FAK在宫颈癌中的表达及临床意义

用免疫组织化学SP方法和实时定量PCR方法检测47例宫颈癌及35例正常宫颈组织中黏着斑激酶(FAK)的mRNA和蛋白的表达情况,探讨其临床意义。结果表明:1 FAK在宫颈癌组织中比在正常宫颈组织中表达高(P0.05);2 FAK在宫颈癌FIGO临床分期Ⅲ~Ⅳ期中比I~Ⅱ期表达高(P0.05);3 FAK在宫颈癌浸润深度1/2组织中较浸润深度≤1/2组织中表达高(P0.05);4伴有淋巴结转移组的宫颈癌组织比不伴有淋巴结转移组FAK的表达量显著增高(P0.05)。说明FAK的表达随宫颈癌病变的发展而逐渐增高,可能参与了宫颈癌的发生发展、侵袭、转移过程,可作为判定早期宫颈癌向中晚期进展的高危指标,为宫颈癌的早期诊断及预后判断提供新的分子标靶。     

宫颈癌演变过程中PTEN、survivin基因的表达及其意义

应用qRT-PCR及Western blot技术检测不同阶段宫颈病变组织中PTEN和survivin的表达状况,探讨其临床意义。结果表明:①PTEN mRNA在宫颈癌、CINⅢ组织中的表达显著低于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ及CINⅠ组织中的表达亦低于正常宫颈组织(P0.05);survivin mRNA在宫颈癌、CINⅢ组织中的表达显著高于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ组织中的表达亦高于正常宫颈组织(P0.05),而CIN I组织中则与正常宫颈无差异(P0.05)。②PTEN蛋白在宫颈癌、CINⅢ、CINⅡ、CIN I组织中显著低于正常宫颈组织(P0.01),并随着病变程度的增加而减弱。survivin蛋白在宫颈癌、CINⅢ组织中显著高于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ中的表达高于正常宫颈组织(P0.05),而在CINⅠ组织中则与正常宫颈无差异(P0.05)。说明PTEN和survivin基因在宫颈从癌前病变向宫颈癌演变过程中发挥重要作用,有望成为宫颈癌分子诊断与分子靶向治疗的新靶点。     

缺氧诱导因子调节的靶基因在宫颈癌组织中的表达

目的：探讨缺氧诱导因子在宫颈癌发生发展过程中的作用。方法：应用免疫组织化学SP染色法观察正常宫颈28例、宫颈上皮内瘤样变（CIN）32例、浸润性宫颈鳞癌98例中缺氧诱导因子-1a（hypoxia inducible factor-1a,HIF-1a）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的表达。结果：HIF-1a在正常宫颈、宫颈上皮不典型增生和浸润性宫颈癌组织中的表达分别为10.71%、37.50%、76.53%;VEGF的表达分别14.29%、46.88%、70.41%;P-gp的表达分别为21.43%、37.50%、54.08%。HIF-1a和VEGF随着宫颈病变的发展表达逐渐升高（从正常宫颈到宫颈上皮非典型增生再到浸润性宫颈鳞状上皮癌）,且各组间差异有显著性（P〈0.05）;P-gp的表达也逐渐升高,其在正常宫颈上皮的表达与浸润性宫颈癌组织中的表达差异有显著性（P〈0.05）,但其在正常组和CIN组以及CIN组和浸润性宫颈癌组中的表达差异较小,无显著性意义（P〉0.05）。相关分析表明,VEGF的表达与HIF-1a的表达显著相关（r=0.585,P〈0.01）,而P-gp的表达与HIF-1a的表达无相关性（P〉0.05）。结论：HIF-1a在宫颈癌组织中过度表达与宫颈癌的发生发展相关,这可能是通过调控VEGF的表达实现的。     

黏蛋白在良、恶性子宫颈病变中的表达及其临床意义

采用免疫组织化学技术检测黏蛋白(MUC)1、MUC2、MUC4、MUC5AC和MUC20在158例良、恶性宫颈病变中的表达,并探讨其临床意义。结果表明:1正常宫颈上皮高表达MUC1、MUC4和MUC5AC,部分表达MUC20,正常和良性宫颈组织不表达MUC2。2从慢性宫颈炎→宫颈上皮内瘤变→宫颈鳞癌,MUC1、MUC4和MUC20表达差异显著(P0.05)。与正常宫颈相比,宫颈腺癌中MUC2表达增加(P0.05),且MUC1和MUC5AC表达减少(P0.05)。3在宫颈鳞癌中,MUC1的表达与癌组织的浸润深度和临床分期有关(P0.05);MUC4和MUC20的表达与其分化程度和临床分期有关(MUC4,P0.05;MUC20,P0.01)。4 MUC1、MUC4和MUC20三者呈显著相关(P0.05)。黏蛋白可能参与宫颈癌的发生发展,其在宫颈良性病变和宫颈癌的表达不同,有利于宫颈不同组织类型的鉴别诊断和预后判断。     

人类表皮生长因子受体2蛋白在宫颈癌组织中的表达及意义

目的观察宫颈癌组织中人类表皮生长因子受体2（HER-2/neu）蛋白表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测20例正常宫颈组织、30例宫颈上皮内瘤样病变（CINⅠ-Ⅲ）和50例宫颈癌组织中HER-2/neu蛋白表达。结果宫颈癌组织中HER-2/neu蛋白表达显著高于宫颈上皮内瘤样病变（P〈0.01）,正常宫颈组织未见阳性表达;宫颈癌组织中HER-2/neu蛋白表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期密切相关（P〈0.05）。结论 HER-2/neu蛋白表达上调可能在宫颈癌发生发展中起重要作用。     

Oct4和Sox2在食管鳞癌组织中的表达及相关性探讨

目的探讨Oct4和Sox2在食管鳞癌组织中的表达及二者之间的相关性。方法应用免疫组化SP法和流式细胞术检测98例食管鳞癌标本及43例正常食管黏膜组织中Oct4和Sox2的表达情况,分析其与各临床病理特征的关系及二者之间的相关性。结果食管鳞癌组织Oct4和Sox2的阳性表达率均高于正常组织(P0.05);流式细胞术结果显示,癌组织中Oct4和Sox2的蛋白相对含量也明显高于正常组织(P0.05)。随着分化程度的降低,Oct4和Sox2的表达明显升高,即二者与食管癌组织的分化程度呈负相关(P0.05),且Oct4和Sox2的表达与TNM分期、有无外膜浸润明显相关(P0.05),而与患者年龄、性别无关。食管鳞癌组织中Oct4和Sox2表达呈正相关(r=0.295,P=0.003)。结论 Oct4和Sox2在食管鳞癌的发生、发展过程中起重要作用,有望成为食管癌生物治疗的新靶点。     

粘附分子CD44v6在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:了解粘附分子CD44v6在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学法(SP法)检测CD44v6在69例宫颈癌组织及20例正常宫颈组织中的表达。结果:正常宫颈组织中的CD44v6呈阴性表达。69例宫颈癌组织中CD44v6的阳性表达率为68.1％(47/69)。CD44v6的阳性表达在不同的病灶大小、临床分期、细胞分化程度及有无淋巴结转移的宫颈癌组织中差异有统计学意义(P<0.05～0.01);在不同的病理类型及年龄的患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论;CD44V6可能在宫颈癌的生长、浸润及转移过程中起重要作用,可望作为反映宫颈癌恶性潜能的新指标。     

瘢痕疙瘩皮损中抑制型SMAD mRNA的低表达

用定量Real-time PCR(LightCycler)法分别检测了瘢痕疙瘩,正常瘢痕及正常皮肤组织中不同类型的SMADs(SMAD2、3、4、6、7)mRNA的表达水平.结果显示抑制型SMADs(SMAD6、SMAD7)的mRNA水平在瘢痕疙瘩的组织中明显低于正常瘢痕(P＜0.01,P＜0.05)及正常皮肤组织(P＜0.01,P＜0.001).然而,其它类型的SMADs(SMAD2、3、4)mRNA的表达在瘢痕疙瘩,正常瘢痕以及正常皮肤组织中均无明显差异(P＞0.05).表明瘢痕疙瘩的皮肤组织中存在有抑制型SMADs(SMAD6、SMAD7)的mRNA水平表达的下调,此结果提示缺乏抑制型SMAD的负反馈抑制在瘢痕疙瘩的发病中可能起着重要的作用.     

nm23基因在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的 :探讨nm2 3基因表达与宫颈癌转移及预后的关系。方法 :采用免疫组化方法 ,检测经病理证实的 30例正常宫颈上皮组织 (对照组 )及 5 5例宫颈癌组织 (实验组 )中nm2 3的表达水平。结果 :(1)在正常宫颈组织中 ,2 9例呈nm2 3高表达 (96 .7% ) ,仅 1例呈nm2 3低表达 (3.3% ) ,在宫颈癌组织中 19例呈nm2 3高表达 (34.4 % ) ,36例为nm2 3低表达 (6 5 .6 % ) ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。 (2 )nm2 3在宫颈癌临床分期晚、细胞分化程度差、有转移、复发及预后差的患者中表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :nm2 3的表达可作为反映宫颈癌恶性潜能的指标之一。     

p27基因在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的：探讨肿瘤抑制基因p27在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学方法（SP法）检测p27基因在62例官颈癌组织和20例正常官颈组织中的表达。结果：62例宫颈癌组织中,p27的阳性表达率为38．7％（24／62）;p27的阳性表达与宫颈病灶大小、临床分期、细胞分化程度、转移及预后有密切关系（P〈0．01或〈0．05）;与宫颈癌的病理类型及年龄无关（P〉0．05）。结论：p27基因的表达与宫颈癌的生长、浸润及淋巴结转移有关,其表达水平的高低可作为判断宫颈癌预后的重要指标之一。     

CHRNA7基因荧光定量PCR检测方法的建立

为了检测烟碱型乙酰胆碱受体(nicotine acetylcholine receptors,nAChRs)α7亚基基因(CHRNA7)的表达,笔者根据人源CHRNA7基因序列设计引物,PCR扩增CHRNA7基因,亚克隆到pMD-18T载体中后,测序鉴定并制备重组质粒,以梯度稀释的重组质粒为模板,进行荧光定量PCR来绘制标准曲线,并进行灵敏度和重复性实验,成功建立了检测CHRNA7基因的荧光定量PCR方法。该方法最低可检测10~1 copies·μL~(-1),且重复性良好,在10~4,10~5,10~6 copies·μL~(-1)时,5次重复的变异系数分别是1.22%,1.90%,2.63%。此外,还对人宫颈癌细胞SiHa和人正常宫颈细胞Ect1/E6E7中α7 nAChR亚基基因表达量进行检测,结果显示,α7 nAChR亚基在SiHa细胞系的表达明显低于其在Ect1/E6E7细胞系中的表达(P=0.015)。     

鸭发育早期胸肌和腿肌NFAT5 mRNA差异表达及其与生长发育的相关性

为了研究不同鸭种胚胎期和出雏早期骨骼肌(胸肌和腿肌)NFAT5基因mRNA表达规律及其与生长发育的相关性,本试验克隆了鸭NFAT5基因cDNA部分片段,并运用荧光绝对定量PCR技术检测了生长速度差异较大的高邮鸭和金定鸭13、17、21、25和27胚龄及7日龄胸肌和腿肌中NFAT5 mRNA的表达水平。结果显示,胸肌和腿肌NFAT5 mRNA在2种鸭中均具有相似的表达模式,均在13胚龄时表达量达最高,且均显著高于其他各胚龄和7日龄(P0.05),而出雏后7日龄的表达水平显著高于27胚龄(P0.05)。相关性分析结果显示,2种鸭胸肌和腿肌NFAT5 mRNA表达量与其胸肌质量、腿肌质量和体质量均呈极显著负相关(P0.01),而与组织中IGF-I mRNA的表达量呈极显著正相关(P0.01)。表明鸭胸肌和腿肌NFAT5与IGF-I存在协同效应,两者可能共同参与了对骨骼肌生长发育的调节。     

miR-204在非小细胞肺癌患者中的表达及其对SIRT1的靶向调控作用

目的 研究miR-204在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中表达的临床意义及其对SIRT1的靶向调控作用.方法 收集39例原发性NSCLC患者的癌组织和对应癌旁组织标本.实时荧光定量PCR检测组织标本中miR-204的表达水平;并分析其与NSCLC临床病理学特征的关系.将人非小细胞肺癌细胞株A549分别转染miR-204的模拟物或抑制物,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,westem blot检测其潜在靶点基因SIRT1的表达.结果 癌组织中miR-204的表达量为(2.12±1.17),明显低于癌旁组织中的(3.08±1.46),P＜0.01.miR-204的表达水平与肿瘤的临床分期以及肿瘤大小有关(均P＜0.05),但与患者年龄、性别、吸烟史、分化程度、组织类型及淋巴转移情况无关(P＞0.05).A549细胞转染miR-204的抑制物后,细胞的增殖明显增强,SIRT1的表达上调;而转染miR-204模拟物则呈反向变化.结论 miR-204在NSCLC组织中呈低表达,并与患者的临床分期以及肿瘤大小有相关,其可能是通过靶向调控SIRT1而在NSCLC的发生发展中起重要作用.     

MiR-34a在人鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨miR-34a在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法收集30例鼻咽癌组织标本,qRTPCR检测鼻咽癌组织中miR-34a表达量,对miR-34a表达与肿瘤临床病理特征及患者预后相关性进行分析,探讨miR-34a表达是否影响鼻咽癌细胞的迁移及侵袭能力。结果 30例鼻咽癌组织中miR-34a的相对表达量为(2.367±0.235),而对应癌旁组织为(5.399±0.463);其中22例鼻咽癌组织(73.33%)中miR-34a的相对表达量低于对应癌旁组织,差异有统计学意义(P0.001);存在淋巴结转移及具有较高的TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)的鼻咽癌组织中miR-34a的表达更低(P0.01)。结论 miR-34a在鼻咽癌组织中表达下调,并与患者不良临床病理特征相关,上调miR-34a表达可能会抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,miR-34a基因可能作为一种抑癌基因在鼻咽癌的发生和发展中发挥重要作用。     

CD105和VEGF在宫颈癌的表达及临床意义

目的：探讨CD105在宫颈癌新生血管中的表达及其作为肿瘤新生血管标记物的临床价值。方法：采用鼠抗人CD105单克隆抗体（Mab）,应用免疫组织化学技术检测40例宫颈癌手术切除标本及40例对照组织的微血管密度（MVD）,并以血管内皮生长因子（VEGF）的表达作相关性分析。结果：MVD及VEGF在宫颈癌组织与对照组织间表达的差异均有显著性（P〈0.01）;VEGF在宫颈癌组织中的表达与CD105的表达呈显著正相关（P〈0.01）;宫颈癌组织MVD和VEGF的表达均与宫颈癌的淋巴结转移,远处转移有关（P〈0.05）。结论：CD105在宫颈癌组织新生血管有良好的表达,可作为宫颈癌新生血管有价值的标记物。以CD105测得的MVD可能是与肿瘤生长、转移及预后有关的一种重要指标。     

TGFBI和TCTP在食管癌组织中的表达及肿瘤耐药相关性

目的探讨转化生长因子β诱导基因(transforming growth factor beta induced gene,TGFBI)和翻译调控肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)在食管鳞癌组织中的表达与临床病理因素的联系及其与肿瘤耐药性之间的相关性。方法免疫组化SP法检测90例食管鳞癌标本及33例正常食管黏膜组织中TGFBI和TCTP的表达情况,分析二者与食管癌耐药的关系及二者之间的相关性。结果食管鳞癌组织中TGFBI和TCTP的阳性表达率均高于正常组织(P0.05);分化程度越低,TGFBI和TCTP的阳性表达越明显,呈负相关性(P0.05);且TGFBI和TCTP的表达与肿瘤TNM分期和淋巴结转移有关(P0.05),而与患者年龄、性别等无关;食管鳞癌组织中TGFBI和TCTP表达呈正相关(P0.05)。结论联合检测TGFBI和TCTP可为进一步研究食管鳞状细胞癌逆转耐药机制和判断患者预后提供理论依据。     

干扰E2F7对C2C12成肌细胞增殖的影响

【目的】探究转录因子E2F7在骨骼肌细胞发育过程中的作用。【方法】以C2C12成肌细胞为研究对象,通过设计小干扰RNA干扰C2C12成肌细胞中E2F7的表达,分为干扰组和对照组,并利用RT-PCR、CCK-8和EdU等技术检测在C2C12成肌细胞中干扰E2F7后对成肌细胞增殖的影响。【结果】E2F7 mRNA表达水平在C2C12成肌细胞增殖期极显著高于分化期(P0.01);与对照组相比,干扰组的细胞活率和新生细胞比率皆极显著高于对照组(P0.01);干扰E2F7显著提升了C2C12成肌细胞中Cyclin E的表达水平(P0.05),极显著促进Cyclin D和CDK4的表达(P0.01);并且干扰E2F7可显著促进E2F2 (P0.05)和极显著促进E2F1及E2F3的表达(P0.01),同时极显著促进与成肌细胞增殖相关microRNAs (miR-7、miR-25、miR-27和miR-92a)的表达(P0.01)。【结论】干扰E2F7可促进C2C12成肌细胞的增殖,E2F7可能是通过调控经典E2Fs信号通路和成肌细胞增殖相关microRNA发挥作用。     

湖羊BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数关系的研究

 【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36 h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组（P＜0.01）,且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组（P＜0.01）,而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异（P＞0.05）;相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r = 0.741,P ＜0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。     

鸡miR-181a组织的表达谱及其转录调控区域

【目的】分析鸡miR-181a的转录起始位点,并分析其在1日龄和成年鸡不同组织中的表达谱,以期为研究miR-181a的功能奠定基础。【方法】采用qPCR技术构建miR-181a 在1日龄和成年鸡肝脏、脾脏、肺、小肠、大脑、小脑、下丘脑、脑干、胸腺、心脏和肾脏组织中的表达谱。用version(1.83)分析miR-181a的保守性,并采用ENCODE数据库进行miR-181a转录起始位点和启动子区域的分析。【结果】①采用qPCR检测miR-181a在鸡下丘脑中的表达量和高通量测序的结果一致,1日龄下丘脑中的表达量显著低于成年鸡的表达量（P＜0.05）;②miR-181a 在11个组织中均有表达,且在1日龄和成年鸡脾脏、肺、小肠、大脑、小脑、下丘脑、脑干、胸腺、心脏和肾脏组织的表达量差异显著（P＜0.05）,而在肝脏中表达量的差异不显著（P＞0.05）;③miR-181a的前体miR-181a-1上游区域有一个启动子区和一个潜在的转录起始位点;④miR-181a-1的转录调控区域内存在的多个转录因子,转录因子主要有NFKB,c-Fos等。【结论】鸡miR-181a的表达有组织和时序差异,其成熟序列在脊椎动物中十分保守,上游有一个转录起始位点及启动子区。     

GALNTL5基因在不同月龄湖羊附睾中的表达模式及其miRNA的预测

[目的]本文旨在探究不同发育阶段湖羊附睾(头、体、尾)中GALNTL5(polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase-like protein 5)的表达规律及其microRNA(miRNA)预测。[方法]选取3、9、24月龄(M)雄性湖羊各5只,屠宰后采集附睾(头、体、尾)组织。采用RT-qPCR和Western blot技术检测不同发育阶段湖羊附睾中GALNTL5 mRNA和蛋白表达水平;用免疫组化技术对其进行定位分析;用RNAhybrid和miRanda 2种软件分别预测GALNTL5对应的miRNA并取交集,同时检测候选miRNA在附睾尾中的表达规律。[结果]GALNTL5 mRNA和蛋白在附睾体、尾中表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P0.05);GALNTL5 mRNA在附睾头中表现为24 M显著高于3 M和9 M(P0.05),但3 M与9 M之间差异不显著(P0.05)。除了GALNTL5蛋白在9 M与24 M附睾尾中差异显著外,其余均差异不显著(P0.05);GALNTL5蛋白在附睾头、体中的表达规律一致;GALNTL5定位于附睾主细胞、基细胞及精子中。预测获得11个候选miRNA,按评分高低进行排序,选取miR-487a-5p、miR-485-5p、miR-329b-5p和miR-27a这4个miRNA进行验证,发现miR-487a-5p表达水平表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P0.05),而miR-485-5p和miR-27a呈现相反趋势。[结论]GALNTL5在精子成熟过程中扮演着重要的角色;miR-485-5p和miR-27a可能与GALNTL5存在靶向关系。