,初花期的花粉块萌发率最高。     

蔗糖脂肪酸酯复合膜保鲜甘薯的研究

利用蔗糖脂肪酸酯、海藻酸钠和山梨酸钾按照L9(33)正交试验制作了不同配比的蔗糖脂肪酸酯复合膜,对甘薯进行涂膜保鲜,结果表明,蔗糖脂肪酸酯复合膜的膜特性良好,可有效保持甘薯的感官质量,降低甘薯的失重率和呼吸速率,减少甘薯可滴定酸含量、可溶性固形物含量和抗坏血酸(Vc)含量的损失;蔗糖脂肪酸酯的保鲜效果达到显著水平,海藻酸钠和山梨酸钾的保鲜效果显著性不太明显;蔗糖脂肪酸酯复合膜的最佳配比为蔗糖脂肪酸酯质量分数2%、海藻酸钠质量分数0.4%及山梨酸钾质量分数0.07%.     

新城疫病毒纯化方法的比较研究

为了比较研究红细胞吸附释放法、PEG-6000沉淀法和超速离心法对新城疫病毒的纯化效果,将含有NDV的鸡胚尿囊液分别用上述3种方法处理,并测定血凝(HA)效价。结果表明,红细胞吸附释放法中采用50%的醛化红细胞纯化病毒效果最佳;PEG-6000沉淀法中,用9%的PEG-6000加1%NaCl处理病毒后再沉淀2~4 h效果最佳;采用超速离心法纯化的病毒主要分布在40%和50%蔗糖区带之间。3种方法比较,以超速离心法效果最好,红细胞吸附释放法和PEG-6000沉淀法纯化效果差异不大。     

糖分对三角紫叶酢浆草叶片组培苗形成的影响

以三角紫叶酢浆草叶片为外植体,探讨了糖的种类及用量对其组培苗分化的影响。结果表明:蔗糖效果最好,葡萄糖次之,可溶性淀粉的效果最差;浓度3%的蔗糖最有利于芽的诱导和不定根的分化,最佳培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+IBA0.1 mg/L+蔗糖3%。     

Isopycnic separation of subcellular components from poliovirus-infected and normal HeLa cells

A rapid method for determining the density of ribonucleoprotein particles and complexes has been developed. The method involves glutaraldehyde fixation of sucrose gradient fractions and immediate centrifugation for 5 hours through preformed cesium chloride gradients. There is little or no aggregation of particles, so that components which co-sediment in sucrose gradients are resolved by the cesium chloride gradient. By this method the densities of HeLa cell ribosomes, polyribosomes, and subribosomal particles have been determined. Furthermore, the poliovirus replication complex has been separated from polyribosomes and its density has been found to be unaffected by treatment with ethylene-diaminetetraacetic acid.     

Density-Gradient Separation of Organic and Inorganic Particles by Centrifugation

Aqueous suspensions of particulate organic and inorganic material were centrifuged in a 2-bromo-ethanol density gradient. The degree of separation with this new technique is superior to that achieved with sucrose density gradients.     

培养条件对黄绿木霉菌抑制稻瘟病菌能力的影响

利用生长速率抑制法测定不同培养基培养黄绿木霉菌所得发酵液对稻瘟病菌的生长抑制率,比较黄绿木霉菌发酵液抑制稻瘟病菌能力的变化。结果表明,PD液体培养黄绿木霉菌可以获得有较强抑菌能力的代谢物质,且蔗糖和乳糖也可做为碳源。培养96h至120h时抑菌能力达到最高。     

不同因素对淮山茎尖愈伤组织诱导的影响

以3个淮山品种为材料,比较不同培养基及培养条件对淮山茎尖愈伤组织诱导的影响。结果表明,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂4.0 g/L是诱导淮山茎尖愈伤组织较好的培养基,诱导率达88.9%;光照与黑暗两种不同的培养条件对愈伤组织的诱导无显著差异。